內皮祖細胞培養上清對高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮細胞增殖和分化的影響*

王傳凱，　陸愛珍，　祁媛媛，　錢莉玲

(復旦大學附屬兒科醫院，上海 201102)

內皮祖細胞培養上清對高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮細胞增殖和分化的影響*

王傳凱，陸愛珍，祁媛媛，錢莉玲△

(復旦大學附屬兒科醫院，上海 201102)

[摘要]目的： 研究高氧暴露對內皮祖細胞(EPCs)旁分泌功能的影響，并探索EPCs旁分泌因子對高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮細胞(AECⅡ)功能的影響。方法: 分離大鼠骨髓來源的單個核細胞，EGM-2MV培養基培養7～10 d獲取EPCs，并對其進行鑒定。分別在空氣條件下及60%的氧濃度條件下培養EPCs，收集空氣組EPCs培養上清(E-CM-RA)和高氧組EPCs培養上清(E-CM-O2)，ELISA法檢測2組上清中VEGF、FGF10、EGF及PDGF-BB的表達水平。分離純化培養成年大鼠的AECⅡ，常規培養至第2 天，分為4組：(1)RA組：空氣條件下培養；(2) O2組：60%的氧濃度條件下培養；(3) O2+E-CM-RA組：在O2組的基礎上，在培養基中加入E-CM-RA；(4) O2+E-CM-O2組：在O2組的基礎上，在培養基中加入E-CM-O2。分別在干預12 h、24 h、2 d和3 d，用MTT法及細胞計數法檢測4組AECⅡ的增殖情況；在24 h、2 d和3 d用real-time PCR法檢測4組AECⅡ中SP-C和AQP5的mRNA表達量。結果: E-CM-RA中VEGF及FGF10的表達水平明顯高于E-CM-O2(P<0.05)。干預不同時間，各組間AECⅡ的活力及數量均有明顯差異(P<0.01)。與RA組相比，O2組AECⅡ各時點的活力明顯下降，數量明顯減少(P<0.05)；與O2組相比，各時點O2+E-CM-RA組AECⅡ的活力明顯增高，數量明顯增加(P<0.05)；但O2+E-CM-O2組與O2組AECⅡ的活力及數量均無顯著差異。干預24 h、2 d及3 d，4組間AECⅡ的SP-C與AQP5 mRNA的表達量均具有明顯差異(P<0.01)。與RA組相比，O2組AECⅡ中SP-C的mRNA表達量顯著降低(P<0.01)，AQP5的mRNA表達量顯著升高(P<0.01)。與O2組相比，在24 h、2 d及3 d時， O2+E-CM-RA組和O2+E-CM-O2組AECⅡ中SP-C的mRNA表達量顯著增高(P<0.05)，而在2 d及3 d時，AQP5的mRNA表達量顯著降低(P<0.01)。結論: EPCs可分泌肺發育相關生長因子VEGF和FGF10，高氧暴露抑制EPCs表達 VEGF和FGF10。高氧暴露抑制AECⅡ的增殖，降低AECⅡ表達SP-C mRNA，促進AECⅡ表達AQP5 mRNA。EPCs培養上清能夠改善高氧暴露對AECⅡ增殖的抑制作用，維持AECⅡ本身特性，抑制AECⅡ向AECⅠ分化。而高氧暴露部分削弱了EPCs培養上清的這種作用，這可能與高氧暴露抑制EPCs表達肺發育相關因子VEGF和FGF10有關。

