預過濾系統對靜注人免疫球蛋白納米過濾的效率和質量影響

黃捷王炳盧奎林陳品全劉素芳高榮

（1.四川大學 四川成都 610041；2.成都蓉生藥業有限責任公司 四川成都 610041）

預過濾系統對靜注人免疫球蛋白納米過濾的效率和質量影響

黃捷1，2王炳2盧奎林2陳品全2劉素芳2高榮1*

（1.四川大學 四川成都 610041；2.成都蓉生藥業有限責任公司 四川成都 610041）

本文對靜注人免疫球蛋白（以下簡稱靜丙）進行納米膜過濾時，使用不同預過濾系統對納米過濾效率和靜注人免疫球蛋白產品質量的影響進行了比較，旨在得出不同預過濾系統對靜丙進行納米過濾的效率和主要質量指標的影響。結果：不同的預過濾系統對IVIG納米過濾的效率影響較大，選擇適宜的預過濾系統能夠有效提高納米過濾的效率，且過濾后制品質量檢查結果無明顯差異（P＞0.05）。結論：選擇適宜的預過濾系統，可顯著提高靜丙納米過濾效率，且不影響其主要質量指標。

預過濾系統 納米膜過濾 靜注人免疫球蛋白 質量

病毒污染嚴重威脅血液制品安全性，如何進一步提高制品的安全性始終是人們所關注的問題。目前國內靜丙病毒滅活方法主要采用低pH孵放滅活病毒［1-2］、納米過濾去除病毒、辛酸鹽病毒滅活［2］、S/D法病毒滅活和巴氏加溫病毒滅活［3］［4］等方法，其中低pH孵放滅活病毒對產品的溫度要求較高，一般溫度控制在24±1℃，時間為21～24天［5］［6］。納米膜過濾是根據分子篩原理，按膜孔徑大小截流病毒，使目的蛋白通過濾器，大致分為錯流（切向）過濾和直流（死端）過濾兩種方式，其過濾效率和病毒去除能力取決于蛋白質含量、蛋白聚合物、過濾表面積、pH和溫度等影響。本文主要針對溫度對納米過濾的過濾效率和產品主要質量指標的影響進行分析。

1 材料

1.1 靜注人免疫球蛋白（pH4）原液1.2 原料

1.2.1 納米濾芯（0.001m2）

1.2.2 預過濾濾芯：孔徑0.2um濾芯、孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯

1.3 試驗設備

1.3.1 恒溫水浴箱

1.3.2 100ml、50ml、10ml量筒各三支

1.3.3 濾器完整性測試儀一臺

1.3.4 100kg壓力氮氣鋼瓶一個，帶高低壓力表減壓閥一個

1.3.5 快裝卡、硅膠管、壓力表若干

1.4 檢測設備

1.4.1 DMA4100型密度儀，為奧地利安帕通公司產品；

1.4.2 Delta320 pH計，為METTLER TOLEDO公司產品；

1.4.3 液相色譜儀，為Agilent公司產品；

1.4.4 全自動電泳儀，為INTERLAB生產。

2 方法

2.2.1 采用三批靜丙原液分別使用孔徑0.2um濾芯、孔徑0. 1um濾芯、去脂濾芯、孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯，作為預過濾系統進行納米膜過濾，過濾溫度為18～23℃，過濾時間為6小時，過濾過程中控制壓力不超過濾芯廠家規定的壓力，并盡量保持三組過濾系統壓力一致。收集使用不同預過濾系統過濾后的靜丙原液進行納米過濾時的過濾參數。

2.2.2 采用三批靜丙原液分別使用孔徑0.2um濾芯、孔徑0. 1um濾芯、去脂濾芯、孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯，作為預過濾系統進行納米膜過濾，收集使用不同預過濾系統預濾后完成納米過濾的產品進行檢測，檢測項目為： pH值、蛋白質含量、純度、抗補體活性和分子大小分布。

