小薊對敗血癥休克大鼠血漿炎癥因子及代謝相關指標的影響

楊曉玲+梁軍+田玨

摘要：目的 觀察小薊對敗血癥休克大鼠血漿炎癥因子和代謝指標的作用。方法 復制敗血癥休克大鼠模型，BL420生物機能實驗系統測定大鼠心率和平均動脈壓，ELISA法檢測血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平，全自動生化分析儀測定各組大鼠血漿葡萄糖水平。結果 敗血癥休克模型組大鼠心率增加，平均動脈壓降低，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平升高，血糖降低；小薊干預后，大鼠心率減慢，平均動脈壓升高，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平降低，血糖增加。結論 小薊能減輕敗血癥休克大鼠的過度炎癥反應并改善機體的代謝水平。

關鍵詞：小薊；敗血癥休克；炎癥因子；LDH；血糖

敗血癥休克（Septic shock）是由病原微生物感染所致[1]，病情進展迅速，發病機制復雜，且治療困難，死亡率高。炎癥反應過度被認為是影響敗血癥休克進程的重要機制[2]。近年研究發現，傳統中藥小薊具有涼血止血，祛瘀消腫的作用[3]，在外傷感染、膿毒癥、腸癰等疾病治療中具有一定的療效[4]。

1資料與方法

1.1主要試劑及儀器 BL-420F+生物機能實驗系統（成都泰盟科技有限公司）；REVCO超低溫冰箱（日本）；M450酶標儀（美國BIO-TEK儀器公司）；全自動生化分析儀（北京普朗公司）；Finnpipette可調微量加樣器（芬蘭）。TNF-α、IL-1、IL-6和LDH ELISA檢測試劑盒、抑肽酶均購自Sigma公司。其余為市售分析純。小薊購自安徽新型中藥材飲片有限公司。

1.2動物分組 取2月齡體重190～210 g雄性健康SD大鼠45只（購自寧夏醫科大學實驗動物中心），隨機分為假手術組、模型組和小薊組。假手術組及模型組給予生理鹽水灌胃2 ml/d；小薊組予小薊0.196 g/kg·d，生理鹽水2 ml稀釋灌胃，連續 2w。按文獻方法制備敗血癥休克模型，大鼠經乙醚麻醉，行中下腹正中無菌2.5 cm切口，將盲腸移出腹腔，在回盲瓣下方結扎盲腸末端，用18#針頭在結扎線遠端盲腸兩側穿兩孔，溢出少量腸內容物，再將盲腸還納入腹腔，逐層縫合關閉腹腔，碘伏消毒并包扎傷口，術后1 min及8 h背部皮下注射生理鹽水40 ml/kg以防脫水。

1.3心功能測定 術后18 h用20%烏拉坦6 ml/kg腹腔麻醉，左頸總動脈插管連接BL-420F+生物機能實驗系統記錄心率和平均動脈壓。

1.4 ELISA法檢測血漿TNF-α、IL-1、IL-6和乳酸脫氫酶（LDH）的含量 從頸總動脈取血5 ml，10%EDTA 20 μl和抑肽酶650 KIU抗凝，于4℃ 3000 r/min離心10 min，分離血漿。按照ELISA檢測試劑盒說明書檢測血漿TNF-α、IL-1β、IL-6和LDH含量，繪制標準曲線，并計算各組動物血漿中炎癥因子的含量。

1.5血糖檢測 用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血漿葡萄糖（Glu）水平。

1.6統計學方法 采用prism5.0統計軟件進行分析，計量資料多組間比較采用單因素方差分析，組間的兩兩比較采用SNK檢驗。結果以均數±標準差（x±s）表示，以P<0.05為差異有顯著性。

2結果

2.1小薊對敗血癥大鼠心率的影響 與假手術組大鼠相比，模型組大鼠心率增加了72次/min；平均動脈壓降低23.2mmHg；小薊干預后，大鼠心率降低了25次/min，平均動脈壓升高了17 mmHg（P均<0.05），差異均有統計學意義，見圖1。

2.2小薊對敗血癥大鼠血漿炎癥因子和代謝指標的影響 與假手術組大鼠相比，模型組血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分別升高了4.57倍、2.56倍及6.66倍，LDH的含量升高了1.73倍，Glu下降了49.1%（P均<0.05）；與模型組相比，小薊組血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分別降低了68.17%、51.98%及79.27%，血清LDH的含量降低了14.9%，Glu升高了24.5%（P均<0.05），見表1。

3討論

敗血癥休克是由病原微生物及其毒素在體內引起的一種以微循環障礙和血流動力學異常為主的病理過程，嚴重時可以出現細胞損害甚至是多系統器官功能衰竭，發病機制復雜。當機體抵抗力下降，侵入機體的病原微生物大量繁殖并釋放毒性產物，激活機體免疫系統，產生和釋放各種生物活性物質和炎癥介質，導致血流動力學異常。結扎盲腸并使之穿孔是目前較為常用的復制動物敗血癥休克模型的方法，本研究以SD大鼠復制敗血癥休克模型，結果顯示，模型組大鼠的心率明顯高于假手術組，平均動脈壓也顯著低于假手術組，出現了血流動力學的顯著異常，表明敗血癥休克動物模型復制成功。

在敗血癥急性反應階段，機體可以出現發熱、炎癥介質大量生成、凝血功能障礙、血管壁通透性增加、代謝反應異常等變化[2]，同時由于微循環長期缺血缺氧，酸性代謝產物堆積，出現代謝異常。已經證實：敗血癥休克時存在炎癥-抗炎反應平衡失調[2]。IL-6、TNF-α和IL-1β等炎癥介質能啟動瀑布式炎癥級聯反應并損傷組織細胞[2]。本研究發現，敗血癥休克大鼠血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平顯著增高，血糖降低，乳酸脫氫酶明顯增多，表明敗血癥休克的機體存在炎癥反應過度和代謝異常。

小薊是多年生菊科植物，具有"清火、疏風、豁痰，解疔瘡癰疽腫毒"的功效，對外傷感染、膿毒癥、腸癰等疾病治療中具有一定的療效[4]。本研究結果顯示：小薊干預組大鼠血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平比模型組顯著降低，血糖水平明顯升高，而乳酸脫氫酶則明顯下降，表明小薊能夠減輕敗血癥休克過程中的炎癥反應的持續擴大，改善機體的代謝和局部的微循環，對敗血癥休克具有一定的預防或治療作用。

參考文獻：

[1]Akcay E K，Cagil N，Yulek F，et al.眼瞼的壞死性筋膜炎繼發于腮腺炎[J].歐洲眼科雜志，2008，10（1）：128-130.

[2]Yoo CH，Yeom JH Heo JJ，et al.干擾素β防止致命的內毒素的和膿毒性休克SIRT1 upregulation[J].科學報告，2014，4：4220-4220.

[3]中國藥典[S].2005年版，第一部.

[4]楊泰然，徐廣濤，徐曉雪，等.小薊化學成分的分離與鑒定[J].沈陽藥科大學學報，2015，32（6）：419-423.

編輯/丁一