兩種結核菌培養基培養抗酸桿菌應用評價

黃菲菲

(蘇州工業園區婁葑醫院檢驗科　江蘇　蘇州　215000)

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兩種結核菌培養基培養抗酸桿菌應用評價

黃菲菲

(蘇州工業園區婁葑醫院檢驗科江蘇蘇州215000)

【摘要】目的：探討羅氏培養基與本實驗室自制羅氏培養基對抗酸桿菌檢測的效果。方法：本次選取痰標本40份，標準菌株10份，同時對羅氏培養基及實驗室自制羅氏培養基接種，記錄陽性出現時間，陽性率，污染率，生長時間，并展開不同培養基間的對比。結果：本次送檢的40份痰標本中，羅氏培養基陽性和實驗室自制羅氏培養基陽性均為7例，占17.5%，無明顯差異(P>0.05)。羅氏培養基污染率為5%，自制培養基污染率為15%，有統計學差異(P<0.05)。兩組出現陽性的時間即生長時間無差異(P>0.05)。但10份標準菌株在羅氏培養基上生長的時間明顯短于在自制培養基上生長的時間，有統計學差異(P<0.05)。結論：臨床針對結核菌，采用不同的培養基對抗酸桿菌培養，結果示貝索羅氏培養基在抗酸桿菌檢測效果上優于自制，降低了污染率，縮短了培養時間，具有非常重要的應用價值，有臨床有廣泛的實施前景，為結核病的防治提供了強有力的保障。

【關鍵詞】羅氏培養基；實驗室自制羅氏培養基；抗酸桿菌

結核病對人類健康構成了極大危害，目前診斷時，仍以抗酸桿菌分離培養為金標準，在早期發現和治療控制疾病上意義顯著。對合適的結核菌培養基進行選擇，對提高陽性率，降低污染率等具非常重要的價值。本次選取相關痰標本，分別采用羅氏培養基和實驗室自制羅氏培養基檢測效果展開對比，現總結結果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料 選取我院患者痰標本40例，H37RV質控菌株標準菌株10份。貝索羅氏培養基，本實驗室自制培養基。主要成份為新鮮雞蛋液、天門冬素、孔雀石綠、馬鈴薯粉。培養前對削尖化液處理，主要成分為氫氧化鈉、檸檬酸鈉、N-乙酰-L-半胱氨酸，依據《結核病診斷實驗室檢驗規程》配置。

1.2 方法 準備儀器和設備，包括曲線控制恒溫培養箱，蒸汽血清凝固器等。用消化液消化痰標本15min后，取緩沖液加入中和，行3000r/min離心操作，取沉淀在1支貝索羅氏培養基和1支實驗室自制羅氏培養基中接種，為0.2ml接種量；均對標準菌株稀釋1個麥氏單位后，在孵育箱(37℃)中放置培養，每日行1次觀察，對菌落肉眼可見的時間記錄。出現菌落生長情況，立即實施涂片染色鏡檢，對是否為抗酸桿菌進行確定，若為抗酸桿菌，即按培養陽性判斷。無菌落生長5d，按陰性統計。

1.3 統計學分析 統計學軟件采用SPSS13.0版，組間計量數據采用(x±s)表示，計量資料行t檢驗，計數資料行X2檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2.結果

本次送檢的40份痰標本中，羅氏培養基陽性和實驗室自制羅氏培養基陽性均為7例，占17.5%，無明顯差異(P>0.05)。羅氏培養基污染率為5%，自制培養基污染率為15%，有統計學差異(P<0.05)。兩組出現陽性的時間即生長時間無差異(P>0.05)。但10份標準菌株在羅氏培養基上生長的時間明顯短于在自制培養基上生長的時間，有統計學差異(P<0.05)。見表1。

表1　兩種培養基培養效果比較 (x±s，d)

