肺腺癌組織中RNA結合蛋白38的表達及意義

尚自強，王洪江，杜同心，王勇濤，馮雪，童瑩

(1新疆醫科大學附屬腫瘤醫院，烏魯木齊830011；2新疆維吾爾自治區腫瘤防治研究所)

肺腺癌組織中RNA結合蛋白38的表達及意義

尚自強1，王洪江1，杜同心1，王勇濤1，馮雪2，童瑩1

(1新疆醫科大學附屬腫瘤醫院，烏魯木齊830011；2新疆維吾爾自治區腫瘤防治研究所)

目的 觀察肺腺癌組織中RNA結合蛋白38(RNPC1)mRNA和蛋白的表達，探討其在肺腺癌發生發展中的作用。方法 取50例肺腺癌患者的癌組織(觀察組)和對應的癌旁組織(對照組)。采用RT-PCR法檢測兩組RNPC1 mRNA相對表達量，Western blot法檢測兩組RNPC1蛋白相對表達量。結果 觀察組RNPC1 mRNA及蛋白的相對表達量分別為0.357±0.170、0.294±0.149；對照組分別為0.271±0.128、0.206±0.099；觀察組RNPC1 mRNA及蛋白表達量均高于對照組(P均<0.01)。RNPC1 mRNA表達與肺腺癌患者TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，RNPC1蛋白表達與肺腺癌患者浸潤深度、TNM分期有關(P均<0.05)。結論 RNPC1在肺腺癌組織中呈高表達，在肺腺癌的發生發展過程中起重要作用。

肺腫瘤；肺腺癌；RNA結合蛋白38；腫瘤浸潤；腫瘤分期

肺癌是目前全世界發病率最高的惡性腫瘤，多數患者發現時已為晚期，喪失了手術治療機會。目前興起的分子靶向治療在手術、放化療等傳統方式之外開辟了新的治療途徑。RNA結合蛋白38(RNPC1)是公認的致癌基因，可通過抑制抑癌基因p53的表達，促進腫瘤發生發展。國外報道，RNPC1在前列腺癌、結直腸癌、淋巴瘤等多種腫瘤組織中呈高表達，但關于其在肺腺癌中的表達情況少見報道。

本研究觀察了肺腺癌組織中RNPC1基因及蛋白的表達情況，探討RNPC1基因在肺腺癌發生發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機選取2012年10月～2015年6月新疆醫科大學附屬腫瘤醫院收治的肺腺癌患者50例，男40例、女10例，年齡41～79(64.1±9.6)歲。TNM分期Ⅰ期16例、Ⅱ期16例、Ⅲ期18例，細胞分化程度低分化9例、中分化33例、高分化8例，浸潤深度T1～T2期35例、T3～T4期15例，合并淋巴結轉移27例。術中取癌組織(觀察組)以及遠隔癌灶5 cm以上癌旁正常組織(對照組)。標本取材后立即置于液氮中速凍，-80 ℃保存備用。

1.2 RNPC1 mRNA表達檢測 采用RT-PCR法。采用Primer5.0軟件設計引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成。RNPC1上游引物：5′-ACTACCGACGCCTCGCTCAG-3′，下游引物5′-CCCAGATATGCCAGGTTCAC-3′，擴增片段長度約200 bp；內參GAPDH上游引物5′-CGCGGGCTCTCCAGAACATCAT-3′，下游引物5′-CCAGCCCCAGCGTCAAAGGTG-3′，擴增片段長度約301 bp。應用TRIzol法提取組織總RNA，逆轉錄獲得cDNA，以cDNA為模板進行擴增。擴增條件：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35個循環；72 ℃ 6 min。取擴增產物5 μL、Marker 3 μL，2%瓊脂糖凝膠電泳，Imaging Lab凝膠圖像處理系統分析目標條帶及內參條帶的積分光密度值，以目的基因與內參GAPDH積分光密度值的比值作為RNPC1 mRNA的相對表達量。

1.3 RNPC1蛋白表達檢測 采用Western blot法。按照試劑盒說明進行蛋白提取及總蛋白濃度測定。按制膠試劑盒制膠，于12%分離膠及5%濃縮膠上電泳，冰浴中轉膜。轉膜后5%脫脂牛奶室溫封閉120 min，加入鼠抗人RNPC1單克隆抗體(1∶200，美國Santa Cruz公司)或內參β-actin(1∶750)置搖床，4 ℃孵育過夜，孵育二抗(1∶7 500)后使用ECL發光試劑盒曝光顯影。所得圖像采用Imaging Lab圖像分析軟件進行分析。RNPC1蛋白主要作用由其亞型RNPC1a發揮，故測定RNPC1a蛋白調整體積與同一標本內參蛋白β-actin調整體積的比值作為RNPC1蛋白的相對表達量。

