蜂膠滴丸耐缺氧實驗研究

李海燕，李馳坤，張明天，成光宇

（長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130103）

蜂膠為蜜蜂科昆蟲意大利蜂（Apis mellifera L.）工蜂采集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有粘性的固體膠狀物，味苦、辛、寒，歸脾、胃經，具有補虛弱、化濁脂，止消渴之功效。蜂膠具有抗菌、抗病毒、增強免疫、抗氧化、抗疲勞、抗癌等眾多藥理作用。近年來有些文獻報道過蜂膠具有耐缺氧的作用，而我國有許多崗位需要在低氧甚至是缺氧的狀態下進行的。本研究旨在于發現并驗證蜂膠具有耐缺氧的作用，可提高人體機能的耐缺氧能力。

蜂膠具有多種活性。劉立波[1]給正常小鼠灌以蜂膠黃酮發現，蜂膠黃酮可以顯著提高小鼠肝臟超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性，降低肝臟丙二醛（MDA）含量。蜂膠在體外能明顯抑制樣自由基引發的小鼠肝微粒體脂質過氧化反應，體內能明顯抑制四氧嘧啶致小鼠肝臟的損傷作用，降低MDA含量[2]。蜂膠灌胃對正常小鼠、衰老模型小鼠腦組織中SOD、CAT、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性有顯著提高作用，同時能顯著減低腦組織中MDA含量，對腦組織起到了抗氧化保護作用[3]。蜂膠也能顯著提高老齡小鼠血清GSH-Px 活力，降低血中MDA 含量[4]；能明顯提高正常小鼠睪丸及卵巢組織的SOD 活性[5]；增加小鼠胸腺SOD 的活力，降低MDA 及NO 的含量[6]。蜂膠體外能抑制血管緊張素II（AnglI）誘導的平滑肌細胞增殖過程，增加SOD 活力，降低MDA 含量，增加高血脂癥兔SOD活力，降低低密度脂蛋白（LDL）、MDA含量[7]。小鼠灌服蜂膠4 周后紅細胞Na+ K+ ATP 酶和SOD 活性顯著高于對照組，血漿MDA 含量顯著降低[8]。在觀察蜂膠黃酮對果蠅壽命的影響及預防小鼠自由基損傷的作用時也證明，蜂膠黃酮可顯著提高果蠅及小鼠體內SOD 活性，降低MDA 含量，說明蜂膠黃酮通過有效清除自由基、抑制或減輕機體組織和細胞的過氧化過程起到延緩衰老的作用[9]。

近期研究結果表明，蜂膠能顯著抑制缺氧誘導的線粒體活性氧（ROS）的產生和小膠質細胞中核因子-B（NF-B）的激活，表明蜂膠可能有益于預防缺氧誘導的神經炎癥[10]。Julio B.Daleprane 等[11]通過體內和體外模型的實驗，證明紅蜂膠多酚是通過影響內皮細胞中的缺氧誘導因子-1來穩定抑制血管，從而發揮抗血管活性。潘燕等[12]在研究蜂膠黃酮對小鼠缺血再灌注后心肌線粒體自由基損傷時發現，與對照組比較，給藥組的SOD、GSH-Px、總抗氧化能力（T-AOC）在力竭后的不同時刻均明顯升高，MDA 含量明顯下降，其原因可能與增強機體缺氧耐受力有關。近期報道，具有耐缺氧的處方組成中也含有蜂膠[13,14]。為了驗證蜂膠是否對小鼠具有提高缺氧耐受力的能力，本試驗對蜂膠滴丸進行了如下研究，為評價蜂膠具有提高缺氧耐受力提供實驗依據。

1 材料、試劑、儀器

1.1 材料

蜂膠滴丸（廣州市杰禾蜂業有限公司），由蜂膠、聚乙二醇6 000 為原料制成的保健食品；規格：20 mg/粒（每粒含蜂膠10 mg）；樣品形態：圓形；食用方法及食用量：口服，4 粒/次，每日 1 次；保質期：24 個月；貯存方法：常溫。

1.2 試劑及配制

羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，沈陽化學試劑廠，批號：200111011，規格：250g）。

