絲氨酸蛋白酶1在胃癌組織中的表達及其影響因素分析

江強

[摘要]目的 探討胃癌患者癌組織中絲氨酸蛋白酶1（HTRA1）的水平變化及其影響因素。方法 選取2016年7月～2019年7月于我院臨床確診的220例胃癌患者作為研究對象，采用免疫組織化學方法檢測患者胃癌組織及遠癌組織中的HTRA1表達情況，并分析HTRA1表達與胃癌患者臨床特征的關系。結果 HTRA1蛋白在胃癌組織中的陽性表達率（13.18%）低于遠癌組織（86.82%），差異有統計學意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達陽性與陰性患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣比較，差異有統計學意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達陽性與陰性患者的年齡、性別、組織分化程度、淋巴結轉移及TNM分期比較，差異無統計學意義（P>0.05）;Logistic回歸分析結果顯示，腫瘤直徑（β=0.532，OR=1.873，95%CI 0.372～2.711）、浸潤深度（β=0.837，OR=1.103，95%CI 0.822～2.014）、吸煙史（β=0.486，OR=1.569，95%CI 1.023～2.832）、酗酒史（β=0.590，OR=1.690，95%CI 0.934～3.721）、飲食習慣（β=0.829，OR=1.552，95%CI 1.032～2.831）均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達的獨立危險因素（P<0.05）。結論 胃癌中HTRA1蛋白表達與腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣有關，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習慣均是影響胃癌的危險因素。

[關鍵詞]胃癌;絲氨酸蛋白酶1;相關因素;預后

[Abstract] Objective To investigate the changes of serine protease 1 （HTRA1） in gastric cancer patients and the influencing factors. Methods A total of 220 patients with gastric cancer clinically diagnosed in our hospital from July 2016 to July 2019 were selected as study objects. The expression of HTRA1 in gastric cancer and distant cancer was detected by immunohistochemistry， and the relationship between HTRA1 expression and clinical characteristics of gastric cancer was analyzed. Results The positive expression rate of HTRA1 protein in gastric cancer tissues （13.18%） was lower than that in distant cancer tissues （86.82%）， the difference was statistically significant （P>0.05）. The differences in tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state between positive and negative HTRA1 protein expression patients were statistically significant （P<0.05）， while the difference in age， gender， tissue differentiation degree， lymph node metastasis and TNM stage between positive and negative HTRA1 protein expression patients were not statistically significant （P>0.05）. Logistic regression analysis showed that tumor diameter （β=0.532， OR=1.873， 95%CI 0.372-2.711）， invasion depth （β=0.837， OR=1.103， 95%CI 0.822-2.014）， smoking history （β=0.486， OR=1.569， 95%CI 1.023-2.832）， drinking history （β=0.590， OR=1.690， 95%CI 0.934-3.721） and mental state （β=0.829， OR=1.552， 95%CI 1.032-2.831） were independent risk factors affecting gastric cancer （P<0.05）. Conclusion HRA1 protein expression in gastric cancer is related to tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state. Tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state are all risk factors affecting gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer; Serine proteinase 1; Related factors; Prognosis

胃癌是臨床上常見的一種惡性腫瘤，發病率較高，病死率在惡性腫瘤中居第3位[1]。隨著時代的進步，人們生活水平不斷提升，生活方式及飲食習慣的改變直接導致胃癌的發病率逐年上升[2]。相關研究顯示[3]，對于胃癌的治療方法，臨床上大多以5氟尿嘧啶為主的藥物治療。常用藥物有紫杉醇、伊立替康及第三百鉑等，但效果并不能讓患者及醫師滿意。因此，臨床上開始從胃癌患者體內基因和分子水平探討其病情變化[4]。大量研究顯示[5-7]，絲氨酸蛋白酶1（HTRA1）基因在子宮內膜癌、卵巢癌、肝癌等多種癌癥中表現為低表達，提示HTRA1具有腫瘤抑制功能，但在胃癌中未有研究證實其表達情況。本研究選取我院收治的220例胃癌患者作為研究對象，旨在探討胃癌患者癌組織中HTRA1水平的表達情況，并分析其影響因素，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年7月～2019年7月于我院臨床確診的220例胃癌患者作為研究對象，其中男125例，女95例;年齡27～80歲，平均（63.91±7.85）歲;腫瘤直徑<5 cm 的有101例，≥5 cm的有119例;組織分化程度：中或高分化105例，低或未分化115例;浸潤深度：T1～T2 68例，T3～T4 152例;有淋巴結轉移172例，無淋巴結轉移48例;TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期88例，Ⅲ～Ⅳ期132例。本研究已經醫院醫學倫理委員會審核批準，所有患者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

納入標準：①患者術前均未接受過放療或化療[8];②無其他惡性腫瘤病史者;③神志清楚、能進行語言溝通交流者;④愿意配合者。排除標準：①精神、認知有障礙者;②病情不穩定或病情急劇惡化者。

