血清和卵泡液中睪酮對體外受精-胚胎移植的影響

盧振華 胡興文 鄭潔 夏敏 夏琪

[摘要] 目的 了解血清和卵泡液中雌二醇、孕酮、睪酮對體外受精-胚胎移植（IVF-ET）妊娠結局的影響。 方法 2013年1～12月在湖北省婦幼保健院生殖中心接受IVF-ET的患者176例，根據臨床妊娠結局，分為臨床妊娠組和未臨床妊娠組，采用化學發光法檢測這些患者基礎日血清、人絨毛膜促性腺激素（HCG）日血清、取卵日血清以及卵泡液中雌二醇、孕酮、睪酮濃度水平，比較分析兩組雌二醇、孕酮、睪酮濃度水平。 結果 臨床妊娠組HCG日血清中雌二醇、睪酮高于未臨床妊娠組，差異有統計學意義（P < 0.05）;臨床妊娠組卵泡液中睪酮的濃度高于未臨床妊娠組，差異有統計學意義（P < 0.05）;取卵日血清中雌二醇、孕酮、睪酮濃度與卵泡液中濃度呈正相關（r = 0.236、0.216、0.426，P < 0.01）。 結論 卵泡液中睪酮可以促進卵母細胞發育成熟，有利于IVF-ET臨床妊娠。

[關鍵詞] 睪酮;體外受精-胚胎移植;妊娠結局

[中圖分類號] R715.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）01（b）-0072-04

[Abstract] Objective To investigate the effects of estradiol， progesterone and testosterone in serum and follicular fluid on pregnancy outcomes of in vitro fertilization - embryo transfer （IVF-ET）. Methods From January to December 2013， 176 patients who received IVF-ET in the Reproductive Center of Hubei Maternal and Child Health Hospital were selected. According to clinical pregnancy outcome， clinical pregnancy group and non-clinical pregnancy group. The levels of estradiol， progesterone and testosterone concrtilization-embryo ttansfer， estradiol， progesterone and testosterone of daily basal serum， HCG daily serum， the serum on the day of ovulation and follicular fluid of two groups were detected. Results The levels of estradiol and testosterone in HCG daily serum? in the clinical pregnancy group were higher than that in the non-clinical pregnancy group， and the differences were significant （P < 0.05）. The concentration of testosterone in the clinical pregnancy group was higher than that in the non-clinical pregnancy group， and the difference was significant （P < 0.05）. The concentration levels of estradiol， progesterone and testosterone in the serum on the day of ovulation were positively correlated with the concentration levels in the follicular fluid （r = 0.236， 0.216， 0.426， P < 0.01）. Conclusion The testosterone in follicular fluid can promote the maturation of oocytes and facilitate the clinical pregnancy of IVF-ET.

[Key words] Testosterone; In vitro fertilization-embryo transfer; Pregnancy outcomes

接受體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization - embryo transfer，IVF-ET）的患者越來越多，但IVF-ET臨床妊娠率一直都不是很高，一般維持在30%～50%[1]。卵細胞質量會直接影響胚胎質量，進而影響到妊娠結局。但現在還沒有能夠可靠反映發育成熟卵細胞質量的指標，卵泡液是卵母細胞發育成熟的微環境，卵泡液中的激素水平會影響卵母細胞的發育成熟和卵母細胞質量，本研究檢測了接受IVF-ET患者基礎、人絨毛膜促性腺激素（HCG）日血清和取卵日卵泡液中雌二醇、孕酮、睪酮濃度水平，分析其是否與IVF-ET妊娠結局相關聯。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1～12月在湖北省婦幼保健院生殖中心接受IVF-ET的患者176例，年齡22～35歲，平均（29.4±3.3）歲。納入標準：①年齡≤35歲;②病因均為輸卵管因素、排卵障礙;③第1次IVF-ET治療;④使用黃體中期的長方案。經湖北省婦幼保健院醫學倫理委員會同意，所有患者均自愿簽署知情同意書并配合檢查過程。排除標準：①與妊娠結局相關的染色體異常;②多囊卵巢綜合征患者;③生殖系統畸形;④反復自然流產史患者;⑤子宮內膜異?；颊?⑥宮腔有積液患者。根據臨床妊娠結局，分為臨床妊娠組和未臨床妊娠組。