2 結果

2.1 兩組RNPC1 mRNA及蛋白表達比較 觀察組和對照組RNPC1 mRNA的相對表達量分別為0.357±0.170、0.271±0.128，RNPC1蛋白的相對表達量分別為0.294±0.149、0.206±0.099，觀察組RNPC1 mRNA及蛋白表達均高于對照組(P均<0.01)。

2.2 RNPC1 mRNA及蛋白表達與肺腺癌患者臨床病理特征的關系 RNPC1 mRNA表達與肺腺癌TNM分期、浸潤深度、有無淋巴結轉移有關(P均<0.05)，RNPC1蛋白表達與肺腺癌浸潤深度、TNM分期有關(P均<0.05)。見表1。

表1 RNPC1 mRNA及蛋白表達與肺腺癌患者臨床病理特征的關系

3 討論

隨著分子靶向治療研究的進展，目前肺癌已有包括EGFR、ALK、KRAS、VEGF基因等分子靶向治療藥物，但這些靶向藥物的最佳適用人群尚不能包含全部肺癌患者，且分子靶向治療藥物存在不良反應多、耐受性差、耐藥等不足[1]。因此尋找新的基因靶點，將會豐富肺癌臨床分子靶向治療的選擇。

抑癌基因p53在保護基因組的完整性和預防癌癥的發生過程中起重要作用，p53功能缺失是腫瘤發生發展的重要因素[2]。RNPC1可通過抑制p53的翻譯發揮其在腫瘤發生發展過程中的作用。p53基因5′端的非翻譯區(UTR)或3′端的UTR為RNPC1抑制p53表達的區域[3]。RNPC1定位于20q13[4]，編碼一個RNA結合蛋白，表達為兩個亞型，即含有239個氨基酸的RNPC1a和含121個氨基酸的RNPC1b[5]。RNPC1a可阻止真核生物起始因子4E(eIF4E)結合p53 mRNA。它依賴其氨基端結合在p53 mRNA上，同時其羧基端控制區與eIF4E結合，通過這種方式阻止eIF4E與p53 mRNA結合。其結果是p53的翻譯起始復合體被破壞，從而降低p53的翻譯水平[4，6]，促進腫瘤的發生發展。RNPC1作為公認的致癌基因，其基因位點在多種腫瘤中表達活躍，包括前列腺癌、卵巢癌、結直腸癌、慢性淋巴細胞白血病、食管癌、乳腺癌和胃癌細胞MGC-823[7～13]。本研究結果顯示，RNPC1 mRNA及蛋白在肺腺癌組織中呈高表達，其表達水平與患者性別、年齡及腫瘤分化程度無關。RNPC1 mRNA與腫瘤浸潤程度、淋巴結轉移及臨床病理分期關系密切；RNPC1蛋白與腫瘤浸潤程度及臨床病理分期關系密切。表明RNPC1在腫瘤發生發展中具有重要作用。

綜合目前國內外相關報道，絕大多數研究結果提示RNPC1對腫瘤的發生發展主要起促進作用。然而，Xue等[14]在乳腺癌中的研究與本文結論相反，他們發現RNPC1在乳腺癌組織中的表達低于癌旁組織。研究表明，RNPC1可以靶向調節p53、MDM2等多個基因，但對這些靶基因的調節作用不盡相同。一方面，RNPC1可抑制p53的翻譯促進腫瘤發生；另一方面，其可通過結合MDM2基因3′端UTR的多個位點抑制MDM2表達，而MDM2基因編碼的蛋白p90能與p53基因結合，使p53基因失去正常功能[15]。這或許是RNPC1在不同腫瘤組織中有不同功能的作用基礎。

綜上所述，RNPC1與肺腺癌關系密切，其高表達提示肺腺癌浸潤深度較深，TNM分期較晚。RNPC1可促進肺腺癌的發生發展，可能成為人類肺腺癌分子靶向治療的一個潛在靶點。

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王洪江(E-mail: whj71210@sina.com)

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1002-266X(2017)06-0045-03

2016-08-15)