車前子多糖對人外周血來源的樹突狀細胞免疫活性的影響

魯世絨

（廣西醫科大學 廣西南寧 530000）

車前子多糖對人外周血來源的樹突狀細胞免疫活性的影響

魯世絨

（廣西醫科大學 廣西南寧 530000）

目的：探討車前子多糖對樹突狀細胞免疫活性的影響。方法：從健康人外周血獲得單個核細胞，貼壁后的單核細胞加入GM-CSF、IL-4誘導為成熟的樹突狀細胞，在誘導過程中加入不同濃度車前多糖（PSP）作比較，用倒置顯微鏡及流式檢測其細胞形態、表型變化。結果：各組經不同濃度PSP作用后，細胞表面CD80、CD86表達升高，在PSP作用濃度為40ug/ml時，表面分子表達量明顯高于其他對照組。結論：在體外培養時，車前子多糖能促進樹突狀細胞的成熟。

車前子多糖 樹突狀細胞 免疫活性

前言

DC是生物體內功能最強的一種抗原提呈細胞，在機體免疫調控中發揮重要作用［1］。有關DC的免疫治療已有大量報道，各種免疫療法對腫瘤患者產生一定影響。研究表明許多中藥有效成分具有一定的免疫調節活性，本文探究了車前子多糖在體外促進DC成熟，為研究車前子多糖免疫調節機制提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與藥物

淋巴細胞分離液購自北京索萊寶公司，rhGM-CSF 、rhIL-4， 購自德國R&D 公司，FITC標記的鼠抗人CD80單抗、PE標記的CD86單抗購自BD-PharMingen，藥材取自江西。

1.2 主要方法

1.2.1 外周血單核細胞分離

采取健康人外周血200ml，用同等比例PBS稀釋后加入淋巴細胞分離液，1500rpm，20min離心，分為四層：血清、白膜層、淋巴分離液、紅細胞［2］。取白膜層單個核細胞于離心管中，用PBS洗兩次，用無血清的RPM1640重懸細胞，貼壁1h，取貼壁的細胞即單核細胞進行計數。

1.2.2 DC的體外誘導分化及培養

將單核細胞分為兩組，車前子多糖組和對照組，加入完全1640，同時加入GM-CSF 1000 u/ml 、IL-4 450u/ml ，鋪于六孔板中，PSP組分為五個作用濃度（10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、60ug/ ml）。

2 DC的鑒定

2.1 DC形態的觀察

用倒置顯微鏡觀察細胞形態。

2.2 DC表型的鑒定

采用流式細胞儀，在D C培養的第1 0天，收集細胞分別加入CD80，CD86單抗染色，室溫避光作用15min。加PBS洗兩次后用500ulPBS重懸細胞檢測。

3 結果

c o n t r o l 　C D 8 0 　C D 8 6 c o n t r o l 　1 8 　7 2 . 1 　6 0 . 3 P S P 1 0 u g / m l 　1 0 　8 1 . 6 　7 8 . 9 P S P 2 0 u g / m l 　1 5 　8 5 . 3 　8 2 . 1 P S P 4 0 u g / m l 　1 7 　8 9 . 0 　8 6 . 2 P S P 6 0 u g / m l 　0 6 　5 1 . 3 　6 2 . 7

3.1 DC形態的改變

d1天細胞體積較小，d2天細胞開始聚集，部分懸浮。d3天細胞體積變大，形狀變為樹突狀或放射狀等。d4天大量細胞懸浮且呈突刺狀。d7天可見大量突刺狀細胞，為典型的DC形態。

3.2 DC的免疫表型分析

各組細胞共培養7d，流式檢測其表型，結果見下表。

組間表達：各組DC分子表面CD80、CD86均有表達，車前子多糖作用組均高于對照組。但當PSP濃度高于40ug/ml時，CD80、CD86的表達呈下降趨勢。

組內表達：當PSP濃度≤40ug/ml時，隨著PSP的增加，DC表面分子表達增加。當60ug/ml濃度時，表面分子表達降低。

各濃度PSP組及對照組流式檢測結果%

4 討論

車前子是我國傳統中藥之一， PSP由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸等組成，具有一定的防癌抗癌和調節免疫功能的作用［3］。

DC作為抗原提呈免疫細胞，在抗腫瘤免疫中起重要作用［4］。成熟DC吞噬功能較弱，而共刺激分子和MHC-Ⅱ分子表達增加，從而獲得提呈抗原和活化T細胞的功能，啟動特異性免疫應答［5］。

實驗證明，DC經PSP刺激后，CD80、CD86的表達均增強，。研究發現PSP對免疫活性細胞無直接作用，DC表面存在多糖受體， PSP可與DC 表面存在的多糖受體結合，從而啟動和活化DC使其分泌細胞活性因子，活化的DC及活性因子增強T細胞等免疫活性細胞的功能。

本研究通過上述幾種實驗證明車前子多糖能進樹突狀細胞成熟。但其具體的分子生物學機制尚需進一步的研究。

［1］許峰，王彬，葉穎江，等.異源DC融合瘤苗在抗人結腸轉移癌細胞免疫中的作用［J］.中華實驗外科雜志，2006，23（12）：1497-1498.

［2］李幼平. 樹突狀細胞與移植免疫耐受研究進展.生物醫學工程學雜志，1997；14（4）∶383

［3］魏吳普.神農本草經［M］.北京：人民衛生出版社，1963：18.

［4］Shimauchi， T. and V. Piguet， DC-T cell virological synapses and the skin： novel perspectives in dermatology. Exp Dermatol，2015.24（1）：p.1-4.

［5］陳蘊穎，步宏.樹突狀細胞的表面標志及其免疫學意義. 生物醫學工程學雜志，1998；15（4）∶409.

Q2

A

1674-2060（2016）02-0168-01