子宮內膜癌的微衛星不穩定性與PD-L1表達的相關性及臨床意義

梁婷　　黃慧艷　　雷先華　　李榮

[摘要] 目的 探討子宮內膜癌的微衛星不穩定性與PD-L1表達的相關性及臨床意義。 方法 選取2016年1月至2018年12月在我院病理庫中搜集所有行手術治療切除子宮的內膜癌標本共120例，采用免疫組化的方法標記錯配修復蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，檢測其表達水平，以（+）和（-）記錄各抗體表達情況。采用免疫組化的方法標記PD-L1蛋白，以（+）和（-）記錄抗體的表達情況。統計分析120例子宮內膜癌患者的微衛星狀態與臨床病理特征、PD-L1表達的相關性。 結果 120例子宮內膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質量指數、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移之間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。MSI患者的子宮內膜癌組織、免疫及腫瘤細胞PD-L1表達陽性率分別為50.0%、42.5%，明顯高于MSS患者的26.3%、17.5%，差異有統計學意義（P<0.05）。Spearman相關分析顯示，子宮內膜癌的微衛星不穩定性與PD-L1表達顯著相關（P<0.05）。敏感性、特異性和準確性分別為50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120）。 結論 子宮內膜癌的微衛星不穩定性會上調子宮內膜癌組織、免疫及腫瘤細胞PD-L1表達，可以作為PD-1/PD-L1途徑免疫治療子宮內膜癌的生物標志物。

[關鍵詞] 子宮內膜癌;微衛星不穩定性;PD-L1表達;相關性;臨床意義

[中圖分類號] R737.33? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）11-0122-03

Correlation between microsatellite instability and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance

LIANG Ting1? ?HUANG Huiyan2? ?LEI Xianhua1 LI Rong1

1.Department of Pathology，Ganzhou Cancer Hospital in Jiangxi Province， Ganzhou 341000， China; 2.Department of Pathology，the People′s Hospital of Yudu County in Jiangxi Province，Yudu 342300，China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between microsatellite instability （MSI） and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance. Methods A total of 120 cases of endometrial carcinoma specimens from the pathological database of our hospital from January 2016 to December 2018 were collected. The mismatch repair proteins MLH1， MSH2， PMS2 and MSH6 were labeled by the immunohistochemistry method，and their expression levels were detected. The expression of each antibody was recorded by（+）and（-）. The expression of PD-L1 protein was labeled by the immunohistochemistry method， and the expression of antibody was recorded by （+） and （-）. The correlation between microsatellite status （MSS） and clinicopathological features and PD-L1 expression in 120 patients with endometrial carcinoma was analyzed statistically. Results Among 120 patients with endometrial carcinoma，there were 40 cases of MSI and 80 cases of MSS， accounting for 33.3% and 66.7% of the total respectively. There were no statistically significant differences between all patients with MSI and MSS in age， body mass index，pathological stage，degree of tissue differentiation， depth of muscle infiltration and lymph node metastasis（P>0.05）. The positive rates of PD-L1 expression in endometrial carcinoma tissue，immunity and tumor cells in patients with MSI were 50.0% and 42.5%， which were significantly higher than those of 26.3%， 17.5% in patients with MSS， with significant difference（P<0.05）. It was shown by Spearman correlation analysis that MSI in endometrial carcinoma was significantly correlated with PD-L1 expression（P<0.05）. The sensitivity，specificity and accuracy were 50.0%（20/40），73.8% （59/80） and 65.8%（79/120）， respectively. Conclusion MSI in endometrial carcinoma can up-regulate the expression of PD-L1 in endometrial carcinoma tissue， immunity and tumor cells， which can be used as a biomarker of PD-1/PD-L1 immunotherapy for endometrial carcinoma.

[Key words] Endometrial carcinoma; Microsatellite instability; PD-L1 expression; Correlation; Clinical significance

子宮內膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，晚期患者療效不佳。有文獻報道，存在MSI的散發性內膜癌患者預后不良[1]。部分國外學者認為[2]，MSI可作為免疫治療反應的生物標志物，使晚期子宮內膜癌患者接受抗PD-1治療，并從中獲益。本研究統計分析了我院病理庫中2016年1月至2018年12月所有行手術治療切除子宮的內膜癌標本共120例的臨床資料，旨在通過檢測子宮內膜癌的MSI表型和PD-L1表達情況，并分析其相關性及表達的意義，最終探討存在MSI的子宮內膜癌患者是否更適于接受PD-1/PD-L1抑制劑的治療，將新的依據提供給晚期患者的個體化精準治療，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院病理庫中2016年1月至2018年12月所有行手術治療切除子宮的內膜癌標本共120例，選取腫瘤組織及癌旁（距離至少1 cm）組織各一塊，統一搜集出組織蠟塊，并記錄相關患者基本信息和臨床病理信息。

1.2 納入及排除標準

納入標準：①均經手術病理檢查確診為子宮內膜癌者;②均符合子宮內膜癌的診斷標準[3]者;③術中均清除淋巴結者。排除標準：①有子宮內膜癌以外的腫瘤病史者;②有其他部位腫瘤者;③術前接受過放化療及激素等治療者。

