微柱凝膠技術在新生兒ABO溶血病輸血前檢驗中的應用

鮑瑞玲，王 閃

新生兒溶血病 （hemolytic disease of newborn，HDN）是母嬰間血型不合引起的同族血型免疫反應，胎兒遺傳了母體缺少的紅細胞血型抗原，抗原通過胎盤侵入母體后刺激母體產生免疫抗體，抗體通過胎盤絨毛膜進入胎兒血循環，產生免疫應答反應，破壞紅細胞引發溶血，以ABO血型不合最為多見［1］。ABO溶血病新生兒因體內紅細胞被破壞會伴有不同程度的貧血，嚴重者可選擇輸血改善癥狀［2］，為避免血型不適加重溶血，出現嚴重并發癥，輸血前對患兒進行交叉配血檢測十分重要。因為HDN患兒全部次側交叉配型均不合，只行主側交叉配血［3］。目前，HDN患兒實驗室血清抗體檢查主要有三項試驗，即直接抗人球蛋白試驗 （direct antiglobulin test，DAT）、游離抗體試驗及抗體釋放試驗，抗體釋放試驗為確診試驗［4］。筆者在ABO溶血病患兒輸血前采用微柱凝膠配血法 （micro－column gel test，MGT）進行檢驗，觀察檢驗效果，探究其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇筆者所在醫院2017年5月—2018年1月收治的ABO溶血病新生兒40例作為研究對象，患兒血清膽紅素水平迅速上升，發生黃疸，黃疸消退后出現嚴重貧血。其中男26例，女14例；平均日齡（2.5414±0.72） d；平均出生體重（3.21±0.98） kg。

1.2 方法 （1）對所有母親及嬰兒進行血型鑒定。（2） 使用聚凝胺配血法 （manual polybrene test，MPT）進行主側交叉配血：采集患兒血樣，與標準同型紅細胞血樣分別進行配血。取試管1只加入患兒血清或紅細胞放散液2滴，配型紅細胞懸液1滴，低離子介質 （low ionic medium，LIM）0.7 ml混合均勻，再加入聚凝胺溶液2滴混合均勻，用專用離心機離心10 s（1000 g離心力），倒掉上清液，輕輕搖動試管，觀察紅細胞是否凝集，無凝集重做。凝集后加入重懸液2滴，混合后觀察結果。（3）應用MGT進行主側交叉配血。采集患兒血樣，準備微柱凝膠試劑卡做好標記，將血樣分別加入凝膠試管中，用專用離心機離心 5 min （900 r/min，2 mn；1500 r/min，3 min）后取出觀察結果。（4）對患兒行DAT、游離抗體試驗及抗體釋放試驗。

1.3 統計學分析 運用SPSS 16.0軟件對相關數據進行分析，計數資料用率（%）表示，行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 母嬰血型鑒定結果 患兒血型A型23例（57.50%），B 型 17 例（42.50%），母親均為 O 型，患兒及其母親Rh D血型均為陽性。

2.2 交叉配血及三項試驗結果 40例患兒采用MGT、MPT進行的主側游離血清及紅細胞放散液交叉配血共200次。MPT為陽性時MGT均為陽性，MGT血清及放散液出現不合次數明顯多于MPT（P＜0.05），見表 1。

2.3 交叉配血與DAT結果 DAT陰性時MPT血清及放散液均未能檢出陽性，MGT血清及放散液檢出部分陽性，且使用MGT時DAT陽性血清及放散液不合率（86.25%、75.00%）高于 DAT 陰性（65.00%、53.33%）（χ2=11.128、9.564，P＜0.05），見表 2。

3 討論

發生ABO溶血病時以母親血型O型，胎兒A、B型多見［5］，血型為O型者具有較多的抗A或抗B免疫球蛋白抗體，因A抗原較B抗原抗原性強，因此胎兒A型者患病概率更大［6］。該研究中血型鑒定結果顯示，母親均為O型，患兒A型（57.50%）多于B型（42.50%）。為避免加重溶血反應，ABO溶血病患兒輸血前需進行血型免疫性抗體檢測。MGT的本質是血凝試驗，將抗原抗體反應與凝膠分子篩技術結合，抗原抗體在凝膠介質中可發生肉眼可見凝集反應［7］。該試驗相較于MPT用時短，操作便捷。有研究顯示，MGT在紅細胞血型不規則抗體檢測中相較于其余幾種不同方式，對Rh系統紅細胞不規則抗體的敏感度最高［8］。該次研究將MGT應用于ABO溶血病患兒輸血前檢驗亦取得良好的效果。

表1 交叉配血及三項試驗結果

表2 交叉配血與DAT結果

DAT可檢測出患兒紅細胞表面的不完全抗體，陽性結果提示患兒紅細胞被抗體致敏［9］。該次研究三項試驗結果中，DAT陽性率最低，因為ABO溶血病時，患兒結合足夠抗體的紅細胞大部分已被溶解，剩余紅細胞上結合抗體數目較少，不足以產生明顯凝集反應。游離抗體試驗檢測的是血清中游離抗體，陽性提示存在抗體但不一定致敏［10］?？贵w釋放試驗是三項試驗中敏感度最高的，該次研究中所有抗體釋放試驗結果均為陽性。從表1可知MGT血清及放散液出現不合次數明顯多于MPT，MPT為陽性時MGT均為陽性，說明MGT敏感度高于MPT。但MGT中仍存在陰性，因為患兒紅細胞抗原表達強度存在個體差異，且機體代謝變化不同，所以對交叉配血結果的準確性造成了干擾［11］。這也說明臨床中不能單一以交叉配血陰性為標準，應配合其他項檢查綜合考慮最終確定輸血方案。從表2可知，DAT陰性時MPT血清及放散液均未能檢出陽性，MGT血清及放散液檢出部分陽性，說明MGT在DAT陰性情況下敏感度比MPT高。使用MGT時DAT陽性血清及放散液不合率高于DAT陰性，說明MGT結果受紅細胞表面的不完全抗體分子數影響。

綜上所述，MGT在ABO溶血病新生兒輸血前檢驗中相較于MPT靈敏度高且具有方便快捷等優點，可以為患兒輸血方案的選擇提供參考信息，值得臨床推廣。