孕婦外周血胎兒有核紅細胞計數變化及其在不良妊娠結局預測中的應用

·臨床研究·

孕婦外周血胎兒有核紅細胞計數變化及其在不良妊娠結局預測中的應用

劉麗平1，水麗君2，龔瑞龍1，曹江霞1，黃秋香1，張元珍3

(1武漢市婦女兒童醫療保健中心，武漢430016；2安徽醫科大學第二附屬醫院；3武漢大學中南醫院)

摘要：目的觀察孕婦外周血胎兒有核紅細胞計數的變化，探討其在妊娠不良結局預測中的應用價值。方法收集87例孕12～18周孕婦的外周血，密度梯度離心法分離單個核細胞，采用PE-GPA /FITC-CD71單克隆抗體雙色標記胎兒有核紅細胞后進行流式細胞分析，追蹤妊娠結局并進行分析。結果妊娠結局正常者外周血中胎兒有核紅細胞百分比為0.89%±0.81%，妊娠結局不良者為3.25%±2.98%，兩者相比，P<0.05。以胎兒有核紅細胞百分比>3.79%作為截斷值，預測妊娠不良結局的敏感度為76.9%、特異度為64.3%。結論與妊娠結局正常的孕婦相比，妊娠結局不良孕婦孕12～18周時外周血胎兒有核紅細胞增多；對孕12～18周孕婦外周血胎兒有核紅細胞進行計數有助于不良妊娠結局的預測，其敏感度及特異度均較高。

關鍵詞：有核紅細胞；胎兒有核紅細胞；妊娠；孕婦；妊娠結局

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.012

中圖分類號：R713 文獻標志碼：B

基金項目：湖北省武漢市衛生和計劃生育委員會2014年立項課題。

收稿日期：(2015-07-13)

Fetus nucleated red blood cell count changes in peripheral blood of pregnant

women and its application in prediction of adverse pregnancy outcomes

LIULi-ping1, SHUI Li-jun, GONG Rui-long, CAO Jiang-xia, HUANG Qiu-xiang, ZHANG Yuan-zhen

(1WuhanMedicalandHealthCenterforWomen-Children,Wuhan430016,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the fetus nucleated red blood cell (NRBC) count changes in the peripheral blood of pregnant women and to investigate its application in prediction of adverse pregnancy outcomes.MethodsBlood samples were obtained from 87 pregnant women with the gestational age from 12 to 18 weeks, peripheral blood mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation and then we analyzed the cells marked with PE-GPA/FITC-CD71 monoclonal antibodies on the flow cytometer. Tracking the pregnancy outcomes, and their correlation between fetus nucleated red blood cell measurement and adverse pregnancy outcomes was analyzed.ResultsThe percentage of fetus NRBC in women with normal pregnancy outcomes was 0.89%±0.81%, 3.25%±2.98% in women with adverse pregnancy outcomes, and there was a significant difference between these two groups(P<0.05). We took fetus NRBC percentage >3.79% as the cutoff value to predict adverse outcomes of pregnancy, the sensitivity was 76.9%, and the specificity was 64.3%.Conclusions Compared with women with normal pregnancy outcomes, women with adverse pregnancy outcomes have a higher amount of fetus NRBC in the peripheral blood during the gestational age of 12-18 weeks. Measurement of fetus NRBC in maternal peripheral blood has a predictive role in adverse pregnancy outcomes, with a higher sensitivity and specificity.

Key words: nucleated red blood cells; fetus nucleated red blood cells; pregnancy; pregnant women; pregnancy outcome

通信作者：張元珍

正常妊娠的維持有賴于母胎免疫平衡的建立與穩定[1]。一旦該平衡失調，則會產生免疫排斥反應[2]，引起病理性妊娠，導致不良妊娠結局，包括流產、早產、妊娠并發癥、圍產期胎兒死亡等[3]。1969年Walknowska等首次報道從孕婦外周血中提取胎兒細胞進行產前診斷。隨后的研究[4,5]表明，胎兒有核紅細胞是最好的產前診斷細胞來源。但由于胎兒有核紅細胞在孕婦外周血中比例極低，故研究多集中在有核紅細胞的富集與分離上。本研究對部分孕12～18周孕婦的外周血中胎兒有核紅細胞進行了檢測，觀察其計數變化，追蹤妊娠結局，分析并探討孕婦外周血胎兒有核紅細胞計數在不良妊娠結局預測中的應用價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料選取2014年1～12月在武漢市婦女兒童醫療保健中心婦產科門診建冊并住院分娩的孕婦87例，年齡18～39歲，均為單胎妊娠，無其他疾病及合并癥，無輸血史，除隨機抽取的孕婦外，盡量納入具有潛在的不良妊娠可能的孕婦(包括肥胖、營養不良、抽煙史、不良孕產史、家族史、唐氏篩查高危、低社會經濟狀況等孕婦)。在孕婦知情同意的情況下，于孕12～18周抽取其外周血6 mL，注入EDTA抗凝管，輕輕搖勻，置4 ℃冰箱保存，2 h內進行細胞分離處理。