[關鍵詞]內皮祖細胞； 旁分泌功能； 肺泡Ⅱ型上皮細胞； 高氧損傷

支氣管肺發育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)在早產兒表現為肺發育停滯，病理表現為肺血管異常和肺泡簡化[1]。研究顯示肺內血管是肺泡化的“源動力”，血管生成機制的破壞削弱了肺泡化[2]。內皮祖細胞(epithelial progenitor cells，EPCs)是影響血管發育的關鍵細胞之一，具有很強的自我更新和高度增殖能力，并能分化為血管內皮細胞參與血管生成[3]。臨床研究發現早產兒循環EPCs的數量和功能與BPD發生相關[4]。動物實驗也發現，高氧暴露降低了新生小鼠骨髓、循環和肺組織EPCs數目，破壞了肺血管發育和肺泡化，而給予外源性EPCs可促進肺部血管的形成，增加肺泡數量[5]。然而，單純增加移植EPCs的數目對高氧肺損傷的療效有限[6]。近來研究發現EPCs具有旁分泌功能[7]，旁分泌因子包括血管內內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor，FGF)、血小板源性生長因子BB(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)、表皮細胞生長因子(epidermal growth factor，EGF)、轉化生長因子(transforming growth factor，TGF)、角化細胞生長因子(keratinocyte growth factor，KGF)、基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP9)等。EPCs旁分泌因子能促進血管形成，維持血管內皮結構的完整[8-9]；在促進血管生成方面，EPCs旁分泌因子與EPCs移植療效相當[10]。

Ⅱ型肺泡上皮細胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells，AECⅡ)是肺組織中的干細胞，能分化為Ⅰ型肺泡上皮細胞(type Ⅰ alveolar epithelial cells，AECⅠ)，參與肺損傷修復，并分泌肺泡表面活性物質(pulmonary surfactant, PS)維持肺泡穩定。動物研究發現切除小鼠單側肺可誘導EPCs分泌MMP14，使EGF樣配體增加，刺激AEC Ⅱ增殖，促進再生性肺泡化[11]。在高氧肺損傷的研究方面，目前鮮有研究EPCs旁分泌功能對AECⅡ作用的報道。大量研究表明高濃度氧氣抑制血管內皮細胞和肺泡上皮細胞的增殖，誘導凋亡[12]。本研究設想在體外建立高氧環境，研究高氧暴露對EPCs旁分泌功能的影響，以及EPCs旁分泌因子對高氧暴露下AECⅡ的增殖分化的影響。

材料和方法

1EPCs原代培養及免疫熒光染色鑒定

分離大鼠骨髓來源的單個核細胞，用EGM-2MV培養基(LONZA)重懸，以每孔2×106的密度接種于纖連蛋白(Sigma)包被過夜的6孔板中。培養3 d后棄去懸液，已貼壁細胞換新鮮培養液繼續培養，每3 d換液，觀察細胞生長形態變化。培養7～10 d，消化收獲細胞進行EPCs鑒定。培養所得的爬片細胞分別加入DiI-acLDL(Biomedical Technologies)37 ℃孵育4 h和FITC-UEA-1(Sigma)37 ℃孵育1 h，經4%多聚甲醛固定，0.3% Triton Χ-100破膜，DAPI染核后，免疫熒光顯微鏡下計數雙陽性細胞比例。

2AECⅡ原代培養及細胞鑒定

取大鼠肺組織，采用彈力蛋白酶/胰酶混合消化獲得混合細胞，進一步采用免疫黏附法純化AECⅡ。純化后細胞用含10% 胎牛血清的DMEM培養基重懸，以每孔4×106的密度接種于6孔板內，每天換液。純化培養2 d的細胞，采用BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒(江蘇碧云天生物技術研究所)染色，普通顯微鏡下計數藍紫色深染細胞的比例，計算細胞純度。純化培養2 d的細胞離心后，加2.5%戊二醛固定細胞沉淀過夜，依次進行固定、脫水、包埋及超薄切片后，在透射電鏡下觀察AECⅡ特征性結構板層小體和微絨毛。

3實驗分組

3.1EPCs分組培養7～10 d的EPCs，以4×105的密度接種于6 cm培養皿，待細胞生長達到80%融合時開始干預，分為空氣組和高氧組干預EPCs?？諝饨M直接置于普通CO2培養箱中培養，高氧組則置于自制培養器皿中(10 cm×15 cm×25 cm)，持續通入含有60% O2和5% CO2的混合氣體。培養2 d后2組均更換培養基為3 mL無血清基礎培養基，置于普通CO2培養箱中培養1 d后收集上清，空氣組EPCs培養上清(EPC-conditioned medium-room air,E-CM-RA)和高氧組EPCs培養上清(EPC-conditioned medium-O2,E-CM-O2)，-80 ℃保存備用[13]。

