多花黃精從生粉到九蒸九曬過程中多糖的變化

陳瑞瑞 祖艷紅 石丁夫 杜李繼 王凱 劉玉軍 趙輝

摘要[目的]選取浙江麗水和安徽青陽2個產地的多花黃精3年生以上塊莖，研究其在九蒸九曬過程中多糖的變化。[方法]參考藥典中黃精多糖硫酸-蒽銅測定法。[結果]生黃精中多糖的含量最高，到三蒸三曬劇烈下降，此后到九蒸九曬中間數次反彈，但總體呈緩慢下降趨勢。兩組多糖均值相關性顯示，不同品種的九蒸九曬過程中多糖變化反應一致性良好。對試驗數據采取可重復雙因素方差分析顯示，10個處理間多糖含量差異達到極顯著水平，2個品種間也達到了極顯著水平。品種和處理的交互作用對多糖的影響也達到極顯著水平。[結論]該試驗結果為炮制中藥或臨床上對黃精多糖含量提出要求時提供參考，并為研究不同產地或不同黃精品種間多糖含量差異提供試驗啟發。

關鍵詞多花黃精;生粉;九蒸九曬;多糖變化

中圖分類號R?282文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2019）18-0181-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.18.049

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Changes of Polysaccharides in the Process of Polygonatum cyrtonema from Raw Flour to Nine Steaming and Nine Drying

CHEN Rui-rui1，2，ZU Yan-hong1，2，SHI Ding-fu1，2 et al（1.Anhui Academy of Science and Technology，Hefei，Anhui 230031;2.Anhui Engineering Research Center for Plant Active Component Extraction and Separation，Hefei，Anhui 230088）

Abstract[Objective]The research aimed to select the tuber of more than 3 years old of Polygonatum cyrtonema from two producing areas in Lishui of Zhejiang Province and Qingyang of Anhui Prorince，and study the changes of polysaccharides during the process of nine steaming and nine drying.[Method]This article refers to the pharmacopoeia determination of Polygonatum sulphate sulfate-yttrium copper.[Result]The content of polysaccharide was the highest in raw powder.After that，the content decreased sharply to three steaming and three drying，and then rebounded several times till nine steaming and nine drying.The relative coefficients between the two groups of the mean polysaccharides showed that the polysaccharides of different varieties during processing were consistent and good.Repeatable two-factor analysis of variance was performed on the test data and showed that the difference in polysaccharide content between the 10 treatments reached the extremely significant level，and the two varieties also reached the extremely significant level.And also the reciprocal action.[Conclusion]The results of this experiment can provide a reference for processing Chinese traditional medicine or clinical medicine on the content of polysaccharide and for figuring out the differences on the content between different species.

Key wordsPolygonatum cyrtonema;Raw powder;Nine steaming and nine drying;Changes of polysaccharide content

黃精在自然界中野生種質資源豐富，《中國藥典》2015年版一部收載的黃精有滇黃精（大黃精）、黃精（雞頭黃精）、多花黃精（姜形黃精）3種，但實際應用種尚不止此3種目[1]，其是一種傳統的藥食同源的中藥材，具有益氣補血、滋陰潤肺等功效[2]。隨著現代各種檢測儀器和檢測方法的發展，證明黃精中含有多糖類、氨基酸、微量元素、甾體皂苷、木質素等成分。其中多糖類的含量最高[3]，研究表明黃精中的粗多糖可以增強小鼠的細胞和體液的免疫力，多糖可以促進小鼠骨髓間充質干細胞成骨分化等功能[4]。

中草藥的炮制之法同樣源遠流長，是中國醫藥遺產的組成部分，數千年來國人用之于治病防病和身體保健，也保證了當代中醫臨床用藥安全有效。該研究的黃精采用九蒸九曬之法炮制[5]，與生黃精相比，消除了某些刺激性和毒副作用，增加藥物成分，藥性大大改變，偏滋補，滋腎陰，補氣血，其補益作用大增[6]。但多糖作為黃精中最主要的藥用成分，其在九制過程中如何變化直接影響著臨床用藥的考量。筆者主要研究在九蒸九曬過程中黃精多糖的變化，以期為臨床用藥或保健功能中對多糖的研制提供依據。

1材料與方法

1.1材料與儀器2種多花黃精分別取自浙江麗水和安徽青陽，植株表型存在差異，取3年生以上的塊莖。去除根須，清洗曬干。從生片開始，每蒸曬一次后取樣，切片，打磨成粉，試驗用電熱恒溫鼓風干燥箱進行切片的恒溫干燥或者干粉儲存，以及冷凍干燥機（FD-1A-50）進行低溫干燥，多糖檢測用UV-2550紫外分光光度儀。

1.2標準曲線的繪制取33 mg葡萄糖用100?mL容量瓶定容備用。取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6?mL加水至2?mL，于冰水中加8 mL現配的0.2%蒽銅硫酸，沸水浴10 min，冷卻，用紫外分光光度儀測定其在582 nm波長下的吸光度，建立濃度-吸光度標準曲線。

