德陽地區344例男性不育患者細胞遺傳學分析

陳惠娟 徐志紅 劉霖 張浩

摘要：目的 觀察與探討男性不育與染色體核型異常發生率的關系，為臨床遺傳咨詢和生育指導提供依據。方法 對2009年1月至2018年12月來我院不孕癥門診及優生遺傳門診就診的344例不育男性患者進行外周血淋巴細胞培養和常規染色體制備及核型分析。結果 在344例不育男性患者中檢出異常核型78例（包括多態性改變），檢出率為22.67%。數目異常3例，為克氏綜合征。結構異常共24例：易位9例，倒位13例，插入2例。Y變異36例，小Y 32例，大Y 2例，Y染色體長臂出現隨體2例。異染色質區增加核型12例。隨體增加核型3例。結論 德陽地區男性不育有較高的染色體異常發生率和染色體多態性改變，對其進行染色體核型分析為找到遺傳學病因具有重要意義和必要性。

關鍵詞：男性不育;核型分析;染色體

【中圖分類號】R329 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2020）01-172-02

男性不育是一種常見的多因素復雜性的疾病。約有15%的育齡夫婦罹患不孕不育，其中男性因素接近一半。作為一個多因素的復雜疾病，存在遺傳因素的男性不育又約占15%，主要包括染色體畸變及基因突變[1]。染色體畸變涉及染色體數目畸變及結構畸變，結構畸變包括缺失、重復、易位、倒位等[2]。染色體數目及結構異常均會引起男性發育及生殖異常。本文篩選344例男性不育患者進行常規染色體制備和核型分析，對染色體核型異常與疾病關系進行探討分析，希望為男性不育的臨床診療提供依據。

1對象與方法

1.1對象 收集2009年1月-2018年12月到我院不孕癥門診及優生遺傳咨詢門診的男性不育患者。臨床表現為不育，弱精，少精或無精癥。女方經臨床及實驗室檢查無異常，主訴婚后未采取避孕措施1年以上不育。

1.2方法 知情同意后，使用肝素抗凝管無菌采集靜脈血2-4ml。采用移液器移取300ul外周血接種于淋巴細胞培養基中。培養基中添加植物凝集素A，體積5ml。37℃，培養68-72h。常規收獲淋巴細胞、制片及G顯帶。于顯微鏡下觀察計數20個中期分裂相，對分散較好，帶紋清晰的5個中期分裂相進行染色體的核型分析，發現異常核型時增加計數中期分裂相和核型分析。核型的描述和命名則依據人類細胞遺傳學國際命名體制（ISCN）。

2結果

在344例不育患者中，共檢測異常核型78例，檢出率22.45%。包括染色體數目異常3例，表現為不育，小睪丸，四肢纖細，皮膚白皙;結構異常包括易位、倒位、插入共24例，主要表現為不育。Y染色體變異36例，表現為不同程度的少精、弱精、無精以及不育;異染色質區增加12例，表現為不育;隨體增加3例，表現為不育。其中性染色體異常39例，包括32例小Y;3例Y倒位;2例大Y;2例Y長臂出現隨體，占異常核型的50%。具體詳見表1

3討論

目前在育齡夫妻中約有15%因不孕不育而不能生育孩子。由男性原因造成的約占50%，男性不育有多種因素，如生殖器異常、性功能障礙、精液異常等。其中遺傳因素為重要原因之一，染色體的異常是主要的影響因素[3-4]。國內外相關研究報道男性不育患者染色體異常的檢出率為2.2%-48.2%[5]，各研究之間存在差異，這可能與選擇研究對象的標準有關。本文344例不育患者中包括染色體異常和多態性共檢出78例異常，檢出率為22.67%，明顯高于正常人群?？梢娔行圆挥c染色體異常關系密切。

3.1 染色體數目異常

此次研究中，共檢出染色體數目異常3例，核型均為47，XXY。主要表現為小睪丸，生精障礙，四肢纖細，身材高，皮膚白皙，其中一例伴有輕度精神疾病。該核型發生的機制主要是在配子形成過程中性染色體不分離或者是受精卵卵裂過程中X染色體不分離而引起的。Lud等[6]研究闡明，X染色體數量改變和影響睪丸的分化、形成以及精細胞在睪丸內的發育，使精細胞數量丟失，甚至缺乏，從而出現了無精子病癥。

3.2 染色體結構異常

除性染色體異常結構異?？梢l不育，常染色體也結構異常也可引發男性不育。有學者在研究相互易位的男性不育患者中發現了14個候選基因與不育相關，分別位于不同的常染色體上[7]。在我們的結果中，檢出易位9例，包括羅氏易位4例，其他染色體易位5例，均為常染色體的相互易位，表現為不育。平衡易位因遺傳物質未丟失，只存在基因在染色體上位置發生改變，故攜帶者表型一般正常，但該核型可以遺傳。在配子形成過程中有產生18種配子的可能，其中只有一種是正常配子，一種是平衡易位，其余的都因遺傳物質不平衡，易在形成受精卵后引起胚胎發育障礙，于孕早期出現胚胎丟失。

倒位共檢出13例，包括9號染色體倒位8例，1號染色體倒位1例，11號染色體倒位1例，Y染色體倒位3例。9號染色體倒位在人群中普遍存在，因此被認為是正常變異，但有研究表明9號染色體的倒位與不良妊娠相關，所以也被認為應屬于染色體結構異常的范疇。在理論上，染色體倒位的攜帶者在配子形成過程中因出現特殊的倒位環而會形成4種配子的可能，正常配子、攜帶倒位的配子，其余兩種配子則為染色體部分重復和部分缺失的不平衡配子[8]。而不平衡配子是引起流產、不孕不育的重要原因。

本組病例中還涉及到1號染色體、9號染色體、16號染色體異染色質區增加;14號染色體、21號染色體以及22號染色體隨體增加等染色體多態性改變。都有不育的臨床表型，因此本文認為染色體的多態性改變與不育是有相關性的。

3.3 Y染色體多態

本文中檢出Y染色體多態36例，其中小Y 32例，檢出率為9.3%;大Y 2例，檢出率0.58%。說明德陽地區以小Y染色體多態為主。有研究認為小Y是存在染色體的微小缺失[9]。 位于Yq11.22-Yq11.23區域存在無精子因子（AZF），AZF包括AZFa、AZFb、AZFc三個亞區域。在三個區域中包含DBY、RBMY、DAZ、CDY等生精相關的重要基因[1]。在男性不育、生精障礙中，AZF微缺失是一個常見的遺傳病因[2]。而小Y可能同時存在Yq11常染色質與Yq12異染色質的共同缺失，從而導致AZF缺失造成精子生成障礙而出現不育。因此當男性出現小Y核型時僅從染色體形態判斷男性不育的原因時不全面和完善的，補充檢測AZF基因是否存在缺失是必要的。大Y染色體因異染色區的DNA序列存在過度重復，導致Y染色體的本身不穩定和影響相鄰常染色體區與精子發育相關的基因發揮功能，從而引起不育[10]。

綜上所術，德陽地區男性不育與染色體異常關系密切，染色體數目及結構異常都會引起男性生精功能障礙。染色體核型分析結合AZF基因檢測對尋找男性不育的遺傳學病因將會更加完善和全面，也更有意義。

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作者簡介：陳惠娟（1988年1月20日），女， 碩士研究生 ，檢驗師， 主要從事產前診斷的細胞遺傳及分子遺傳工作。

（四川省德陽市德陽人民醫院生殖遺傳科 四川 德陽 618000）