3.2AECⅡ分組置于6孔板中原代培養第2 天的AECⅡ，分為正常室內空氣(room air, RA)組、O2組、O2+E-CM-RA組和O2+E-CM-O2組。RA組置于普通CO2培養箱中培養，培養液為1 mL完全培養基+1 mL無血清培養基； O2組置于自制培養器皿中，持續通入含有60% O2和5% CO2的混合氣體，培養液為1 mL完全培養基+1 mL無血清培養基； O2+E-CM-RA組高氧干預同O2組，培養液為1 mL完全培養基+1 mL E-CM-RA；O2+E-CM-O2組高氧干預同O2組，培養液為1 mL完全培養基+1 mL E-CM-O2。

4方法

4.1ELISA檢測EPCs培養上清中的細胞因子ELISA法檢測2組上清中VEGF、EGF(Maibio)、HGF10(Mybiosource)及PDGF-BB(R&D)的表達水平，實驗嚴格按照說明書進行。

4.2MTT法測量AECⅡ的細胞活力在各組AECⅡ培養12 h、24 h、2 d和3 d時加入MTS工作液(Biovision)，2 h后492 nm處檢測各孔的吸光度(A)值。

4.3血球計數板計數AECⅡ細胞數量的變化在各組AECⅡ培養12 h、24 h、2 d、3 d時，棄去培養基，0.25%的胰酶完全消化、重懸后，取2 μL加入血球計數板，計數各組AECⅡ的細胞數目。

4.4Real-time PCR實驗分別在培養24 h、2 d和3 d，收集ACEⅡ，采用TRIzol試劑提取總RNA，將1 μg的RNA用PrimeScript? RT試劑盒(TaKaRa)逆轉錄成cDNA。每個生物學指標用2 μL 的cDNA 采用SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ 試劑盒(TaKaRa)進行實時熒光定量PCR分析。反應條件為95 ℃ 5 min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40循環。GAPDH 作為內參照。各生物學指標的引物見表1。采用2-ΔΔCt方法進行半定量分析。

表1　各基因的引物序列及擴增片段長度

F: forword; R: reverse.

5統計學處理

采用SPSS 16軟件進行統計學分析。數據以均數±標準差(mean±SD)表示。正態分布的兩組計量資料采用t檢驗，多組比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Bonferroni方法進行組間兩兩比較。以P<0.05 為差異有統計學意義。

結果

1EPCs培養與鑒定

倒置顯微鏡下觀察發現，培養3 d，EPCs未貼壁，細胞多為小圓形；培養4 d，細胞開始貼壁，并逐漸由小圓形細胞向梭形細胞轉化；培養至7～10 d，梭形細胞不斷增多，呈典型的鵝卵石鋪路樣改變。在熒光顯微鏡下，胞膜結合FITC-UEA-1顯示為綠色，胞漿攝取DiI-acLDL顯示為紅色，雙染色陽性細胞為橙色，為正在分化的EPCs，約占總細胞數的80%，見圖1。

Figure 1.Characterization and identification by fluorescent staining of isolated EPCs. A: bone marrow-derived mononuclear cells cultured for 7～10 d, under inverted microscope; B: EPCs-uptaking DiI-acLDL was red; C: EPC-binding FITC-UEA-1 was green; D: double DiI-acLDL/FITC-UEA-1 positive cells were EPCs.

圖1EPCs培養的形態學特征及熒光染色鑒定

2AECⅡ的培養與鑒定

倒置顯微鏡觀察發現，培養24 h，AECⅡ貼壁，呈圓形、多角形，島狀分布。培養2 d，細胞島狀分布典型，胞漿內有大量反差明顯的小顆粒，細胞核明顯。堿性磷酸酶染色，藍紫色陽性細胞達75%。透射電鏡下觀察到AEC Ⅱ特征性結構微絨毛及板層小體結構，見圖2。

Figure 2.Characterization and identification of isolated AECⅡ. A: AECⅡ cultured for 2 d was observed under inver-ted microscope; B: AKP staining; C～D: microvilli and lamellar body were observed under transmission electron microscope.