注：*P<0.05。

3.討論

3.1 結核病診斷中抗酸桿菌分離培養價值

在痰標本中，抗酸桿菌與各種雜菌同時存在，要將抗酸桿菌分離，需將其他痰標本中的雜菌殺死，且要盡量多的抗酸桿菌存活。在實施抗酸桿菌分離培養時，存在污染率情況的高低，與培養基的選擇、前處理方法、操作技術、標本性狀等因素有密切關聯。前處理應用藥物有較高的濃度，處理時間越長，越可起到較好的殺菌效果，降低了雜菌污染率，但相對的，也可對抗菌桿菌的生長抑制，可能對陽性率產生影響。結核病診斷中，抗酸桿菌分離培養意義顯著，是早期發現結核病的重要措施。雖多項報道均顯示，相較固定培養基，在抗酸桿菌檢測中，液體培養效果更為明顯，但液體培養基及儀器設備昂貴，在基層實驗室工作開展中不適合應用。本次選取的貝索羅氏培養基，無需配合自動化儀器設備，價格低，為臨床普及提供了較好條件。結核病在臨床屬一種慢性傳染性疾病，相較實驗室自制羅氏培養基，貝索公司羅氏培養基具污染率低、快速等特點，可對抗酸桿菌生長形態直觀觀察。

3.2 貝索羅氏培養基特點及優勢

抗酸桿菌屬非運動性、非孢子生殖、需氧的細菌，有較慢的生長速度，一代繁殖用時是2h至>20h，品種不同，表現也有差異。故在抗酸桿菌培養基中可用的種類較多，可大致按液體培養基和蛋基培固定養基劃分。以對羅氏培養管屬所含有的蛋基固定培養基特色包括：若確保不蒸發干化，可較長時間冷藏儲存。因制備時經蒸汽滅蛋白質和滅菌的過程，不易引起吹件。相較瓊脂培養基，大多數分枝桿菌在培養基中可更好生長。培養基中含有的雞蛋液和丙三醇配方對結核分枝桿菌的生長起到了促進作用，并提供給機體最佳的養分和環境，且孔雀石綠對結構分枝桿菌生長未造成影響，可對其它雜菌的生長有效抑制。而臨床針對液體培養基培養，多為自動化培養，可就抗酸桿菌生長的更好的條件和環境進行提供，但對儀器設備有較高的要求。此外，本次貝索羅氏培養基在感染率上，低于實驗室自制培養基，這可能與樣本數較小相關，而貝索培養基污染率較實驗室自制羅氏培養基低，表明有較強的抗污染能力。

3.3 貝索羅氏培養基檢測結果

傳統培養抗酸桿菌的方法是需行4-8周培養才可生長。本次研究中，針對痰標本培養，貝索羅氏培養基與自制培養基在培養陽性平均速度上無明顯差異，但在對標準菌株培養時，貝索羅氏培養基速度明顯快于自制培養機，陽性出現的時間分別為(6.1±1.2)d、(15.2±2.1)d。分析培養結果，雖兩種培養基在陽性結果和陽性率上一致，但陽性出現的時間有一定差異性。陽性出現的平均時間貝索羅氏培養基相較實驗室自制羅氏培養基明顯提高?？赡芘c貝索羅氏培養基在含量及成份上均與自制羅氏培養基有所區別，加之其工藝控制較好，規?；L，也為其獲得較好的培養結果提供了理想的條件；同時也可能與抗酸桿菌對抗生素的拮抗作用、生長環境及遺傳特性等多因素相關。而在培養痰標本時，兩組有表現相當的生長時間，可能與樣本量選取的偏少相關。蔡興珊等報道，針對7583例送檢標本采用羅氏培養基增培養，陽性出現的時間為24.6d，接近于本次研究。

綜上，臨床針對結核菌，采用不同的培養基對抗酸桿菌培養，結果示貝索羅氏培養基在抗酸桿菌檢測效果上優于自制，降低了污染率，縮短了培養時間，具有非常重要的應用價值，有臨床有廣泛的實施前景，為結核病的防治提供了強有力的保障。

參考文獻

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【中圖分類號】R825.2

【文獻標識碼】B

【文章編號】1009-6019(2015)23-0062-02