香丹注射液溶血檢查的實驗方法探討

陸 駿林 芳

（1 江蘇省無錫藥品檢驗所，江蘇 無錫 214000；2 無錫濟民可信藥業有限公司，江蘇 無錫 214000）

香丹注射液溶血檢查的實驗方法探討

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（1 江蘇省無錫藥品檢驗所，江蘇 無錫 214000；2 無錫濟民可信藥業有限公司，江蘇 無錫 214000）

目的常規體外試管法與分光光度法在香丹注射液溶血檢查中的應用比較。方法通過吸收波長，試驗恒溫時間及離心轉速的研究，建立了分光光度法測定溶血率的方法，并與常規體外試管法進行了溶血試驗的結果對比。結果常規體外試管法判斷沒有溶血或不明顯的結果，分光光度法均可測定出具體數值，且結果在溶血趨勢上具有一定的一致性。結論分光光度法更為方便，準確。適用于香丹注射液的溶血監測使用。

常規體外試管法；分光光度法；溶血率

分光光度法進行溶血率測定的較多用于醫療器械[1-2]及包材[3]，根據紅細胞破裂釋放出來的血紅素在545 nm波長處有最大吸收，通過測定溶液的吸光度從而定量測定樣品的溶血率。本文采用2種溶血性試驗方法（常規體外試管法和改進的分光光度法）對不同廠家香丹注射液進行對比考察，得出一些有益的結果，為臨床用藥安全提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器：紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司，TU-1800spc）；HH-4數顯恒溫水浴鍋（金壇市富華儀器 有限公司）；80-2型離心沉淀機（上海手術器械廠）。

1.2 材料：香丹注射液A（廠家1，批號14060611）；B（廠家2，批號20151001）；C（廠家3，批號 141014）；D（廠家4，批號1309104）；E（廠家4，批號1309233）。

1.3 動物：新西蘭家兔[體質量2.0～3.0 kg，雌雄不限，由無錫市惠山江南實驗動物廠提供，實驗動物生產許可證號SCXK（蘇）2015-0004，實驗動物質量合格證號NO.201508591]。

2 試驗方法與結果

2.1 2%紅細胞混懸液的制備：選取健康家兔1只，注射器心臟取血約20 mL。將抽取的血液迅速轉移至已放入少量玻璃珠的潔凈燒杯中，輕輕不斷搖動10 min。除去纖維蛋白原，吸取血液轉移至刻度離心管中，以約10倍量生理鹽水洗滌，充分搖勻離心沉淀，棄去上清液，重復上述步驟3次，直至離心后上清液透亮，取2 mL紅細胞，生理鹽水稀釋至100 mL，即成。當天使用。

2.2 最大吸收波長的確定：取潔凈試管一支，加入5.0 mL新鮮蒸餾水，再加入5.0 mL 2%兔紅細胞混懸液，輕度振搖，充分混勻，試管置37 ℃水浴孵育2 h后，取出置離心機中離心5 min（2000 r/min），吸取上清液，波長測量用紫外分光光度計在200～600 nm區域進行掃描，結果顯示樣品在545 nm處有最大吸收。

2.3 最佳離心速度與時間的選?。喝崈粼嚬?支，先在各管中加入0.9%氯化鈉注射液5.0 mL，再分別加入2%兔紅細胞混懸液5.0 mL。充分混勻，37 ℃水浴孵育30 min。轉速離心選取1000、2000、3000 r/min三個段位，離心時間分別選取5、10、15 min，分別取其上清液于545 nm波長處測定吸光度。

實驗表明，當轉速＜2000 r/min時溶液渾濁，部分紅細胞未達到完全沉降，當離心速度為3000 r/min時，離心時因速度加速，部分藥物分子及附加劑與紅細胞發生碰撞的力量加大，導致溶血概率上升[4]，轉速離心以2000 r/min，5 min較為合適。