圖2AECⅡ培養的形態學特征及細胞鑒定

3高氧暴露對EPCs旁分泌功能的影響

ELISA法檢測顯示空氣組EPCs培養上清中VEGF及FGF10的水平顯著高于高氧組。ELISA法在兩組EPCs培養上清中均未檢測到PDGF-bb及EGF的表達，見表2。

4EPCs培養上清對高氧暴露下AECⅡ功能的影響

4.1EPCs培養上清對高氧暴露下AECⅡ細胞增殖的影響在培養12 h、24 h、2 d及3 d時，4組AECⅡ的細胞活力及細胞計數的差異均有統計學意義(P<0.01)；與RA組相比， O2組AECⅡ的細胞活力顯著降低，細胞數顯著減少(P<0.05)；與O2組相比，O2+E-CM-RA組AECⅡ的細胞活力增高，細胞數增多(P<0.05)。與O2+E-CM-O2組相比，在培養24 h、2 d及3 d時，O2+E-CM-RA組AECⅡ的細胞活力顯著增高，細胞數增多(P<0.05)。O2+E-CM-O2組與O2組間AECⅡ的細胞活力和細胞數無顯著差異，見圖3及表3。

表2ELISA檢測EPCs培養上清中VEGF、FGF10的表達水平

Table 2.The levels of VEGF and FGF10 in EPCs CM measured by ELISA (ng/L. Mean±SD.n=3)

TreatmentVEGFFGF10Air293.62±53.74161.01±17.98Hyperoxia168.51±15.05*87.07±13.95**

*P<0.05,**P<0.01vsair group.

Figure 3.Effects of EPC-conditioned medium on the viability of AECⅡdetected by MTT assay. Mean±SD.n=3.△△P<0.01vsRA group;*P<0.05vsO2group;#P<0.05,##P<0.01vsO2+E-CM-O2group.

圖3MTT實驗檢測EPCs培養上清對AECⅡ細胞活力的影響

表3細胞計數檢測EPCs培養上清對AECⅡ細胞增殖的影響

Table 3.Effects of EPC-conditioned medium on the proliferation of AECⅡ determined by cell counting (108cells/L. Mean±SD.n=3)

Group12h24h2d3dRA3.43±0.155.02±0.095.77±0.417.67±0.45O22.87±0.45△△3.05±0.45△△3.24±0.45△△3.65±0.22△△O2+E-CM-RA3.30±0.14*4.20±0.30**#5.01±0.11**##5.27±0.21**##O2+E-CM-O22.90±0.143.47±0.294.03±0.144.26±0.24

△△P<0.01vsRA group;*P<0.05,**P<0.01vsO2group;#P<0.05,##P<0.01vsO2+E-CM-O2group.

4.24組AECⅡ中SP-C及AQP5 的mRNA表達情況在培養24 h、2 d及3 d時，4組AECⅡ的SP-C mRNA表達量均有顯著差異(P<0.01)。與RA組相比，O2組在培養24 h、2 d及3 d時，SP-C的mRNA表達顯著降低(P<0.01)。與O2組相比，在培養24 h、2 d及3 d時，O2+E-CM-RA組和O2+E-CM-O2組AECⅡ的SP-C mRNA顯著增高(P<0.05)。 與O2+E-CM-RA組相比，在培養24 h和2 d時，O2+E-CM-O2組AECⅡ的SP-C mRNA表達顯著降低(P<0.05)，見圖4。

Figure 4.Effects of EPC-conditioned mdeium on the mRNA expression of SP-C in AECⅡ. Mean±SD.n=3.△△P<0.01vsRA group;*P<0.05,**P<0.01vsO2group;#P<0.05vsO2+E-CM-O2group.

圖4EPCs培養上清對AECⅡ的SP-C mRNA表達的影響

在培養24 h、2 d及3 d時，4組AECⅡ中AQP5的mRNA表達量的差異均有統計學意義(P<0.01)。與RA組相比，在培養24 h、2 d及3 d時，O2組AQP5的mRNA顯著增高(P<0.01)。與O2組相比，在培養2 d及3 d時，O2+E-CM-RA組和O2+E-CM-O2組AECⅡ的AQP5 mRNA顯著降低(P<0.01)。O2+E-CM-RA組和O2+E-CM-O2組間AQP5的mRNA表達無顯著差異，見圖5。

Figure 5.Effects of EPC-conditioned mdeium on the mRNA expression of AQP5 in AECⅡ. Mean±SD.n=3.△△P<0.01vsRA group;*P<0.05,**P<0.01vsO2group.