分別按 40.0 mg/kg、26.7 mg/kg、13.3 mg/kg 劑量（相當于人體推薦劑量的30 倍、20 倍、10 倍）配制蜂膠高、中、低劑量組。稱取蜂膠適量，加入0.5%CMC-Na，配制成濃度分別為4.00、2.67、1.33 mg/mL 的溶液，充分混勻備用；陰性對照組劑量為10 mL/kg，配制0.5%CMC-Na 溶液。

1.3 實驗動物

小鼠：昆明種，雄性，80 只，18～22 g，SPF 級；質量合格證：No.211002300022072。試驗動物提供單位：遼寧長生生物技術有限公司；試驗動物生產許可證號：（遼）2017-0001；試驗動物使用許可證號：SYXK（遼）2017-0001。

SPF 級維持鼠料（沈陽市于洪區前民動物實驗飼料廠）；生產許可證號：SCXK（遼）2017-0002；試驗動物飲用水：純化水，自由攝??；動物室環境條件：溫度20～25 ℃、相對濕度40%～70%。

1.4 儀器

秒表（DM1-001，上海銀澤儀器設備有限公司）；電子天平（CP124S，北京賽多利斯儀器系統有限公司）；電子天平〔PL1002E型，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司〕。

2 實驗方法

2.1 常壓耐缺氧實驗

動物在實驗動物房中適應3d，取雄性小鼠40 只，按體重隨機分為4 組，即蜂膠高、中、低3 個劑量組，1個陰性對照組，每組10 只。連續灌胃給予30 d，于末次灌胃后1 h，將各組小鼠分別放入盛有5 g 鈉石灰的250 mL 磨口瓶內（每瓶1 只），用凡士林封嚴瓶口，以呼吸停止為指標，記錄小鼠因缺氧而死亡的時間。

2.2 亞硝酸鈉中毒存活實驗

動物在實驗動物房中適應4 d，取雄小鼠40 只，按體重隨機分為4 組，即高、中、低3 個劑量組，1 個陰性對照組，每組10 只。給予方式均為灌胃，連續給予30 天。于末次灌胃后1h，各組小鼠按照240mg/kg劑量腹腔注射亞硝酸鈉（注射量為0.1 mL/10g），立即計時，記錄動物存活時間。

2.3 數據處理

實驗數據用spss22 軟件，采用單因素方差分析，組間比較采用Duunet-t檢驗進行統計學處理，P＜0.05表示有顯著性差異，證明該數據具有統計學意義。

3 結果與分析

3.1 小鼠常壓耐缺氧試驗

與陰性對照組比較，蜂膠各劑量組試驗動物體重均無顯著差異（P＞0.05），蜂膠中、低劑量組試驗動物存活時間具有顯著差異（P＜0.05）。結果見表1、表2。

表1 蜂膠滴丸常壓耐缺氧實驗動物體重Tab1 Change of mice weight in anti-hypoxia test of Propolis Dropping pills （g）

表2 蜂膠滴丸常壓耐缺氧實驗結果Tab 2 Result of anti-hypoxia test of Propolis Dropping pills

3.2 亞硝酸鈉中毒存活試驗

與陰性對照組比較，蜂膠各劑量組試驗動物體重均無顯著差異，蜂膠中、低劑量組試驗動物注射亞硝酸鈉后存活時間具有顯著差異（P＜0.05）。結果見表3、4。

表3 蜂膠滴丸亞硝酸鈉中毒存活實驗小鼠體重Tab3 Change of mice weight in sodium nitrite poisoning test of Propolis Dropping pills （g）

表4 蜂膠滴丸亞硝酸鈉中毒存活實驗結果Tab4 Result of sodium nitrite poisoning test of Propolis Dropping pills

4 結論

本實驗分別以蜂膠低、中、高劑量連續經口灌胃給藥30 d 后，觀察其對小鼠常壓耐缺氧實驗、亞硝酸鈉中毒存活實驗的影響。結果顯示，低、中劑量組可以顯著延長小鼠常壓耐缺氧的時間以及亞硝酸鈉中毒的存活時間，并且對小鼠體重均無明顯影響。由于2 個實驗的結果均呈陽性，根據保健食品對提高缺氧耐受力功能的判定要求，本品具有提高缺氧耐受力的作用。