流式細胞術檢測在腦梗死后精神病性障礙患者中的診斷價值

田秀麗，梁燕華，張娟芝，馬秀蓮

腦梗死是人類神經系統的常見病和多發病，發病率一直居高不下。部分腦梗死患者腦部血供異常，可能出現精神異常癥狀，發生腦梗死后精神病性障礙。典型臨床表現為感知覺異常/幻覺、癥狀妄想和情感障礙等。原有的癲癇、躁狂癥、抑郁癥等精神疾病以及非典型精神病性障礙，給臨床診斷帶來了干擾[1]。若不能早期識別和進行發病風險干預防控、或者診治不及時，可能引發患者自殺事件[2]。在腦梗死精神病性障礙實驗室檢測方面，相對于血清，由于血腦屏障具有穩定腦內微環境的功能，能嚴格限制有害分子進入腦內，腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)的神經元相關生物標志物能更好地反映神經功能損傷的程度[3]。不過傳統的CSF特異性生物標志物——S100B蛋白、神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)在腦損傷檢測應用的敏感度與特異度還不是特別高，應用流式細胞術檢測CSF淋巴細胞亞群具有便捷、準確、客觀等優點[4]，是當前比較理想的細胞學檢測方法。其中CD4+T細胞能調控或輔助其他類型淋巴細胞發揮免疫作用，CD4+占CSF細胞比例可直接反映機體免疫系統的功能狀態[5]。本研究探討了流式細胞術檢測腦脊液CD4+T細胞比例在腦梗死后精神病性障礙中的診斷預測價值，以促進流式細胞術檢測在神經系統相關疾病中的診斷應用。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選取2018年6月～2021年1月醫院收治確診的腦梗死患者172例作為研究對象，包括伴有精神病性障礙患者60例(研究組)和非精神病性障礙患者112例(對照組)。病例納入標準：首次發??；年齡20～80歲；臨床資料齊全；既往無精神病史；入院時間距發病時間≤2 w；行頭顱CT和/或MRI掃描檢查證實為腦梗死，診斷標準：符合中華醫學會制定的腦血管病診斷標準[6]；精神病性障礙符合《疾病及有關健康問題的國際統計分類》中腦卒中所致精神病性障礙的診斷標準[7]；患者和(或)家屬均知情同意；經醫院醫學倫理委員會批準。病例排除標準：有個人精神障礙或家族精神障礙史者；患有惡性腫瘤者；合并心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；合并原發精神疾病患者：如阿爾茨海默病、精神發育遲滯等患者。研究組中，抑郁17例、焦慮16例、幻覺15例、譫妄8例、躁狂發作7例。兩組患者的性別、年齡、美國國立衛生研究院卒中量表(NHISS評分)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、體重指數(BMI)、梗死部位等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05，表1)。

1.2 檢測腦脊液S100B、NSE和CD4+T細胞比例穿刺抽取所有患者的CSF 2～3 ml，分為兩管。第一管加入EDTA二鈉及抑肽酶，3000轉/min離心10 min，取上清，通過酶聯免疫法檢測CSF S100B與NSE含量。第二管離心后棄上清，加入紅細胞裂解液，洗滌后加入一抗，室溫避光反應15 min。磷酸緩沖液定容，流式細胞儀(美國BioLegend公司，100725)分析CD4+T細胞占T細胞的百分率。此外，檢測所有患者的白細胞(WBC)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、總膽紅素(TBIL)、谷丙轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)等相關指標。

1.3 統計學方法 應用SPSS 23.00軟件進行數據分析。計數資料用[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多因素Logi sti c回歸分析診斷影響因素，計算95%可信區間(95% confidence interval，95%CI)、比值比(odds ratio，OR)，P<0.05為差異有統計學意義。采用ROC曲線進行診斷價值分析。

2 結果

2.1 常規血液學指標比較 兩組WBC、PLT、PT、TBIL、ALT、AST比較，差異無統計學意義(P>0.05，表2)。

表1 患者一般資料比較

表2 常規血液生化指標比較（±s）

表2 常規血液生化指標比較（±s）

組別 n WBC（g/L） PLT（×10/L） PT（s） TBIL（μmol/L） ALT（U/L） AST（U/L） 研究組 60 41.20±8.22 5.92±0.33 10.29±1.44 1.45±0.14 49.28±10.44 52.47±4.58 對照組 112 41.94±7.91 5.89±0.22 10.33±1.24 1.48±0.22 49.16±8.29 53.02±5.33 t 0.722 0.078 0.132 0.092 0.188 0.521 P 0.367 0.943 0.892 0.924 0.867 0.555

2.2 腦脊液S100B與NSE含量比較 與對照組比較，研究組CSF S100B與NSE含量顯著升高(P<0.05)，CD4+T細胞比例顯著降低(P<0.05，表3)。

表3 腦脊液S100B、NSE與CD4+T細胞比例比較(±s)

表3 腦脊液S100B、NSE與CD4+T細胞比例比較(±s)