圖5EPCs培養上清對AECⅡ的AQP5 mRNA表達的影響

討論

早在2003年，Rehman等[7]就發現EPCs具有旁分泌功能，其旁分泌因子不僅能夠促進內皮細胞增殖，促進血管形成；同時也可作用于組織細胞，加速組織的損傷修復[ 8, 11, 14]。然而，迄今為止，鮮有研究報道EPCs旁分泌功能在高氧肺損傷修復方面的作用。本研究擬在體外條件下，探討高氧對EPCs旁分泌功能的影響以及EPCs旁分泌因子對高氧暴露下AECⅡ的影響。

本研究檢測了EPCs培養上清中促肺發育和肺損傷修復的幾種重要的生長因子VEGF、EGF、HGF10及PDGF-BB。我們發現大鼠骨髓來源的EPCs可分泌VEGF及FGF10，這與Pula等[15]的研究結果一致。VEGF是內皮細胞最有效的有絲分裂原，通過促血管生成作用從而促進肺組織的發育[16]。FGF10表達于肺發育的整個過程中，可促進肺泡上皮細胞的增殖及血管的發育[17]。有研究表明FGF10可改善高氧暴露對肺發育的阻滯[18]。本研究采用ELISA方法未檢測到EGF及PDGF-BB的表達，而Pula等[15]采用ELISA法檢測發現人外周血來源EPCs高表達PDGF-BB；Lee等[19]采用Milliplex液相芯片檢測技術發現人臍帶血EPCs可分泌EGF、PDGF-AA、GM-CSF、IL-6等因子。這些研究結果不同可能與EPCs來源不同以及檢測技術精密性相關。本研究發現高氧暴露抑制了EPCs分泌VEGF和FGF10， Baker等[9]也發現高氧暴露可抑制臍帶血來源EPCs的旁分泌功能，高氧暴露下，EPCs旁分泌因子對內皮細胞的促增殖作用明顯下降。

以往的研究表明AEC Ⅱ在原代培養24～96 h處于最佳狀態，此階段適合做體外實驗研究[20]。故在實驗中，我們采用原代培養第2天的細胞作為研究對象，進行干預。我們發現在空氣條件下，隨著培養時間的延長，AECⅡ增殖趨緩，SP-C的mRNA表達下降，而AQP5的mRNA表達逐漸增高。AECⅡ在長時間高氧暴露下增殖能力下降[12, 21]，本研究發現60%的高氧暴露下AECⅡ的增殖能力明顯降低；EPCs培養上清能改善高氧損傷，促進AECⅡ增殖；而高氧暴露下的EPCs培養上清促AECⅡ增殖作用明顯降低。這可能與EPCs培養上清中VEGF及FGF10等肺組織發育相關的生長因子濃度相關[22-23]。Baker等[9]也發現臍帶血來源EPCs的旁分泌因子可促進高氧暴露下AECⅡ的增殖。

體外培養的AECⅡ具有向AECⅠ轉分化的特性[24]，高表達的SP-C是AECⅡ的特異性表型，高表達AQP5是AECⅠ的特異性表型[25-26]，SP-C和AQP5的檢測可以作為這2種細胞分化的標志。我們的研究發現高氧暴露使AECⅡ的 SP-C mRNA表達量下降，失去AECⅡ表型，而AQP5 mRNA表達量均大幅上升，逐漸向AECⅠ轉分化。這與Lu等[27]的研究結果相似，Lu等發現90%的氧濃度條件可下調AECⅡ SP-C的mRNA表達量，上調AQP5的mRNA表達量，促進AECⅡ分化。我們的研究還發現EPCs培養上清可維持高氧暴露下AECⅡ SP-C的mRNA高表達，抑制AQP5的mRNA表達，抑制高氧暴露下AECⅡ向AECⅠ分化；而高氧暴露部分削弱了EPCs培養上清的這種作用。這可能是高氧暴露抑制了EPCs分泌VEGF及FGF10的能力，從而削弱了EPCs培養上清維持ACEⅡ本身特性的能力。

