肝纖維化血清標志物與HBV-DNA聯合檢測在慢性乙肝疾病進程中的應用價值

任婷玉 廖奕浪 林芳楠 宋春麗 王大明 周義文

【摘要】 目的：探究肝纖維化標志物和HBV-DNA聯合檢測在慢性HBV感染后疾病進程中的應用價值。方法：回顧性分析2017年1月-2019年12月診斷為HBV攜帶者58例（對照組）、慢性乙型肝炎患者107例（慢性乙型肝炎組）、乙肝肝硬化患者34例（肝硬化組）的病歷資料，檢測并觀察三組的肝纖維化標志物HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN和HBV-DNA載量，分析各指標之間及各指標與疾病進程的相關性，并繪制受試者工作特征（ROC）曲線。結果：肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN在對照組、慢性乙型肝炎組、肝硬化組中的含量依次增加，HBV-DNA載量在慢性乙型肝炎組中最高，其次是對照組;各指標在各組中的檢測結果比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。血清肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN之間均呈正相關關系（P<0.01），其中PCⅢ與Ⅳ-C之間為高度相關（rs=0.897，P<0.01）。血清肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN與HBV感染后疾病發展呈正相關（P<0.05），其中HA與HBV感染后疾病進程顯著相關（rs=0.548，P<0.01）。HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HBV-DNA單一檢測對應AUC分別為0.925、0.929、0.916、0.899、0.630，聯合檢測對應AUC為0.959。結論：HBV在慢性乙型肝炎患者中呈現較高水平的復制，在肝硬化階段復制水平降低。肝纖維化四項指標在HBV感染后隨著疾病發展含量升高，其含量與疾病發展呈正相關關系，HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN四項指標之間也具有正相關關系，其中PCⅢ與Ⅳ-C含量高度相關，HA含量與疾病進程明顯相關。聯合檢測肝纖維化四項血清學標志物與HBV-DNA載量可提高肝纖維化的診斷效能。

【關鍵詞】 乙型肝炎 肝纖維化 血清標志物

Application Value of Serum Liver Fibrosis Markers and HBV-DNA in Disease Progression after Chronic Hepatitis B Disease/REN Tingyu， LIAO Yilang， LIN Fangnan， SONG Chunli， WANG Daming， ZHOU Yiwen. //Medical Innovation of China， 2021， 18（10）： 0-033

[Abstract] Objective： To explore the application value of HBV-DNA and serological markers for liver fibrosis on disease progression in chronic HBV infected patients. Method： From January 2017 to December 2019， the data of 58 patients with HBV carriers （control group）， 107 patients with chronic hepatitis B （chronic hepatitis B group）， 34 patients with chronic hepatitis B cirrhosis （cirrhosis group） were analyzed retrospectively， the levels of HA， PCⅢ， Ⅳ-C， LN in liver fibrosis markers and HBV-DNA of the three groups were detected and observed， the correlation between the indicators and the disease progression was analyzed， and the receiver operating characteristic （ROC） curve was drawn. Result： The four indexes of liver fibrosis HA， PCⅢ， Ⅳ-C and LN increased in the control group， chronic hepatitis B group and cirrhosis group successively， HBV-DNA load was the highest in the chronic hepatitis B group， followed by the control group. There were significant differences in the detection results among the indicators in each group （P<0.05）. There was a positive correlation between four indexes of serum fibrosis HA， PCⅢ， Ⅳ-C and LN （P<0.01）， PCⅢ was highly correlated with Ⅳ-C （rs=0.897， P<0.01）. Serum liver fibrosis four indicators HA， PCⅢ， Ⅳ-C and LN were positively correlated with disease development after HBV infection （P<0.05）， HA was significantly correlated with disease progression after HBV infection （rs=0.548， P<0.01）. The AUC of HA， PCⅢ， Ⅳ-C， LN and HBV-DNA were 0.925， 0.929， 0.916， 0.899 and 0.630， respectively， the AUC of combined detection was 0.959. Conclusion： HBV replicates at a higher level in patients with chronic hepatitis B and decreases at the stage of cirrhosis.The four indexes of liver fibrosis increased with the development of the disease after HBV infection， and their content is positively correlated with the development of the disease. There is also a positive correlation between the four indexes of HA， PCⅢ， Ⅳ-C， and LN， among which the content of PCⅢ is highly correlated with the content of Ⅳ-C， and the content of HA is significantly correlated with the course of the disease. Combined detection of four serological markers of liver fibrosis and HBV-DNA load can improve the diagnostic efficiency of liver fibrosis.

