核桃青皮不同溶劑提取物對煙青蟲的防治效果研究

何念武++劉曉陽++李堆淑++任道遠++黃金輝

摘要 采用水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯及乙醚5種不同極性的溶劑，利用超聲波輔助提取法從核桃青皮中提取有效成分，繼而研究其對煙青蟲的毒殺和拒食活性。結果表明：5種提取物均對煙青蟲具有毒殺作用，且呈現良好的劑量效應關系，不同提取物、不同濃度都會影響煙青蟲的毒殺活性和拒食活性。5種提取物對煙青蟲的殺蟲活性順序依次為乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。由此可見，核桃青皮不同溶劑提取物對煙青蟲具有一定的毒殺作用，具有開發成生物農藥的潛力。

關鍵詞 核桃青皮；提取物；煙青蟲；毒殺活性；拒食活性

中圖分類號 S433；S481+.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）22-0109-02

Abstract Using water，ethanol，chloroform，ethyl acetate and ethyl ether five different polar solvents，effective components from walnut peel were extracted by ultrasonic extraction，and then the tobacco budworm poison and antifeedant activity were studied.The results showed that five kinds of extracts had toxic effect on tobacco budworm，and showed a good dose-response relationship，different extracts of different concentrations would affect the tobacco budworm toxicity and antifeedant activity.The order of insecticidal activity of five kinds of extracts to the tobacco budworm was ethyl acetate extract > chloroform extract > ethyl ether extract > ethanol extract.Thus，different solvent extracts from walnut green husk has certain toxic effect on tobacco budworm，has potentiality in biological pesticide development.

Key words walnut green husk；extract；tobacco budworm；cytotoxicity；antifeedant activity

核桃青皮，又名青龍衣（Juglans regia L.），是核桃最外層的一層厚厚的綠色果皮，其具有苦、澀、辛、平等特點，隨著核桃逐漸成熟青果皮會變成黑色直至自然脫落。有研究表明，核桃樹葉、枝及青核桃皮和核桃樹皮都有較高的藥用價值，具有殺菌、解毒、利尿等諸多功效[1-3]。同時，核桃青皮和葉的浸出液可防治農作物病蟲害，是植物源新型農藥開發的主要原料[1-3]。我國作為一個核桃生產大國，而且核桃的產量還在逐年增加，這樣每年都有大量的核桃青皮被倒入山野、河流或者田地，不僅浪費了資源，也帶來了很大的環境問題[4]?；诖?，本研究擬采用不同的有機溶劑從核桃青皮中提取主要的化學成分，進一步開展其對煙青蟲的毒殺和拒食活性研究，旨在開拓其更高的藥用價值，以期為開發以核桃青皮為原料的新型植物源農藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 材料及試劑。核桃青皮為2015年8—9月采自陜西省商洛市洛南縣古城鎮中山村（地理位置為北緯34°01′29″；東經110°33′03″，海拔高度809～1 215 m）。自然晾干后，在60 ℃的烘箱中烘干，粉碎后過10目篩（孔徑2 000 μm）得到干粉，密封于塑料袋中，放在陰涼干燥處備用。吡蟲啉（100 g/袋，江蘇克勝集團股份有限公司生產），其他試劑均為分析純。

1.1.2 供試昆蟲。煙青蟲、健康煙苗（于2015年6月源于洛南縣永豐煙葉試驗基地），選擇體形健壯、大小一致的煙青蟲作為供試蟲。

1.2 試驗方法

1.2.1 核桃青皮不同溶劑提取物制備。準確稱取核桃青皮粉末80 g，放入1 000 mL錐形瓶中，分別選用5種極性不同的溶劑（水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、乙醚）于室溫下浸泡數小時，而后采用超聲波輔助回流提取，每次30 min，連續浸提3次，過濾，合并3次濾液，用旋轉蒸發儀減壓濃縮至膏狀，備用。

1.2.2 生物活性測定。一是煙青蟲的毒殺活性測定。采用噴霧法[5-7]，取30個清洗干凈的的培養皿（？準 9 cm），每個培養皿底部鋪上中性濾紙，將個體大小一致、體色相近的煙青蟲放到新鮮的煙草的葉片上，放入培養皿中，將不同濃度的核桃青皮提取液（1.0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/mL）均勻地噴灑在煙葉的表面，以每片20頭進行分段處理。蓋好培養皿蓋，以防煙青蟲逃逸，貼好標簽，用農藥吡蟲啉（10 mg/mL）處理作陽性對照，以相應溶劑為正常對照組。置于適宜的溫度下培養48 h后，觀察死亡情況，分別檢查死亡的煙青蟲數目，存活的煙青蟲數目，計算死亡率及校正死亡率。

