細胞DNA定量分析技術在膀胱尿路上皮癌診斷中的臨床應用價值

王燁，王強，孔令彩，張然樓，孟凡全

（山東省臨沂市中醫醫院，山東 臨沂）

0 引言

尿路上皮癌是發生在泌尿系統尿路上皮的一種惡性腫瘤，分為上尿路上皮癌和下尿路上皮癌，其中又以下尿路上皮癌特別是膀胱尿路上皮癌最常見，約占90%，其余尿路部位較為少見，僅占5%。其在泌尿系統腫瘤患者中具有較高的發病率，對該病進行準確的診斷有助于患者的盡早治療，對于提高腫瘤的治療效果，改善患者生活質量，延長生存期具有一定的積極意義。隨著DNA定量分析技術的深入研究，該項技術用于評估患者是否存在惡性腫瘤具有廣闊的前景，且具有標本采集方便、安全、無創等優勢，有助于對患者的病情進行評估。對于臨床工作人員而言，該診斷方式具有靈敏性、準確性高的特點[1]。本項研究以90例患者為研究對象，對比分析細胞DNA定量分析技術與液基細胞學檢查（TCT）對膀胱尿路上皮癌診斷的應用價值，詳細情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2018年1月至2019年1月收治的90例膀胱尿路上皮癌患者作為研究對象，男性54例，女性36例，男女比1.5:1，年齡28～86歲，平均（59.31±6.40）歲，均給予細胞DNA定量分析與TCT檢查，且患者最終均進行膀胱內鏡活檢，經病理檢查確診。所有患者均知情同意本次研究，且經我院倫理有關部門批準。

1.2 方法

標本采集：取患者清晨首次中段尿液200 mL，將標本放置于離心管之中，進行離心處理，2000 r/min，時間為10 min，取部分沉淀細胞，使用沉降式液基染色機（北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司提供）制作1張薄層細胞片，進行巴氏染色；另取部分細胞使用涂片離心機用于制成薄層細胞片，進行DNA染色程序（Feulgen染色法）。

TCT診斷：巴氏染色（廣州市達誠醫療技術有限公司）片由我科經驗豐富主治職稱以上醫師三人分別復診，依據巴氏染色分級，診斷結果可分為4級：Ⅰ級，未見腫瘤細胞；Ⅱ級，可見少數異型細胞；Ⅲ級，可見可疑癌細胞；Ⅳ級，可見癌細胞。最終Ⅰ級與Ⅱ級定為陰性診斷，Ⅲ級與Ⅳ級定為陽性診斷。

細胞DNA定量分析：對DNA染色的薄層細胞片，采用全自動細胞圖像分析系統[麥克奧迪（廈門）醫療診斷系統有限公司]對DNA染色片進行處理，通過測定細胞核中染色質的IOD值對細胞染色質含量進行判定，并使用DNA指數表示。結果可分為3種：（1）DNA指數為2，表示以正常2倍體細胞為主，未見異倍體細胞；（2）具有DNA指數高于2.5或小于2的細胞，且被檢測出細胞數量高于細胞總數10%；（3）出現大量DNA指數超過2.5的細胞或檢測到異倍體細胞峰。第一種為陰性，第二、三種判定為陽性。

病理診斷：對TCT及細胞DNA定量分析技術檢查結果為陽性的病人要進一步進行膀胱內鏡活檢，并且對于檢查結果為陰性的，但仍然存在臨床癥狀的病人同樣要進行膀胱內鏡活檢，活檢標本經常規病理處理（日本櫻花自動脫水機），石蠟包埋切片，HE染色，活檢病理切片經我科經驗豐富主治職稱以上醫師三人分別復診。依據尿路上皮癌WHO/ISUP分類系統進行分級[2]，依據乳頭及固有層浸潤的組織學模式進行浸潤判斷[3]。

1.3 觀察指標

觀察兩組檢查方式診斷準確率。

1.4 統計學分析

將數據納入SPSS 18.0軟件中分析，計量資料用均數±標準差（ ±s）表示，計數資料用率（%）表示，采用t和χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經膀胱鏡活檢病理檢查90例尿路上皮癌患者，依據WHO/ISUP分類系統其中69例為低級別（77%），21例為高級別（23%）。依據乳頭及固有層浸潤的組織學模式非浸潤性病變71例（79%），浸潤性病變19例（21%）。此90例患者尿液分別經細胞DNA定量分析與液基細胞學檢查，其中細胞DNA定量分析檢出率為98.9%，液基細胞學檢查檢出率為80.0%，兩種檢查方式對比具有統計學意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 兩種檢查方式準確率對比（n, %）

3 討論

泌尿系統尿路上皮癌在臨床中較為常見，在腎盂、輸尿管、膀胱以及前列腺等部位均可能發生。對尿路上皮癌診斷的方式較多，常見的有影像學檢查、膀胱鏡檢查、尿液分析以及尿脫落細胞學檢查等[4]，其中內鏡下活檢病理檢查是公認的診斷此種疾病的金標準，但內鏡檢查屬于介入性檢查方式，患者較痛苦。而影像學檢查雖能夠對腫瘤進行分級評估，但所用造影劑對于患者的腎功能存在影響，且無法對原位癌進行檢測，使用范圍受到限制[5]。尿脫落細胞學的方法，又受到腫瘤的大小、分期、個體差異及腫瘤侵襲能力等客觀因素的影響，尿液中脫落腫瘤細胞多少存在較大差異，且形態缺乏典型性等，雖可輔以免疫細胞化學的方法，但其敏感性較低，極容易出現誤診的情況[6-7]。

據研究表明，當機體細胞發生癌變時，其細胞核中的DNA含量顯著升高，且DNA含量變化能夠直接反應細胞的增殖能力[8]。DNA含量較高的腫瘤，在分化、轉移以及復發等方面具有顯著的惡性生物學行為。DNA含量以及倍體的變化能夠有效的反應細胞的增殖狀態，異多倍體屬于判斷惡性腫瘤的主要指標之一。細胞DNA定量分析正是基于以上理論進行的技術開發。對尿脫落細胞DNA含量進行檢測能夠作為診斷尿路上皮癌的依據。研究證明，該檢查方式在口腔癌、宮頸癌、肺癌等方面均具有較高的診斷價值。

本研究中，細胞DNA定量分析的診斷準確率顯著高于TCT，組間數據對比具有統計學意義。提示對膀胱尿路上皮癌患者給予細胞DNA定量分析能夠取得理想的結果，在一定程度上防止誤診、漏診，實現了檢測的自動化、標準化、高效率。對于無血尿等表現的患者，可先進行TCT檢查，對于可疑者再給予細胞DNA定量分析檢查，避免誤漏診情況的發生。

綜上所述，細胞DNA定量分析在診斷膀胱尿路上皮癌方面具有準確、安全、無創、高效等優點，能夠對常規細胞學診斷方式的不足之處進行彌補，具有較高的敏感性，可有效減少臨床誤診和漏診，使患者盡早確診，盡早治療，應用價值高，值得在臨床推廣使用。