組別 n S100B(ng/L) NSE(ng/dl) CD4T細胞比例 研究組 60 965.24±78.24 78.92±10.33 44.24±2.87 對照組 112 465.02±81.92 70.10±8.14 51.48±4.91 t 29.183 7.813 8.113 P ＜0.001 0.007 0.005

2.3 相關性分析 多因素Logistic回歸分析顯示：腦脊液S100B、NSE含量以及CD4+T細胞比例均是腦梗死后精神病性障礙發生的有效預測因素(P<0.05，表4)。

表4 影響腦梗死后精神病性障礙發生的多因素分析(n=172)

2.4 診斷價值評估ROC曲線結果顯示：腦脊液S100B、NSE、CD4+T細胞比例診斷腦梗死后精神病性障礙的曲線下面積依次是0.733、0.714、0.814，靈敏度為68.43%、70.39%、74.27%，特異度為83.72%、77.38%、80.31%(表5)。

表5 腦脊液S100B、NSE、CD4+T細胞比例的診斷價值評估(n=172）

3 討論

多數腦梗死患者會出現神經系統功能障礙，存在多種形式的精神病性障礙[8]。精神病性障礙發病機制至今不明，具有并發癥多、病情反復易加重和臨床療效差等特點，嚴重影響腦梗死患者的身心健康和生活質量。盡早識別診斷并積極干預治療，是提高腦梗死后精神病性障礙患者生活質量的關鍵。本研究顯示兩組患者的性別、年齡、體重指數、梗死部位等一般臨床指標，以及NHISS評分、收縮壓、舒張壓、白細胞、血小板、凝血酶原時間、白蛋白、總膽紅素、谷丙轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶等常規血液學指標比較差異無統計學意義(P>0.05)，表明單純從血液學常規指標與一般臨床指標不易識別腦梗死后患者的精神異常癥狀。

研究發現，病變位于額葉時，患者更容易出現精神癥狀，這可能與額葉-邊緣系統參與調控情感活動等生理功能相關，這些區域病變引起的異常功能連接必然導致機體感覺、情感、運動功能障礙[9]。腦梗死后精神病性障礙的發生理論涉及到多種學說，包括自身免疫學說、病毒感染學說、神經發育障礙學說等，這為臨床潛在特異性生物標志物的檢測篩選提供了思路。CSF作為大腦組織的內循環，可維持顱內壓、運走腦組織和脊髓的代謝產物，也可供應腦細胞一定的營養。當中樞神經系統受損時，由于血腦屏障作用，神經元損傷后釋放入CSF中的S100B、NSE等生物標志物，具有特異性強、靈敏性和檢測效率高的特點[10-11]。本研究顯示研究組的CSF S100B與NSE含量都高于對照組，CD4+T細胞比例低于對照組(P<0.05)。從機制上分析，S100B主要分布于神經膠質細胞，NSE主要分布于神經元細胞質以及神經內分泌細胞。腦梗死時神經元結構破壞，兩者釋放進入CSF中，隨著病情進展不斷升高，在發病后7 d內達到峰值，與腦梗死體積、疾病嚴重程度和病情預后存在相關性[12]。CD4+T細胞是Th細胞的主要表面標志，能協助機體發揮體液免疫和細胞免疫應答功能，增強吞噬細胞介導的抗感染作用。當體內CD4+T細胞降低時，機體的免疫功能減弱，對腫瘤細胞的殺傷力也嚴重減弱，從而導致病情不斷加劇和惡化[13]。

腦梗死發生后，由于小膠質細胞增殖和激活，可導致促炎因子水平異常，而精神病性障礙會進一步加重腦梗死病情發展，從而形成惡性循環[13]。病理情況下血腦屏障通透性增加，屏障功能減弱，正常生理功能下無法通過的有害物質也能經通透性高的屏障進入CSF內。因此，在腦梗死早期診斷與預后判斷的實驗室檢測中，CSF的細胞學檢驗與分析具有重要價值[14]。本研究多因素Logistic回歸分析顯示CSF S100B、NSE和CD4+T細胞比例是導致腦梗死后精神病性障礙發生的重要影響因素(P<0.05)；ROC曲線分析進行腦梗死后精神病性障礙診斷指標價值評估時，與評估腦損傷嚴重程度和預后的常規參考指標——CSF S100B、NSE比較，應用流式細胞術檢測CSF CD4+T細胞比例的曲線下面積、靈敏度最高，特異度居中，表現了很好的診斷應用價值。機制上分析，CD4+T細胞比例下降，可導致機體淋巴細胞亞群比例結構網發生變化，進一步導致T細胞功能被打亂，加劇細胞免疫功能異常，從而使得S100B、NSE釋放增加[15]。S100B、NSE可介導機體的免疫應答，參與自身免疫疾病的發生和轉歸，加重神經元病理損傷[16-17]。本研究也存在一定的不足，納入樣本數比較少，檢測指標不全面，沒有進行縱向多時間點的檢測，可能存在一定的研究偏倚，將在后續研究中進行探討。

總之，腦脊液S100B、NSE、CD4+T細胞比例在腦梗死后精神病性障礙中呈異常狀況，流式細胞術檢測腦脊液特異性生物標志物在腦梗死后精神病性障礙患者中的診斷具有重要價值。