二是不同提取物對煙青蟲的拒食活性測定方法。將提取物稀釋成濃度為1.0、5.0、10.0、15.0、20.0 mg/mL的溶液，并用農藥吡蟲啉（10 mg/mL）作為陽性對照，相應溶劑作空白（正常）對照。將煙葉剪成2.5 cm×2.5 cm的小葉片分別在處理溶液和對照溶液（包括空白對照和陽性對照）中分別浸蘸5 s，取出，然后在其葉背上放5頭煙青蟲，將煙葉放入培養皿中，葉背朝下，并用濕棉球縛葉柄保濕培育。48 h后檢查各處理葉片上煙青蟲的棲息數，每種處理重復6次，計算拒食率[7]。

拒食率（%）=（對照葉片蟲數-處理葉片蟲數）/對照葉片蟲數×100

1.3 數據分析方法

試驗數據用SPSS 19.0數據處理軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同溶劑提取物對煙青蟲的毒殺作用

核桃青皮5種不同溶劑核桃青皮提取物對煙青蟲的毒殺作用如表1所示，可以看出，不同溶劑提取物在不同濃度處理下都會影響煙青蟲存活情況。在相同溶劑、不同濃度下對煙青蟲的觸殺活性總體上隨著提取物濃度的增加，煙青蟲的死亡率在升高。其中，乙酸乙酯對煙青蟲的觸殺效果最好。當濃度為20 mg/mL，樣品處理48 h后煙青蟲的死亡率和校正死亡率分別為60.15%和59.51%。在相同質量濃度下不同溶劑提取物的殺蟲活性大小不一，其殺蟲活性依次為乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。由此可見，核桃青皮的殺蟲成分主要集中在脂溶性的有機溶劑當中，其主要殺蟲活性物質尚待后續進一步研究。在10 mg/mL的條件下，和同濃度的陽性對照相比，各樣品的作用要弱一些，這可能是樣品的純度不夠所致，需要進一步的純化和更深入研究。

2.2 核桃青皮不同溶劑提取物對煙青蟲的拒食作用

從表2可以看出，5種不同溶劑提取物對煙青蟲均具有一定的拒食活性，拒食活性依次為乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>水提取物。在相同溶劑下煙青蟲的拒食活性總體上是隨著提取物濃度的增加而升高，且拒食率明顯高于正常對照組（提取溶劑），略低于陽性對照組農藥吡蟲啉。

當質量濃度為20 mg/mL時，核桃青皮乙酸乙酯提取物對煙青蟲的拒食活性最高，處理48 h后拒食率為63.77%，陽性對照組農藥吡蟲啉的拒食率為67.53%，非常接近陽性對照（圖1）。

3 結論與討論

商洛核桃青皮提取物對煙青蟲具有一定的防治作用，其拒食率和死亡率均呈現良好的量效關系，5種不同溶劑提取物對煙青蟲的觸殺和拒食活性不盡相同。在相同濃度條件下，其殺蟲活性和拒食活性依次為乙酸乙酯提取物>水提取物>乙醚提取物>乙醇提取物>氯仿提取物；在相同溶劑條件下，提取物對煙青蟲的毒殺活性和拒食活性總體上隨提取物濃度的增加而升高，并且呈現良好的劑量效應關系。當濃度為20 mg/mL，煙青蟲處理48 h后的死亡率和校正死亡率分別為60.15%和59.51%，且觸殺率和拒食率均高于正常對照組（提取溶劑），與此同時，煙青蟲的觸殺率均高于陽性對照組農藥吡蟲啉，拒食率略低于陽性藥物吡蟲啉[5-6]。

本試驗選取5種極性不同的溶劑（水、乙醇、乙酸、氯仿、乙酸乙酯），采用超聲波方法提取核桃青皮的有效成分，從而得出核桃青皮5種不同溶劑提取物對煙青蟲的毒殺活性和拒食活性。試驗結果表明，核桃青皮乙酸乙酯提取物對煙青蟲的毒殺活性和拒食活性最強，為進一步研究核桃青皮中的殺蟲活性物質奠定了基礎。試驗過程設計溶劑對照組和陽性對照組來比較觸殺率和拒食率，充分說明了煙青蟲5種不同溶劑提取物對煙青蟲的毒殺作用，但本試驗只觀察了處理48 h后的活性，沒有把時間因素考慮進去，可能會對試驗結果產生相應的誤差，這是對活性測定的一個重要因素。而且由于植物次生物質種類多，結構復雜，所得的乙酸乙酯提取物仍是一類混合物，還必須進一步分離純化得到殺蟲活性單體物質[8-10]。研究發現，核桃青皮不同溶劑提取物均對煙青蟲具有明顯的毒殺作用，將其作為植物源殺蟲劑與殺菌劑來開發利用，變廢為寶，意義重大[11]，并可為以后的研究提供更廣闊的空間。但關于其在防治農業害蟲方面的研究卻剛剛起步，若能從核桃青皮中提取出具有藥用價值的活性成分，不僅能緩解大量核桃青皮堆積帶來的環境問題，還能增加果農收入，農業的發展前景將更加廣闊。

4 參考文獻

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