綜上所述，我們的研究發現體外培養的大鼠骨髓來源的EPCs可分泌VEGF、FGF10等肺發育相關生長因子，而高氧暴露損害了EPCs的旁分泌功能，抑制VEGF和FGF10表達。高氧暴露可抑制AECⅡ的增殖，促進AECⅡ向AECⅠ分化。EPCs培養上清能夠改善高氧暴露下AECⅡ增殖，維持AECⅡ本身特性，抑制AECⅡ向AECⅠ分化。而高氧暴露部分性削弱了EPCs培養上清的這種作用，這可能與高氧暴露損害EPCs的旁分泌功能，抑制肺發育相關因子VEGF和FGF10的表達相關。本研究存在以下不足之處，由于不同來源EPCs旁分泌功能存在差異加之EPCs旁分泌成分復雜，因此骨髓來源EPCs的旁分泌功能還有待蛋白芯片技術的進一步檢測。

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(責任編輯： 盧萍， 羅森)

Effects of endothelial progenitor cell-conditioned medium on proliferation and differentiation of type Ⅱ alveolar epithelial cells exposed to hyperoxia

WANG Chuan-kai, LU Ai-zhen, QI Yuan-yuan, QIAN Li-ling

(Children’sHospitalofFudanUniversity,Shanghai201102,China.E-mail:llqian@126.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effect of hyperoxia exposure on the paracrine function of endothelial progenitor cells (EPCs), and to explore the effects of paracrine factors of EPCs on the proliferation and differentiation of type Ⅱ alveolar epithelial cells (AECⅡ) exposed to hyperoxia. METHODS: Bone marrow-derived mononuclear cells were isolated and cultured in EGM-2MV medium for 7～10 d to obtain and identify EPCs. EPCs were cultured in room air (RA) or 60% O2. The normoxia EPC-conditioned medium (E-CM-RA) and hyperoxia EPC-conditioned medium (E-CM-O2) were collected. The levels of VEGF, FGF10, PDGF-BB and EGF in E-CM-RA and E-CM-O2 were detected by ELISA. AECⅡ from adult rats were isolated, purified and cultured for 2 d, then divided into RA group, O2 group, O2+E-CM-RA group and O2+E-CM-O2 group. The proliferation of AECⅡ was detected by MTT assay and cell counting. The mRNA expression of SP-C and AQP5 was quantified by real-time PCR. RESULTS: The expression of VEGF and FGF10 in E-CM-O2 group decreased significantly compared with E-CM-RA group (P<0.01). There were significant differences in AECⅡ viability and number among the 4 groups at 12 h, 24 h, 2 d and 3 d (P<0.01). Compared with RA group, AECⅡ viability and number in O2 group decreased significantly at 12 h, 24 h, 2 d and 3 d (P<0.05). The AECⅡ viability and number in O2+E-CM-RA group were significantly higher than those in O2 group at 12 h, 24 h, 2 d and 3 d (P<0.05). However, no significant difference in AECⅡ viability and number between O2+E-CM-O2 group and O2 group at 12 h, 2 d and 3 d was observed. There were significant differences in the mRNA expression of SP-C and AQP5 in the 4 groups at 24 h, 2 d and 3 d (P<0.01). Compared with RA group, the mRNA expression of SP-C in O2 group was significantly inhibited (P<0.01), but the mRNA expression of AQP5 was promoted (P<0.01) at 24 h, 2 d and 3 d. Compared with O2 group, the mRNA level of SP-C in O2+E-CM-RA group and O2+E-CM-O2 group (P<0.05) at 24 h, 2 d and 3 d was increased, and the mRNA expression of AQP5 (P<0.01) at 2 d and 3 d was inhibited.CONCLUSION: EPCs secrete VEGF and FGF10, and hyperoxia impairs this paracrine function. Hyperoxia exposure inhibits AECⅡ proliferation and the mRNA expression of SP-C, but promotes the mRNA expression of AQP5. EPC-conditioned medium improves the proliferation of hyperoxia-exposed AECⅡ, and inhibits the transformation of AECⅡ. Hyperoxia exposure impairs the paracrine function of EPCs, and weakened the effects of E-CM-O2 on AECⅡ.

[KEY WORDS]Endothelial progenitor cells; Paracrine; Type Ⅱ alveolar epithelial cells; Hyperoxia injury

[文章編號]1000- 4718(2016)01- 0008- 07

[收稿日期]2015- 08- 18[修回日期] 2015- 12- 04

*[基金項目]國家自然科學基金資助項目(No. 81270727)

通訊作者△Tel: 021-64931916； E-mail： llqian@126.com

[中圖分類號]R363

[文獻標志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.01.002