1.3黃精多糖的提取方法及原理稱取0.45 g干燥黃精粉，加入圓底燒瓶，加入150 mL 80%的乙醇，沸水浴冷凝回流?1 h，過濾保留固體，連同濾紙加入150 mL 純水再次沸水浴冷凝回流1 h，收集濾液用容量瓶定容到250 mL。測定時，取?1 mL 待測液加1 mL純水在冰水環境中加8 mL蒽銅硫酸，沸水浴10 min，冷卻，測定吸光度，對照標準曲線，計算其中無水葡萄糖的含量。

原理：蒽酮-硫酸法[7-8]雖與水提醇沉法[9]過程相反，但有異曲同工之效，都是利用多糖在水和有機溶劑中溶解度不同，從而達到洗去雜質純化多糖目的。此法是中國藥典中黃精多糖的檢測方法，原理是利用硫酸參與多糖的分解，被降解成單糖，單糖快速脫去水分子，產生醛類衍生物，然后與蒽酮反應得到顯色化合物，比色測定。

2結果與分析

從圖1可以看出，2個品種的多糖變化趨勢整體一致，且2個品種都顯示生粉中的多糖含量最高，之后下降，從生粉到三蒸三曬下降最劇烈，但從四蒸四曬到最后九蒸九曬中間略起落，變化緩慢，逐漸趨于穩定。2個品種相比較發現浙江麗水多花黃精多糖含量在蒸曬過程中幾乎始終高于安徽青陽黃精。對2個品種的多糖均值進行相關性分析得到相關系數達到0.97，達到顯著相關水平，說明不同的品種在九蒸九曬過程中多糖變化反應一致性良好，也說明樣品處理和檢測效果較好，誤差小。

進一步對2個品種10種處理的多糖值進行可重復雙因素方差分析， 結果表明，2個品種間多糖差異 F>F?crit，結合P值（2.6E-13）顯示，差異達到極顯著水平。同時，處理之間?F>F?crit，結合P值（7.82E-33）顯示不同處理間多糖差異也達到了極顯著水平。此外，品種和處理間的交互作用對多糖的影響也達到了極顯著水平。

3結論與討論

試驗結果表明，黃精雖然經過蒸曬后口感變好，藥性增加，但多糖含量明顯下降，尤其從生粉到三蒸三曬之間下降劇烈。從生粉到九蒸九曬之間的多糖含量差異達到極顯著水平，說明黃精的蒸曬極大地影響著黃精多糖的變化。但三蒸三曬之后趨于穩定，古法講究九制黃精，但單從多糖的成分看，為節約工時三蒸三曬或者四蒸四曬就已經與九制無太大差別，后期改變的可能更傾向于口感或者其他藥用成分。多糖作為黃精中重要的藥用成分，此試驗結果為中藥炮制或者臨床上對多糖含量提出要求時提供參考，在改變藥性的同時綜合考慮藥物成分的變化。2個品種之間含量差異也達到了極顯著水平，為后來者研究不同黃精資源中多糖含量是否存在差異提供參考。

進一步分析多糖變化從生粉到三蒸三曬多糖下降最劇烈，后直到九蒸九曬變化起伏不如之前明顯。最主要的原因可能是每次蒸的過程中一部分多糖析出溶于水蒸氣，形成水滴于鍋中，正因為這個原因，每次蒸完，液體都呈現紅糖色并有黏稠感;而每次的蒸曬都是黃精塊莖，反復3次，才能把大部分多糖蒸出，這個過程可參考水提醇沉法提取黃精多糖，利用多糖溶于水不溶于有機溶劑的特性，前期就是用熱水浸提，過濾，收集濾液。后期多糖起伏的原因可能有如下幾種可能性：①多糖的溶解度與每次的料液比、水溫和蒸煮時間有關，每次控制并不統一導致試驗產生誤差。②多糖含量逐漸穩定，但塊莖每次經過蒸曬之后質量下降，導致檢測含量增加。③多糖結構復雜，雖然有研究發現，溫度過高或蒸煮時間過長會使黃精多糖發生糖苷鍵的水解和糖的脫水反應而生成5-羥甲基糖醛（5-HMF）[10]，但目前對多糖成分的研究僅局限于初級，對多糖高級結構的研究不明確，以至于在高溫水蒸下如何變化尚不得知。因此，對多糖具體化學成分分析以及在高溫下如何變化有待進一步研究，為控制多糖質量指標和臨床上研制多糖藥物提供依據。

此次參試的只有2個品種用來研究多糖蒸曬變化趨勢，數據上略顯單薄，關于蒸曬過程中多糖變化趨勢和品種之間存在差異的結論需要收集其他品種進行檢測統計，其他比如多花黃精之外的品種是否存在這種變化趨勢以及品種間差異有待進一步研究。

參考文獻

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