1.3 方法

將收集的組織蠟塊切片、烤片后，隨機分批次上全自動免疫組化儀，采用半自動的方法，人工滴加一抗，實驗完成后洗片、封片、鏡檢。所有病理切片由兩名不參與本研究的病理醫生判讀，整張切片>10%目標細胞陽性即判定為陽。采用免疫組化的方法標記錯配修復蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，檢測其表達水平，以（+）和（-）記錄各抗體表達情況。MSI-H（高頻度微衛星不穩定性）：四個錯配修復蛋白2個或以上表達缺失;MSI-L（低頻度微衛星不穩定性）：四個錯配修復蛋白中只有一個發生表達缺失;MSS（微衛星穩定性）：四個錯配修復蛋白均未見表達缺失[4]。按照以上標準將免疫組化結果進行分類、整理。采用免疫組化的方法標記PD-L1蛋白，以（+）和（-）記錄抗體的表達情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析。計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗;采用Spearman秩相關分析進行相關性分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 120例子宮內膜癌患者的微衛星狀態與臨床病理特征的相關性分析

120例子宮內膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質量指數、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移之間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

2.2 120例子宮內膜癌患者的微衛星狀態與PD-L1表達的相關性分析

120例子宮內膜癌患者中，MSI患者的子宮內膜癌組織、免疫及腫瘤細胞PD-L1表達陽性率分別為50.0%、42.5%，明顯高于MSS患者的26.3%、17.5%，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

子宮內膜癌是常見的女性生殖道惡性腫瘤，無論是我國還是歐美國家，子宮內膜癌的發病率均逐年增高[5]。對于病灶局限于子宮的早期患者，手術即可達到較好的治療效果，但當患者已存在轉移病灶或疾病復發時，傳統的治療方法療效有限，患者預后通常較差[6]。為此類患者探索新的治療方法已成為當務之急。

近年來，臨床不斷深入研究了多種惡性腫瘤，在腫瘤的發生中，多基因突變發揮著重要作用，其中包括抑癌基因突變、錯配修復系統缺失[7]。錯配修復基因（MMR genes）在細胞內負責修復堿基錯配，復制錯誤陽性或微衛星不穩定性（MSI）會在錯配修復基因突變的情況下發生，增加整個基因組不穩定性，從而引發抑癌基因、癌基因的一系列改變，促進各種腫瘤的發生[8]。錯配修復基因是一組看家基因，高度保守，一方面在基因組穩定性發揮著重要作用，另一方面還在DNA復制的忠實性中發揮著重要作用[9]?，F階段，PMS2、MSH2、MSH6、MLH1是較為常見的錯配修復基因。由于子宮內膜細胞具有頻繁的DNA復制，因此堿基錯配率及MMR基因突變率高[10]。MMR系統修復功能會在MMR基因突變的情況下發生障礙，進而造成MMR蛋白失表達，無法對DNA復制過程中細胞缺失和錯誤滲入進行修復，促進染色體交換不均、復制錯誤、滑鏈錯配等現象的發生，從而改變微衛星DNA長度，促進MSI的發生，影響正常細胞的增殖調控，促進廣泛腫瘤易感的出現，并以較快的速度將一些癌基因、抑癌基因中的突變積累起來，進而促進腫瘤形成[11]。近年來，臨床不斷深入研究了腫瘤微環境、腫瘤細胞免疫調節信號通路、靶向免疫檢查點的治療等免疫治療給腫瘤患者帶來了新的希望[12]。

T細胞活化是腫瘤免疫的核心。PD-1（PDCD1，即程序性死亡受體1）是一種免疫共抑制受體，在T細胞表面發揮著重要作用，主要在活化的T細胞表面表達。PD-1結合其配體程序性死亡受體配體1（PD-L1，PDCD1LG1）后會對T細胞的增殖、分化進行抑制，同時使T細胞處于無功能狀態，從而對機體抗腫瘤免疫反應進行抑制。PD-1/PD-L1抑制劑治療是指將PD-1/PD-L1負性調節免疫的作用消除，解除抑制免疫檢查點的作用，從而恢復效應T細胞對腫瘤細胞進行特異性識別與殺傷的功能[13]。有研究報道[14]，PD-1、PD-L1抗體能夠持久性消退晚期腫瘤，使患者能夠對不良反應耐受，保持穩定的病情。在復發及難治性非小細胞肺癌、黑色素瘤等疾病的治療中，PD-1/PD-L1抑制劑的應用前景極為廣闊。目前有關免疫檢查點抑制劑在子宮內膜癌中的應用相關臨床研究并不多。部分學者認為[15]，MSI可作為免疫治療反應的生物標志物，使晚期子宮內膜癌患者接受抗PD-1治療，并從中獲益。

前期實驗已發現，在散發性子宮內膜癌中有相當一部分患者存在MSI表型，本研究旨在通過檢測子宮內膜癌的MSI表型和PD-L1表達情況，并分析其相關性及表達的意義，最終探討存在MSI的子宮內膜癌患者是否更適于接受PD-1/PD-L1抑制劑的治療，為晚期患者的個體化精準治療提供新的依據。本研究結果顯示，120例子宮內膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質量指數、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移之間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。MSI患者的子宮內膜癌組織、免疫及腫瘤細胞PD-L1表達陽性率均顯著高于MSS患者，差異有統計學意義（P<0.05）。Spearman相關分析顯示，子宮內膜癌的微衛星不穩定性與PD-L1表達顯著相關。敏感性、特異性和準確性分別為50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120），提示微衛星不穩定表型與PD-L1表達存在相關性，存在微衛星不穩定表型的患者均伴有PD-L1高表達。

綜上所述，子宮內膜癌的微衛星不穩定性會上調子宮內膜癌組織、免疫及腫瘤細胞PD-L1表達，可以作為PD-1/PD-L1途徑免疫治療子宮內膜癌的標志物。

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（收稿日期：2020-10-26）