[Key words] Hepatitis B Liver fibrosis Serum markers

First-authors address： Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Shenzhen 518000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.10.007

乙型肝炎病毒（HBV）屬嗜肝DNA病毒科，是慢性乙型肝炎（CHB）的病原體[1]，HBV感染已成為全球公共衛生問題[2]，而中國是乙肝高發國家，據統計我國已有超過1億人攜帶HBV[3]。HBV的持續感染是導致肝炎后肝硬化和肝細胞癌發生最主要的因素之一[4]，慢性HBV感染者比未感染者發生肝癌的風險高出25～37倍[5]。部分HBV感染者將經歷漫長的肝損傷，修復，再損傷，進而發生肝纖維化，如不及時干預，最終可能在肝硬化的基礎上進展為肝細胞癌[6]。肝細胞癌是最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高，確診后的5年生存率不到10%，其癌癥相關死亡率已高居世界第二[7]。絕大部分肝炎病毒相關的肝細胞癌患者都經歷了病毒性肝炎導致的肝損傷至肝纖維化，再到肝硬化的長期病程。一旦發展到肝細胞癌，最有效的方式只有手術治療。由于早期診斷指標的缺乏，微小的肝癌病灶往往很難被發現，許多患者確診時往往已經發生轉移，失去手術的機會。因此定期動態評估乙肝患者感染HBV后病情的發展變化在慢性乙型肝炎的臨床診治中顯得尤為重要。美國肝病學會（AASLD）2018年版慢性乙型肝炎預防、診斷和治療指南強調了HBV-DNA連續監測和肝纖維化評估在慢性乙肝患者疾病控制中的重要性，并提出HBeAg陽性，HBV-DNA>20 000 IU/mL，且ALT<2倍正常值上限或HBeAg陰性，HBV-DNA>2 000 IU/mL，且ALT<2倍正常值上限的患者需要進行肝穿刺活檢或進行肝纖維化評估來確定是否開始抗病毒治療[8]。目前廣泛應用的肝纖維化標志物即肝纖維化四項，是一種簡便易行的肝纖維化評價指標[9]，亞太肝病學會在2016年更新的指南中指出血清肝纖維化指標在診斷和排除肝纖維化和肝硬化方面中等可信[10]。本研究擬聯合HBV-DNA載量與血清中肝纖維化標志物透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原蛋白（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）和層粘連蛋白（LN），觀察其在乙肝相關疾病進程中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2019年12月在南方醫科大學深圳醫院確診的107例慢性乙型肝炎患者為慢性乙型肝炎組;34例乙肝肝硬化患者為肝硬化組;選取同期58例HBV攜帶者作為對照組。納入標準：慢性乙型肝炎肝硬化診斷符合美國肝病學會（AASLD）2018年版慢性乙型肝炎預防、診斷和治療指南。排除標準：（1）除HBV外的肝炎病毒感染以及其他原因導致的肝炎;（2）遺傳代謝性疾病;（3）嚴重的血液疾病、臟器疾病及其他部位惡性腫瘤;（4）已實施抗病毒治療;（5）病史及病例資料不明確。本研究通過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 研究對象空腹抽取靜脈血5 mL，

3 000 r/min離心10 min，分離血清。HBV-DNA載量測定采用熒光定量PCR法，試劑采用圣湘乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法），檢測結果做對數轉換后進行統計分析。儀器為美國伯樂公司的CFX96型熒光定量PCR儀。HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN四項肝纖維化指標采用博奧賽斯化學發光免疫分析儀PETECK96-I及配套化學發光法試劑盒進行檢測。嚴格按照試劑說明書和儀器標準操作規程檢測。

1.3 觀察指標與判定標準 （1）曲線下面積（AUC）評價標準：①AUC≤0.7的指標診斷價值較小;②0.70.9的診斷指標具有較高診斷價值。（2）肝纖維化四項指標和HBV-DNA載量水平比較。（3）肝纖維化四項指標和HBV-DNA載量相關性分析。（4）HBV-DNA載量、肝纖維化四項指標與慢性乙肝疾病發展的相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 25.0軟件對所得數據進行統計分析，偏態分布數據以M（P25，P75）表示，計量資料比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗。繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線）并計算曲線下面積（AUC）來評價HBV-DNA載量與血清肝纖維化四項HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN的診斷效能，采用Spearman相關性分析了解血清肝纖維化四項指標與HBV-DNA載量之間的相關性及各項指標與HBV感染后疾病進程的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組肝纖維化四項指標和HBV-DNA載量水平比較 肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN在對照組、慢性乙型肝炎組，肝硬化組中的含量依次增加，HBV-DNA載量在慢性乙型肝炎中最高，其次對照組;各指標在各組中的檢測結果比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 肝纖維化四項指標和HBV-DNA載量相關

性 血清肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN之間呈均呈正相關關系（P<0.01），其中PCⅢ與Ⅳ-C之間為高度相關（rs=0.897，P<0.01），但HBV-DNA載量與肝纖維化四項指標之間無相關性（P>0.05）。見表2。

2.3 HBV-DNA載量、肝纖維化四項指標與慢性乙肝疾病發展的相關性 血清肝纖維化四項指標HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN與HBV感染后疾病發展呈正相關（P<0.05），其中HA與HBV感染后疾病進程明顯相關（rs=0.548，P<0.01），見表3。

綜上所述，肝纖維化四項指標具有較好的臨床應用價值，尤其是HA與疾病進展有較好的相關性，但部分項目如PCⅢ和Ⅳ-C的特異度較差，受到的影響因素較多。HBV-DNA的檢測穩定且可靠，受影響因素少，在乙型肝炎的疾病監測中發揮重要作用，但其單獨應用在乙肝感染后疾病進展中的診斷作用有限，本研究發現將其與肝纖維化四項指標聯合應用可提高檢測的特異度，提高診斷效能，有利于實現乙肝相關肝纖維化的無創診斷。

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（收稿日期：2020-12-30） （本文編輯：劉蓉艷）