正交試驗法篩選白虎定喘口服液提取工藝研究

趙增成+黃中利+林樹乾

摘要：為了優化白虎定喘口服液的煎煮工藝，以干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量為評價指標，以中藥浸泡時間、加水量、煎煮時間、煎煮次數為影響因素，采用正交試驗對其提取工藝進行多指標綜合篩選。結果顯示，煎煮次數對3個指標有顯著影響，其他因素影響均不顯著；優化的工藝條件為加15倍量水、浸泡0.5 h、每次煎煮0.5 h、煎煮3次。優選出的提取工藝穩定可行，有效成分提取率高，能保證制劑質量。

關鍵詞：正交試驗；提取工藝；干膏；綠原酸；黃芩苷

中圖分類號：S853.7 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2016）11-0140-04

Abstract In order to optimize the decoction process of Baihu Dingchuan oral liquid， the extraction process were comprehensively screened by orthogonal test with dry paste volume， contents of chlorogenic acid and baicalin as the evaluation indexes and herbal medicine immersion time， amount of water， decocting time and decocting times as the influence factors. The results showed that decocting times had significant effects on the 3 indicators， and the influences of other factors were not significant. The optimized conditions were adding 15-fold of water， soaking for 0.5 hour， decocting for 3 times and 0.5 hour each time. The optimized extraction process was stable and feasible with high active ingredient extraction rate， and it could guarantee the quality of preparation.

Keywords Orthogonal test； Extraction process； Dry paste； Chlorogenic acid； Baicalin

白虎定喘口服液是由山東省農業科學院家禽研究所研制的新獸藥，主要由石膏、金銀花、黃芩、知母等組成，功效為清瀉肺熱、化痰平喘，主治雞傳染性支氣管炎等外感邪熱入肺所致的發熱、痰多、咳喘之癥。中藥的煎煮工藝對制劑的質量和療效具有重要影響[1，2]，為了確保制劑質量，更好地發揮臨床療效，采用正交試驗法對其提取工藝進行了篩選研究，選定加水量、中藥浸泡時間、煎煮時間、煎煮次數4個因素，對產品中干膏量、綠原酸含量和黃芩苷含量進行綜合評價，確定白虎定喘口服液的最佳提取工藝參數。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津高效液相色譜儀、AB265-S型雙量程十萬分之一電子天平、KQ5200DB型超聲儀。

1.2 藥品與試劑

綠原酸對照品（批號110753-201314）、黃芩苷對照品（批號110715-201318），購于中國食品藥品檢定研究院。白虎定喘口服液由山東昊泰科技藥業有限公司試制。乙腈為色譜純試劑，甲醇、磷酸均為分析純試劑。

1.3 試驗設計

選取加水量（A）、中藥浸泡時間（B）、煎煮時間（C）、煎煮次數（D）4個因素，進行4因素3水平篩選試驗（表1）。選用正交表L9（34）進行正交試驗設計（表2）。

1.4 測定方法

按處方稱取相同的中藥飲片，按照以上試驗方案要求進行煎煮提取，提取液最后均濃縮至1 g/mL。

取中藥濃縮液50 mL，置水浴上蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速稱定干膏重量。

取中藥濃縮液，以綠原酸、黃芩苷做為指標成分，進行含量測定。具體測定方法按《白虎定喘口服液質量標準草案》進行。

1.5 黃芩苷含量測定

色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）為流動相；檢測波長為280 nm。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2 500。

對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：精密量取本品2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，超聲20 min，混勻，即得。

測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定。

1.6 綠原酸含量測定

色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）為流動相；檢測波長為327 nm。理論板數按綠原酸峰計算應不低于1 000。

對照品溶液的制備：取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

供試品溶液的制備：精密量取本品2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲20 min，搖勻，即得。

測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定。

1.7 統計方法

以干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量作為評價指標，采用極差法進行最佳因素排序，并得出最優組合。采用方差分析，得出各因素對各指標的顯著影響程度，確定最佳工藝條件。

1.8 工藝驗證

按照確定的最佳工藝條件，進行中藥提取，測定干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量，進行工藝驗證。

2 結果與分析

2.1 正交試驗結果

正交試驗的直觀分析結果見表3，方差分析結果見表4。

根據極差（R）大小排序，影響制劑中干膏量的因素為D>A>B>C，即煎煮次數>加水量>浸泡時間>煎煮時間，最優條件為A3B1C2D3；影響制劑中綠原酸含量的因素為D>C>B>A，即煎煮次數>煎煮時間>浸泡時間>加水量，最佳條件為A3B1C2D3；影響制劑中黃芩苷含量的因素為D>C>A>B，即煎煮次數>煎煮時間>加水量>浸泡時間，最佳條件為A3B3C2D3。

方差分析結果表明，D因素（煎煮次數）對干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量均影響顯著（P<0.05），A因素（加水量）、B因素（浸泡時間）、C因素（煎煮時間）對干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量三項指標影響均不顯著（P>0.05）。

綜合分析以上結論，本試驗設計的4個因素中，只有煎煮次數對3個指標有顯著影響，其他因素影響均不顯著，考慮實際生產中時間和能源的節省，將提取條件確定為A3B1C1D3，即加15倍量水、浸泡0.5 h、煎煮0.5 h、煎煮3次。

2.2 工藝驗證結果

按以上確定的A3B1C1D3工藝條件進行驗證試驗，結果干膏量為16.1632 g，綠原酸含量為1.1740 mg/mL，黃芩苷含量為12.4725 mg/mL，3項指標均達到滿意要求。

3 討論與結論

中獸藥制備工藝是新獸藥研究中的一項重要研究內容，目的就是對提取工藝條件進行科學篩選，使制備工藝做到科學、合理、先進、可行，使研制的新藥達到安全、有效、可控和穩定[3，4]。煎煮為中藥傳統提取方法，工藝簡單，往往對其重視不夠。如果僅按照傳統煎煮經驗進行，工藝研究不充分，工藝參數不明確，隨意性大，對產品的質量穩定性將造成很大影響[5，6]。加強對中藥新藥工藝過程的控制，可以提高對中藥的質量控制水平，保證在穩定的工藝條件下生產出符合標準、質量穩定的產品。正交設計以其“均勻分散、整齊可比、計算簡便”的突出優點而應用于中藥制劑的提取工藝等研究中[7-9]。中藥水提工藝一般涉及加水量、浸泡時間、煎煮時間、煎煮次數4個最重要的因素[10]。本研究采用正交試驗法，對以上4個因素進行了考察篩選，綜合各指標和經濟效益確定出最佳提取工藝參數為：總加水量為15倍生藥量，浸泡時間為0.5 h，共煎煮3次，每次煮沸0.5 h。

本品處方中，黃芩苦寒，歸肺、胃、大腸、膽四經，具清熱燥濕、瀉火解毒之功，尤長于清肺熱。金銀花味甘性寒，入肺胃心脾四經，清熱解毒、涼散風熱，清熱之中有輕微宣散之功，可助黃芩宣散肺熱。黃芩的主要活性成分為黃芩苷[11，12]，金銀花的主要活性成分為綠原酸[13，14]，二者均是重要的生物活性物質，因此將黃芩苷、綠原酸確定為考核指標。驗證試驗結果表明，優化的工藝條件可滿足本品中干膏量、綠原酸含量、黃芩苷含量的質量要求。

參 考 文 獻：

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