表1不同預過濾系統進行納米過濾時靜丙過濾流速、過濾量（N=3）

表2 不同預過濾系統的濾過液流速之間兩兩比較結果

2.2.3 過濾完畢的濾芯進行完整性檢測，確保過濾有效性。

表3 不同預過濾系統的過濾量之間兩兩比較結果

表4 不同預過濾系統進行納米過濾時靜丙原液質量指標（N=3）

3 結果

3.1 使用不同預過濾系統進行預過濾后對靜丙納米過濾效率的影響

3.2 使用不同預過濾系統進行預過濾后對靜丙納米過濾后產品質量的影響

采用不同預過濾系統進行納米過濾，靜丙主要質量指標進行統計分析，結論均無顯著差異（P＞0.05）。

采用不同預過濾系統進行納米過濾后，所用納米膜濾芯進行完整性檢測均合格，證明使用不同的預過濾系統，納米膜過濾有效性能夠得到確保。

4 討論

4.1 納米過濾控制參數 選擇適宜的預過濾系統，能夠有效去除靜丙原液中的一些小顆粒物質，增加過濾速度和過濾量，提高了生產效率；但同時，由于預過濾系統對產品有一定的耗損，不能無限制的添加，因此，通過本實驗確認最佳的預過濾系統為孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯。

4.2 產品原液過濾效率分析 從表1，表2，表3的統計數據表明， 使用孔徑0.2um濾芯作為預過濾系統與使用孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯和孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預過濾系統在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異；孔徑0.1um濾芯與去脂濾芯作為預過濾系統，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上無顯著差；孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯作為預過濾系統與孔徑0. 1um濾芯+去脂濾芯作為預過濾系統，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異?？讖?.1um濾芯+去脂濾芯作為預過濾系統的濾過液流速和納米過濾濾過量均是各預過濾系統中最高的，說明選擇適宜的預過濾系統對納米過濾的過濾效率有提高，實際生產中可以選擇孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預過濾系統，能夠有效提高納米過濾的效率。說明選擇適宜的預過濾系統對納米過濾的過濾效率有提高，實際生產中可以選擇孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預過濾系統，能夠有效提高納米過濾的效率。

4.3 產品原液主要質量指標 從表4的統計數據表明，使用不同預過濾系統進行預過濾后，再進行納米過濾的靜丙原液純度均達到98.5%以上，符合《中國藥典》標準。使用不同預過濾系統進行預過濾后再進行納米過濾的靜丙原液的pH值、蛋白質含量、抗補體活性、分子大小分布無顯著差異（P＞0.05）。

綜上對比分析，采用孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯進行預過濾后再進行納米過濾的靜注人免疫球蛋白，較使用孔徑0.1um濾芯、孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯作為預過濾系統過濾后再進行進行納米過濾的靜注人免疫球蛋白的生產效率顯著提高。采用不同預過濾系統進行預過濾后再進行納米過濾的靜丙原液的主要質量指標無顯著差異。

結論

靜注人免疫球蛋白納米過濾使用孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯進行預過濾后再進行納米過濾，過濾時間不超過6小時，過濾效率明顯提高，且過濾后制品質量檢查結果無明顯差異。表明選擇適宜的預過濾系統進行預過濾后再進行納米過濾能提高過濾效率，同時不影響靜脈注射用人免疫球蛋白的質量。

［1］代旭蘭，陳海等.納米膜過濾技術在提高人血漿制品安全性方面的應用，中國輸血雜志 2009年06期.

［2］王劍鋒，英志芳等.辛酸鹽滅活靜注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果驗證的研究.微生物學免疫學進展，2011年第2期.

［3］宋清爽等.血液制品病毒滅活及去除工藝進展，生物技術通訊2012年04期，627-630頁. ［4］張延瑩，李宏昊，姜燕.血液制品滅活及去除病毒工藝，中國生化藥物雜志 2002年04期.

［5］Robert E. Inactivation of hepatitis C virus in low pH intravenous immunoglobulin. Biologicals（1994）22.13-19.

［6］王玉等.凍干低pH 靜注免疫球蛋白酸孵放滅活病毒方法的驗證，中國輸血雜志 1997年，第十卷，第四期，181-184頁.

R917

A

1674-2060（2016）02-0013-02

黃捷（1977—），女，漢族，四川成都人，四川大學生命科學學院2012級在職研究生，現從事于血液制品行業，就職于成都蓉生藥業有限責任公司，具有15年的生產及質量管理工作經驗。

高榮