2.4 常規體外試管法檢查：選取12支潔凈試管，實驗設計“4×3”（分為供試品組、陽性對照組、陰性對照組，樣品底色組共4組。每組各3支試管）。Ⅰ組為供試品組，各加入2%紅細胞混懸液5.0 mL，樣品0.6 mL，0.9%氯化鈉注射液4.4 mL；Ⅱ組為陽性對照組，各加入2%兔紅細胞混懸液5.0 mL和新鮮蒸餾水5.0 mL；Ⅲ組為陰性對照組，各加入2%兔紅細胞混懸液5.0 mL和0.9%氯化鈉注射液5.0 mL；Ⅳ組：樣品底色組[5]，0.9%氯化鈉注射液9.4 mL+樣品0.6 mL混勻。將加樣后的12支試管迅速放置37 ℃水浴，孵育2 h，觀察結果。

2.5 結果：供試品組—香丹注射液A：3支試管中，一支有血凝聚現象，振搖有血凝塊，多次振搖血凝塊消失。無溶血現象。其余廠家香丹注射液無溶血與凝聚現象發生。

2.6 分光光度法檢查：分別取“常規體外試管法檢查”項下孵育2 h的溶液12管，離心5 min（2000 r/min），上清液在545 nm波長處測定吸收值，每組測得3支管的吸收度取其均值。按公式“溶血率%=（AIAIII-AIV）/（AII-AIII）×100%”計算溶血率[6]。結果見表1。

3 討 論

3.1 本實驗通過最大吸收波長的選取，試驗恒溫時間的研究和最適離心轉速的探索，采用香丹注射液體外溶血性試驗分光光度法測定溶血率結果，與常規體外試管法進行對比。數據表明，常規體外試管法肉眼觀察判斷結果其準確性易受藥品本身顏色等因素影響。不同實驗人員比對，主觀判斷差異較大[7]。試驗時離心的速度[8]及溫度的控制在操作時應多加注意，離心時因速度加速，部分藥物分子及附加劑與紅細胞發生碰撞的力量加大，導致溶血概率上升。

表1 分光光度法檢查結果

3.2 實驗結果表明同一廠家的香丹注射液，不同批號所測得的溶血度也存在差異。這可能與該品種中含有的鞣質、蛋白質、葉綠素等雜質的去除有關。該制劑的pH值、滲透壓等理化性質及附加劑等也是產生溶血的因素。

3.3 試驗中還采用了臨床常用濃度的供試液(靜脈滴注：一次10～20 mL，5%葡萄糖250～500 mL）稀釋后使用。此時藥液由于被稀釋13.5倍，顏色干擾小，可采用肉眼判斷。

3.4 中藥注射劑溶血反應的特點體現在形成機制復雜[9]，發生范圍廣泛。采用體內、外多個試驗相結合綜合評價法，可能是一個有效的途徑。此外，因不同的中藥注射劑顏色及深淺不同，若色澤對血紅素的最大吸收有干擾[10]。因本品為有色液體，特設一底色組。在開展香丹注射液溶血性實驗時，將紅細胞懸液和藥物一并置37 ℃水浴，孵育2 h，分別通過觀察上清液溶液的顏色肉眼判斷，分光光度法測定吸光度計算溶血率來定量。分光光度法更為方便，準確。且結果與常規體外試管法在溶血趨勢上具有一定的一致性。

[1] 中國藥典.2015年版.一部[S].2015:附錄.

[2] GB/T14233.2-2005.醫用輸液、輸血、注射器具檢查方法.第二部分:生物試驗方法[S].2005.

[3] 國家食品藥品監督管理局.藥包材檢驗方法標準匯編[S].2003.

[4] 侯少貞,李耿.葛根素注射液體外溶血的實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2011,5(22):289-291.

[5] Xu F.Clinical use and the adverse reactions of sodium aescinate[J]. Dis Monitor Control,2011,5(2):123-124.

R-331 文獻標識碼：B 文章編號：1671-8194（2017）23-0025-02