1.2 治療方法

所有患者行胚胎移植術（卵裂期或囊胚期）后，注射HCG（麗珠集團麗珠制藥廠，2000 U/瓶，生產批號：121112）或黃體酮（浙江仙琚制藥股份有限公司，1 mL∶20 mg，生產批號：120908）行黃體支持。移植后2周檢測尿HCG，陽性者繼續黃體支持，移植后30 d 行陰道超聲檢查，可見到孕囊、卵黃囊者診斷為臨床妊娠。

1.3 觀察指標及檢測方法

月經第3天采集靜脈血，檢測基礎激素水平;HCG注射日采集血清檢測HCG日激素水平。經陰道B超引導下抽吸（取卵壓力為120 mmHg，1 mmHg=0.133 kPa）排卵前卵泡所得，取卵泡直徑≥16 mm的未沖洗卵泡液置無菌干燥離心管中，3000 r/min 離心10 min，吸取上清液立即檢測雌二醇、孕酮和睪酮濃度。用cobas 8000全自動生化免疫分析儀（Roche公司）及其配套檢測試劑盒檢測血清和卵泡液中雌二醇、孕酮和睪酮等濃度。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析，用單樣本K-S檢驗分析計量資料是否呈正態分布，組間比較采用 t 檢驗或修正t 檢驗;相關性采用Pearson相關性分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組年齡和基礎激素水平比較

按妊娠結局分組分為臨床妊娠組和未臨床妊娠組，兩組年齡差異無統計學意義（P > 0.05）;兩組基礎激素水平差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 兩組HCG日促黃體生成素、雌二醇、孕酮、睪酮水平比較

在注射HCG前采集靜脈血檢測促黃體生成素、雌二醇、孕酮、睪酮，妊娠組血清中雌二醇、睪酮高于未臨床妊娠組，差異有統計學意義（P < 0.05P < 0.05）。見表2。

2.3 兩組卵泡液中雌二醇、孕酮、睪酮濃度比較

卵泡液中雌二醇和孕酮濃度在臨床妊娠組和未臨床妊娠組差異無統計學意義（P > 0.05）;臨床妊娠組卵泡液中睪酮濃度明顯高于未臨床妊娠組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表3。

2.4 雌二醇、孕酮、睪酮在取卵日血清中的濃度與卵泡液中濃度相關性

Pearson相關性分析結果示，取卵日血清中雌二醇、孕酮、睪酮的濃度與卵泡液中濃度呈正相關（r = 0.236、0.216、0.426，P < 0.01）。見表4。

3 討論

生育期婦女自然排卵一般是一個排卵周期發育成熟1～2個卵細胞，排出1～2個卵細胞，在輸卵管若受精，便在輸卵管發育成囊胚后再移行至子宮著床。接受IVF-ET的患者，常使用外源性促性腺激素對患者進行控制性超促排卵，促進一個排卵周期中的多個卵泡發育，以獲得比較多的成熟卵母細胞來提高每個周期的平均妊娠率。但取出的卵細胞的質量可能沒有自然排出的卵細胞質量優質?，F在還沒有可靠的指標來判斷卵細胞的質量，一般是根據卵泡直徑來反映卵細胞成熟度。大量研究表明卵泡的直徑或體積與卵子質量及妊娠結局成正相關[2-3]，Dubey等[4]認為HCG日卵泡的直徑是反映卵子發育潛能的最有效的指標。但也有持不一致的觀點，有研究者發現HCG日優勢卵泡（直徑≥18 mm）高比例組的卵子發育潛能反而降低[5];Nivet等[6]研究證實這一點，他們發現直徑15.6～17.9 mm卵泡的可移植胚胎率明顯高于直徑>18 mm的卵泡。Zhang等[7]研究得出直徑≥16 mm的卵泡占直徑≥14 mm卵泡比例的高低并不影響IVF/ICSI的實驗室指標和臨床妊娠率。

