兩種結核菌培養基培養抗酸桿菌評價研究

李昌錦，楊 潔*

（聯勤保障部隊第900醫院梅峰院區檢驗科，福建 福州 350001）

結核病一種傳染病，盡管病情進展較慢，但是實際上依然是嚴重威脅著患者的健康?，F階段，在對結核病診斷過程中，主要是采用分離培養抗酸桿菌的方式，不僅僅是為了早期發現，也是為了促進治療。在選擇合適的結核菌培養基進行培養時，如何選擇陽性率高且污染率低的培養基，近些年來始終是結核病診斷的重點[1]。那么，我院通過對兩種結核菌培養基培養抗酸桿菌評價，在探究中大有收獲?，F在把我院對兩種結核菌培養基培養抗酸桿菌的評價情況報告如下：

1 資料和方法

1.1 一般資料

以我院收治疑似肺結核患者的50份痰標本作為研究對象，同時選擇20份H37Rv標準菌株。實驗中自制的羅氏培養基的主要成分有新鮮雞卵液、6%孔雀綠、甘油、磷酸二氫鉀、枸櫞酸鎂、蒸餾水等，參照《臨床技術操作規范結核病分冊》進行配制。

1.2 方法

首先，液化痰標本，視標本性狀，加入1-2倍體積的消化液（N-乙酰-L-半胱氨酸-4%氫氧化鈉）在渦旋振蕩器上振蕩1分鐘，使痰標本充分勻化，室溫靜置15分鐘后分別于實驗室自制的羅氏培養基與貝索羅氏培養基中進行接種，接種量為0.1ml，接種后來回晃動，使標本均勻鋪于斜面上，每份標本接種兩支培養基。其次，H37Rv標準菌株用生理鹽水在磨菌管中制備1麥氏濁度，按上述方法接種培養基。接種后斜面向上于37℃孵育箱中平放24小時后，檢查培養基污染情況，擰緊瓶蓋，將培養基豎直放置，37℃繼續培養。接種后第三天、第七天各觀察一次，此后每周觀察一次，如有菌落生長，則進行抗酸染色涂片鏡檢以鑒別污染或分枝桿菌生長。最后，當確定為抗酸桿菌時，就以培養為陽性作為判斷。當連續五十六天無菌落生長，就以陰性進行統計。

1.3 觀察指標

觀察兩種培養基上抗酸桿菌的陽性率、污染率及生長時間，同時也觀察兩種培養基上標準菌株的生長時間。

1.4 統計學方法

使用統計學軟件SPSS 22.0，計量資料主要是用t來檢驗，計數資料主要是用x2來檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種結核菌培養基的陽性率與污染率比較

貝索羅氏培養基的陽性率為16%，實驗室自制的羅氏培養基陽性率為16%，兩組培養基的陽性率進行比較，P＞0.05，無統計學意義；實驗室自制的羅氏培養基的污染率（12%）高于貝索羅氏培養基的污染率（2%），P＜0.05，差異有統計學意義。見表1。

表1 兩種結核菌培養基的陽性率與污染率

2.2 兩種結核菌培養基的生長時間比較

貝索羅氏培養基和實驗室自制的羅氏培養基的痰標本培養時間比較，P＞0.05，無統計學意義；兩種培養基比較，貝索羅氏培養基中標準菌株的生長時間較短，P＜0.05，差異有統計學意義。見表2。

表2 兩種結核菌培養基的生長時間比較

3 討 論

分枝桿菌培養并進行菌種鑒定是結核病病原學診斷的金標準，是確定結核病診斷和化療方案的重要依據。由于抗酸桿菌在分離培養過程中，常常會受到諸多因素的影響，導致污染率大幅度增高，痰標本前處理液沉渣是培養污染率高的主要原因之一[2]，這時候就要為抗酸桿菌的培養選擇最適合的培養基與采用正確的操作技術[3]。張皎月[4]在研究中表明，結核病具有傳染性，該疾病的早期發現意義重大。在對結核病中痰標本中抗酸桿菌分離培養時，貝索羅氏培養基的污染率相對較好，這主要是：一、貝索羅氏培養基添加成分更多，二、可能是由于自制的羅氏培養基滅菌效果不佳。痰標本前處理是影響陽性率與污染率的重要因素，痰液成分復雜，含有的菌量大且廣，前處理可殺滅雜菌控制污染率，同時為了盡可能保存分枝桿菌的活力，前處理過程應不超過20分鐘。張永強[5]等在研究中強調，在抗酸桿菌的培養過程中，采用貝索羅氏培養基去培養標準菌株的時候，標準菌株的生長時間就會大大縮短，至少，生長時間會大大小于自制的羅氏培養基。

對此，我院通過對抗酸桿菌進行貝索羅氏培養基和實驗室自制的羅氏培養基進行分離和培養，研究結果表明，貝索羅氏培養基和實驗室自制的羅氏培養基的陽性率比較，P＞0.05，無統計學意義。同時，實驗室自制的羅氏培養基的污染率是12%，高于貝索羅氏培養基的污染率（2%），P＜0.05，差異有統計學意義。貝索羅氏培養基和實驗室自制的羅氏培養基的痰標本培養時間比較，P＞0.05，無統計學意義；兩組培養基中，貝索羅氏培養基中標準菌株的生長時間較短，P＜0.05，差異有統計學意義。說明，貝索羅氏培養基應用過程中抗污染能力更強，更加適合日益復雜的臨床標本，也更適用于標準菌株的傳代培養。

綜上所述，貝索羅氏培養基在培養抗酸桿菌上體現了較好的效果，且污染率低，值得在臨床上推廣應用。