分析乙肝病毒DNA病毒載量與各型乙型肝炎血清標志物之間的關系

魏穎

沛縣人民醫院檢驗科，江蘇徐州 221600

我國是乙型肝炎病毒攜帶人口大國，乙型病毒性肝炎是我國發病率極高的慢性傳染病，其患者免疫功能變差遷延難愈導致病情惡化使肝臟長期受累發展為肝硬化，以至于患者生活受到嚴重干擾[1]。世界衛生組織報道全球乙型病炎病毒感染率極高，慢性乙型肝炎是乙型肝炎病毒造成常見且嚴重一類疾病，我國作為乙型肝炎病毒攜帶人口大國之一，乙型肝炎病毒感染給我國社會造成了極大的不良影響，給患者家庭以及社會帶來了沉重負擔[2]。HBV-DNA測定從分子生物學水平進行觀察，可準確得到病毒存在以及復制的相關信息?；瘜W發光試驗依靠檢查血清標志物可得到不同免疫模式在病毒感染后出現的免疫應答。為提高診斷準確率，該次研究針對2017年2月—2018年2月該院收治的82例乙肝患者采取HBV-DNA測定以及檢查血清標志物的方式進行診斷，旨在通過對乙肝病毒DNA病毒載量與各型乙型肝炎血清標志物之間的關系進行觀察，以此了解化學發光法以及熒光定量PCR法測定HBV的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的82例慢性乙型肝炎患者。82例患者均知情并同意參加該研究且獲倫理委員批準?；颊吣挲g區間 17.8～70.3 歲，平均年齡（62.32±12.24）歲，男49例，女33例。

1.2 方法

選取 HBV 血清標志物 HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAb以及HBeAg試劑。利用化學發光法測定82例患者 HBV 血清標志物 HBsAg、HBeAg、HBeAb、HB-sAb、HBcAb等，使用儀器為雅培i2000SR。乙型肝炎病毒DNA水平采用熒光定量PCR方法進行檢測，乙肝DNA采用的定量儀器為廈門安普利公司提供的9820型PCR擴增儀。

1.3 診斷指標

乙肝標志物 ：HBsAg＜0.05 IU/mL 為 陰性；HB-sAb＜10.00 mIU/mL 為陰性；HbeAg＜1.000 S/CO 為陰性；HBeAb＜1.00 S/CO 為陰性；HBcAb＜1.000 S/CO 為陰性，反之判斷為陽性。 HBV核酸熒光PCR檢測＜5×102U/mL低于最低檢出限診斷為陰性。反之則判斷為陽性。

2 結果

結果表明，82例患者血清標志物為大多呈Hbs Ag（+ ）、HBsAb （- ）、HBeAb （+ ）、HBeAg（+ ）、HBcAb（+），HBsAg陽性總例數82例，HBV陽性總例數為42例，陽性檢出率為52.50%。乙肝免疫標志物模式與HBV-DNA比率具體見表1。

表1 乙肝免疫標志物模式以及HBV-DNA陽性例數以及比率

3 討論

乙型肝炎病毒感染的診斷主要依據包括患者的臨床癥狀、既往病史、體征、天門冬酸氨氯基轉移酶（Aspartate aminotransferase；AST）、 丙氨酸基轉移酶（Alanine transferase；ALT）等生化指標以及分子生物學指標等。此外乙肝兩對半在診斷乙型肝炎病毒感染發揮了重要作用，是目前乙肝診斷中具有檢測簡便、準確率高、耗時短等諸多優點的最常用方法。其主要包括了血清學標志物檢測指標 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb[3-4]。 HBV-DNA 載體含量檢測是判斷HBV病毒復制的準確率最高、結果最為可靠以及最直接的方法。臨床通過檢測HBV-DNA或者HBsAg是否呈陽性以此判斷是否急性肝炎、慢性肝炎以及無癥狀攜帶者。

諸多臨床研究結果表明HBV-DNA檢測陽性較為準確，該次研究采用熒光定量PCR檢測HBV-DNA以此判斷HBV病毒載體含量的多少，免疫模式1,3,5的陽性率為91.67%。與李仁杰等[5]研究中此模式陽性率90.9%的結果較為接近，證實陽性結果較為準確，可得出HBsAg是否呈陽性是判斷乙型肝炎病毒感染的主要病原學診斷指標。該次研究通過對82例患者進行檢測，選用了近年來新出現的一種較之酶聯免疫吸附試驗更高敏感性與特異性的化學發光法，其中部分患者臨床檢測顯示HBsAg陽性而HBV-DNA病毒載體檢測為陰性，這種情況可能與FQ-PCR擴增只能通過血中游離的HBV-DNA病毒載體進行判斷有關。臨床研究中表明HBV感染后病毒整合到肝細胞DNA染色體上，然后會同肝細胞的分裂、復制一同表達，此種情況下FQ-PCR檢測結果可呈陰性而利用酶聯免疫試驗法可檢測出陽性。在恢復期或者既往乙肝病毒感染病史的患者在通過藥物等治療方式清除乙肝病毒后抗原、抗體仍處于陽性，但血清中無法通過熒光定量擴增檢測到，而血清中無法通過FQ-PCR擴增檢測到HBV顆粒存在，所以檢測結果為陰性[6-10]。此外出現乙肝病毒突變的情況，此種情況下不能與熒光探針結合，所以檢測結果呈陰性。

此外該次研究中有少數乙肝患者被診斷為HB-sAg陰性，此種情況發生的因素可能與急性乙肝發生時出現抗-HBs消失的窗口期。臨床無法檢測到抗-HBs時或者僅出現低水平的感染可能會影響HBsAg方法的靈敏性。此外重疊感染同樣會影響HBsAg檢測，其具體機制是患者HBeAg以及HBsAb的感染亞型不同，相同或相繼被不同的乙肝病毒亞型感染會出現HBsAb中和同一血清病毒的情況。HBV的s區變異進而導致HBsAg的不表達，由于受檢人員者是感染乙肝的高危人群，為保證患者的安全性性，應根據醫療條件為患者進行HBV-DNA以及血清標志物兩種檢測方法，提高臨床診斷準確性。

該次研究結果表明1，3，5陽性組以及1，3陽性組HBV-DNA檢出率達到91.67%以及更高，其中1，3組中的HBV-DNA陽性含量大于105U/mL，說明HBeAg陽性患者具有較高傳染性，可以將HBeAg陽性患者單獨分組進重點治療。HBeAg是一種可準確反應體內HBV復制以及增殖水平常用的生化免疫學指標。HBeAg具有靈敏度高以及特異性好的優點。HBeAg通常用于判斷是否感染恢復、HBV復制能力是否減弱以及HBV傳染性強弱。

該次研究中2，4，5陽性組HBV-DNA檢出率較低，僅有37.50%，說明患者體內雖然存在抗體在殺傷HBV，但部分患者體內仍存在HBV-DNA復制的現象，利用酶聯免疫測試法所得到的陽性率會更低，說明未產生免疫應答以及出現免疫耐受的情況往往無法有效檢測，其多是由于低濃度的HBsAg漏檢以及免疫功能低下引起的。

綜上所述，利用乙肝患者的血清標志物指標和HBV-DNA檢測會更有利于判斷患者的病情進展，可結合患者病毒載量與感染的免疫標志物模式為臨床制定治療方案提供參考依據，也為臨床研究具有高耐藥屏障和多作用靶點的藥品提供理論依據，有利于臨床以合理的治療方式改善患者肝功能病理改變。