1.3妊娠結局觀察方法87例受檢孕婦接受定期產前檢查，對有潛在不良妊娠可能的孕婦要觀察有無妊娠期高血壓疾病、早產、胎兒生長受限、妊娠期糖尿病、胎盤早剝、胎兒窘迫、HELLP綜合征、妊娠期膽汁淤積綜合征、死胎、胎兒畸形、唐氏綜合征等。

1.4統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料比較用t檢驗，截斷值計算采用ROC曲線。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

受檢的87例孕婦中，妊娠結局正常者25例，妊娠結局不良者62例(妊娠期高血壓疾病27例、早產14例、胎兒生長受限8例、妊娠期糖尿病4例、胎盤早剝2例、胎兒窘迫2例、HELLP綜合征1例、妊娠期膽汁淤積綜合征1例、死胎1例、胎兒畸形1例、唐氏綜合征1例)。87例孕婦外周血中均檢出胎兒有核紅細胞，其百分比為0.03%～9.37%；其中妊娠結局正常者胎兒有核紅細胞百分比為0.89%±0.81%(0.03%～3.89%)，妊娠結局不良者為3.25%±2.98%(3.19%～9.37%)，兩者相比，P<0.05。ROC曲線顯示，以胎兒有核紅細胞百分比>3.79%作為預測不良妊娠結局的截斷值，該截斷值的敏感度為76.9%、特異度為64.3%。

3討論

母血中存在四種胎兒細胞，分別為滋養細胞、有核紅細胞、淋巴細胞和粒細胞。其中胎兒有核紅細胞具有完整的核物質，從而攜帶了完整的胎兒基因，且在妊娠期間持續存在于母血循環中。正常成人外周血不含有核紅細胞，因而胎兒有核紅細胞被學者們[7]認為是無創性產前診斷的最佳細胞來源。有研究者[8]發現，患妊娠期高血壓疾病的孕婦血漿中胎兒DNA的量比正常妊娠孕婦高，且在子癇發作前孕婦血漿中胎兒DNA水平有異常升高。Holzgreve等[9]研究發現，妊娠期高血壓疾病孕婦外周血中有核紅細胞數增多，并隨著疾病的嚴重程度的上升而升高。

在妊娠過程中，胎兒細胞可通過胎盤屏障進入母體外周血液循環并分布到母體全身各器官組織[10]。在正常妊娠中，含父系抗原的胚胎能夠逃逸母體細胞和體液免疫的攻擊；而在病理性妊娠中母胎免疫平衡被打破，導致免疫排斥反應的發生，引起血管內皮細胞病變[11]，導致胎盤損傷，更多的胎兒細胞會因此漏入母體循環。孕婦外周血中胎兒有核紅細胞數量與胎盤損傷之間存在一定的相關性[12]。但是胎盤損傷的程度難以量化，故本研究以母外周血中胎兒有核紅細胞的數量作為胎盤損傷的生物學標志，分析其與不良妊娠結局之間的關系，結果表明，孕12～18周孕婦的外周血中均可檢出胎兒有核紅細胞，妊娠結局不良者的胎兒有核紅細胞百分比明顯高于妊娠結局正常者，其中妊娠期糖尿病、胎兒生長受限、早產、胎盤早剝等孕婦外周血中胎兒有核紅細胞百分比升高更明顯；以孕婦外周血中胎兒有核紅細胞百分比>3.79%作為截斷值，其預測妊娠不良結局的敏感度為76.9%、特異度為64.3%。

妊娠期高血壓疾病、胎兒生長受限、胎盤早剝、HELLP綜合征等在發病機制方面有相似之處[13]。但是，這些疾病在臨床上發病較晚，其中較為常見的妊娠期高血壓疾病發生于妊娠中、晚期，最終累及胎盤、胎兒和孕婦各主要臟器，可導致胎兒發育遲緩、胎盤早剝、早產、產后出血等嚴重后果。但其發病因素可能在妊娠早期胎盤形成過程中就已存在，若能早期預測這些疾病的發生，或可進行早期干預，改善妊娠結局。本研究結果表明，檢測母體外周血中胎兒有核紅細胞數量變化，或可成為臨床上預測不良妊娠結局的有效手段。

此外，本研究還發現，胎兒有異常(如先天畸形、染色體異常)的孕婦外周血中也出現胎兒有核紅細胞增多的現象，其機制尚不清楚，有待進一步研究。

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