卵細胞質量是影響女性妊娠結局的主要因素[8-9]，卵泡液是卵細胞發育成熟的微環境，卵細胞外微環境的改變間接導致卵子質量發生變化[10]，卵泡液中一些激素可能對卵細胞的發育成熟起很重要的作用，影響著胚胎的發育。適量的睪酮可促進卵泡的啟動、募集及生長發育，提高排卵率?；A睪酮水平高組比基礎睪酮水平低組，優質胚胎率明顯增高[11]。本研究顯示，雖然臨床妊娠組和未臨床妊娠組的基礎激素水平均無差異，但是到了卵泡晚期（HCG注射日）臨床妊娠組血清中雌二醇和睪酮明顯高于未臨床妊娠組（P < 0.05），到了取卵日，臨床妊娠組卵泡液中睪酮明顯高于未臨床妊娠組（P < 0.05），由于血清中睪酮的濃度與卵泡液中的濃度呈正相關，HCG注射日臨床妊娠組血清中睪酮明顯高于未臨床妊娠組，推測HCG注射日臨床妊娠組卵泡液中睪酮可能就明顯高于未臨床妊娠組，說明睪酮可能有促進卵細胞發育成熟的作用，使卵細胞的質量更好。睪酮通過自分泌和/或旁分泌作用調節卵泡發育，而且免疫組化研究已經確定了人類卵泡中有睪酮受體的表達[12]。聶明月等[13]研究結果顯示當DOR患者基礎睪酮水平高于20.86 ng/dL時臨床妊娠率較高。Bosdou等[14]有關睪酮及睪酮調節劑在IVF卵巢低反應患者應用的Meta分析顯示，透皮睪酮預治療能提高卵巢低反應患者IVF妊娠率（RD = 0.15，95%CI：0.26～3.00）及活產率（RD=0.11，95%CI：0.22～0.30）。Kim等[15]在IVF治療前采用透皮的睪酮凝膠12.5 mg/d，連用21 d后開始超促排卵。睪酮預治療組比對照組在超促排卵中的重組FSH用量少，獲卵數、成熟卵子數、受精卵數及優質胚胎數均明顯高于對照組;周期臨床妊娠率和種植率也較對照組升高，且無一例患者發生不良反應。但過量的雄激素則具有相反的作用，在一些高雄激素疾病，如多囊卵巢綜合征中過高的雄激素會抑制卵泡選擇性生長，誘導卵泡發生凋亡和閉鎖，最終導致排卵功能障礙[16]。對于基礎睪酮補充的上限，經多篇文獻所述不宜超過2.11 nmol/L[17-19]。

本研究顯示，在HCG日，臨床妊娠組與未臨床妊娠組血清中孕酮濃度差異無統計學意義（P > 0.05）;而劉娟等[20]研究顯示正常范圍內隨著 HCG日孕酮濃度的升高，種植率及臨床妊娠率亦逐漸升高。

接受IVF-ET的患者取出卵細胞在體外受精，在體外培養至卵裂期胚胎或者囊胚期胚胎進行移植。胚胎在體外培養時，在基因水平上經歷了由母型調節向胚胎型調節的轉變。本研究顯示，臨床妊娠組卵泡液中睪酮的濃度水平明顯高于未臨床妊娠組（P < 0.05），可能是來自于高濃度睪酮卵泡液中的卵細胞會攜帶更多的睪酮，睪酮能促進精原干細胞的體外增殖與分化[21]，睪酮可促進蛋白質合成，影響水、鹽代謝，有利于水、鈉在體內的保留。胚胎的發育過程，需要蛋白質快速合成，水、鈉的保留使卵裂期胚胎更容易發育成為囊胚期胚胎，胚胎發育會更快，胚胎發育質量更好，使移植后臨床妊娠成功率更高。

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（收稿日期：2018-03-02? 本文編輯：任? ?念）