1.2觀察指標及評價標準

采用免疫組化法檢測胃癌及遠癌組織中的HTRA1蛋白表達情況，分別對患者的胃癌及遠癌組織進行免疫組化S-P法染色。石蠟切片二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，H2O2室溫孵育20 min滅活內源性過氧化物酶，切片抗原修復后，滴加鼠抗人HTRA1一抗50 μl，4℃過夜，過夜后將切片室溫平衡1 h，加入抗鼠IgG，37℃，DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封片、鏡檢。兩項的乘積即為該病例的免疫組化評分：0分為陰性（-）;1～4分為弱陽性（+）;5～8分為中度陽性（++）;9～12分為強陽性（+++）。以≥5分判斷為陽性，<5分判斷為陰性。

1.3統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，相關因素采用Logistic回歸分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1患者胃癌及遠癌組織中的HTRA1蛋白表達情況

HTRA1蛋白陽性呈棕褐色顆粒，主要表達于細胞核中，HTRA1蛋白在胃癌組織中陽表達率為13.18%（29/220），而在遠癌組織中陽性表達率為86.82%（191/220）?；颊呶赴┙M織中的HTRA1蛋白表達低于遠癌組織，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達的單因素分析

HTRA1蛋白表達陽性與陰性患者的患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣比較，差異有統計學意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達陽性與陰性患者的年齡、性別、組織分化程度、淋巴結轉移及TNM分期比較，差異無統計學意義（P>0.05）（表1）。

2.3影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達的因素的Logistic回歸分析

以患者的臨床特征為自變量，胃癌組織中的HTRA1蛋白表達為應變量，最終將腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣納入Logistic回歸分析。結果顯示，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達的獨立危險因素（P<0.05）（表2）。

3討論

胃癌是臨床上消化科常見的惡性腫瘤，發病率較高，引起胃癌的主要原因是人們的生活習慣、工作壓力、幽門螺桿菌的感染及飲食習慣等造成的[9]。相關研究證明[10-11]，絕大多數的胃癌患者屬于腺癌，早期胃癌癥狀不明顯，晚期胃癌表現為貧血、消瘦及營養不良等癥狀，且小部分會出現上腹不適、噯氣等特異性癥狀，與胃慢性疾病癥狀較為相似，易被忽略。因此，目前為止我國胃癌的早期診斷率較低。胃癌又為分為早期胃癌和進展期胃癌，早期胃癌是指癌組織局限于胃黏膜下層的胃癌，肉眼可分清形態;進展期胃癌是指癌組織浸潤深度已超越黏膜下層的胃癌[12]。此外，相關資料證明[13]，在人們的飲食習慣中，膳食含有促癌真菌、N-亞硝基化合物、新鮮蔬菜的缺乏、幽門螺旋菌感染及遺傳易感等是胃癌疾病的高發因素。大量研究顯示，腫瘤的發生是一個涉及多個癌基因激活和抑癌基因失活的復雜演講過程[14-16]。

近年來研究證實[17]，膜蛋白酶與腫瘤的發生日益密切，如HTRA1等，參與了多種惡性腫瘤的發生發展過程。HTRA1是一個蛋白酶家族成員之一，也是一種具有熱休克蛋白性質的膜蛋白酶，在哺乳動類動物里扮演者重要的角色，特別是在消化、凝血和補體系統方面。相關研究顯示[18]，臨床上HTRA家族同源物有4類，其中包括HTRA1、HTRA2、HTRA3及HTRA4。HTRA同源物均包含1個高度保守的胰酶樣蛋白酶結構域和1個1～2碳末端盤狀同源區域。研究顯示，盤狀同源區域是蛋白質反應模塊，作為多聚體信號復合物的組織者發揮重要作用，同時在臨床被作為是激活細菌和人類HTRA家族成員蛋白酶活性的開關[19]。此外，據相關資料報道[20]，HTRA1基因包含了9個外顯因子，編碼458個氨基酸，定位于染色體10q26.2。HTRA1在宮頸癌、黑色素瘤、子宮內膜癌等多種癌癥中表達水平較低，這提示HTRA1對腫瘤有抑制作用。

本研究結果顯示，HTRA1蛋白在胃癌組織中的陽性表達率（13.18%）低于遠癌組織（86.82%），差異有統計學意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達陽性與陰性患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣比較，差異有統計學意義（P<0.05）。提示HTRA1可促進胃癌的生長、侵襲和轉移，為胃癌預后的一項重要指標。同其他惡性腫瘤一樣，在胃癌的發展過程中HTRA1起到了至關重要的作用。Logistic回歸分析結果顯示，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習慣均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達的獨立危險因素（P<0.05）。提示HTRA1表達水平與胃癌發生關系密切，且胃癌組織中HTRA1水平表達與吸煙、酗酒、精神狀態及飲食習慣有一定關系。

綜上所述，胃癌患者體內HTRA1水平缺失與腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習慣有關，且腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習慣均是影響胃癌的獨立危險因素，通過以上指標有助于發現胃癌治療的新靶點。

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（收稿日期：2019-09-18? 本文編輯：閆? 佩）