北流市(縣)奶牛結核病流行病學調查研究

李云富，葉梅青，黃海生，劉國紅，蔡明元

(北流市動物疫病預防控制中心，廣西 北流 537400)

牛結核病(Bovine tuberculosis)是由牛型結核分枝桿菌引起的一種人獸共患的慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病。OIE將其列為B類疫病。牛對牛型菌易感，特別是奶牛的感染率較高，不僅影響奶業的發展，還由病畜的尸體及乳汁感染人[2]。北流市位于廣西東南部，北緯22°08′-22°55′N，東經110°07′-110°47′E，與廣東省信宜市、高州市、化州市接壤；屬南亞熱帶季風氣候區，年無霜期351 d、平均氣溫21.7 ℃；作物飼草豐富茂盛，四季長青，飼養奶畜青綠飼料資源豐富；經濟綜合實力居廣西十強縣(市)前列，城鄉居民對奶品需求不斷增長，鮮乳18元～20元/kg暢銷無剩，飼養奶牛供應鮮奶具有較好消費市場和較高回報，成為居民創業就業好項目。但由于飼養管理欠規范，潛在疫病防控、乳品質量及公共衛生安全問題。2022年4月，根據《動物防疫法》、《乳品質量安全管理條例》，按照《2022年廣西壯族自治區動物疫病監測與流行病學調查實施方案》(桂農廳發[2022]33號)《牛結核病防治技術規范》要求，北流市動物疫控中心組織相關技術人員，應用提純牛型結核菌素皮內反應診斷，開展奶牛結核病流行病學調查，旨在為科學防控結核病提供依據。

1 監測方法和判定

1.1 人員及分工

本中心抽派技術人員5人，為減少人為操作誤差，每個監測環節固定同一人操作，即采血1人、剪剃毛和測皮厚1人、登記1人、酒精消毒1人、注射結核菌素1人，牛只保定由業主完成[1]。

1.2 器材與試劑

1.2.1 人員防護材料 一次性防護服、口罩、鞋套、手套、帽等。

1.2.2 器材 游標卡尺、1 mL注射器、理發器、胡須刨、酒精棉拭子。

1.2.3 試劑 酒精、碘伏、提純牛型結核菌素(中牧：20頭份/瓶)。

1.3 操作方法

1.3.1 牛只保定 保持待檢牛正常站立姿態，用繩子將牛頭統一向左側固定。

1.3.2 注射部位及術前處理 本次檢測部位，統一在頸右側中部上1/3處，先剪毛再剃毛、直徑10 cm，用卡尺測量術部中央皮皺厚度，做好記錄。作為術后炎性反應皮皺厚度比較基數[1]。

1.3.3 注射劑量 20頭份/瓶的中牧提純牛型結核菌素，先用生理鹽水稀釋2 mL,即10頭份/mL；不論牛大小，每頭牛皮內注射0.1 mL。

1.3.4 注射方法 先用75%酒精棉以術部中心圓圈向外涂抹消毒，待干爽后皮內注入牛型提純結核菌素0.1 mL，注射后局部應出現小泡。

皮內注射后，在48，72，96 h點，觀察術部有無熱痛腫脹等炎性反應，并卡尺測量術部皮皺厚度，做好詳細記錄。并與術前皮皺厚度比較差值，作為判定依據。

1.4 判 定

1.4.1 陽性反應 局部有明顯的炎性反應，在3個測量小時點的測量值中，只要有1個點測量值皮厚差≥4 mm，判為陽性。

1.4.2 疑似反應 局部炎性反應不明顯，只要有1個檢測時點測量值皮厚差在2.1～3.9 mm間，判為可疑。

1.4.3 陰性反應 無炎性反應，皮厚差≤2 mm以下。

1.4.4 凡判定為疑性反應的牛只，于第1次檢測間隔42 d進行復檢，如仍為疑似，判為陽性[2-3]。

2 調查結果

2.1 監測基本情況

4月19日至6月18日，本中心派出技術人員，采用提純牛型結核菌素(PPD)皮內變態反應診斷，進行牛結核病監測，共檢測了15個奶牛養殖戶共奶牛526頭，其中：奶水牛養殖戶4戶，共存欄奶水牛360頭，檢測結果均為陰性(不列表)；黑白花奶牛養殖場戶11戶，共存欄奶牛的166頭，檢測結果陽性14頭、陰性152頭。陽性奶牛分布在6個場戶，疫點概況詳見表1。

表1 奶牛結核病監測情況

木棉奶牛場，位于北流市西埌鎮木棉村，東經110°24′94″E，北緯22°70′72″N，業主為張某登。建場時間為2000年，從南寧市賓陽縣奶農引進產奶奶牛2頭(無出欄檢疫、流行病監測和調運落地報告)，自此人工配種，自繁自養，公犢育成商品肉牛，母犢培養后備奶牛，伴隨對老弱、產奶量偏低、配種難的奶牛作商品肉牛淘汰的逐漸發展歷程。經20多年經營，現共存欄黑白花奶牛9頭，其中產奶奶牛4頭、后備奶牛3頭、犢牛2頭。4月24日檢測奶牛7頭(產奶奶牛4頭、后備奶牛3頭)，結果陽性3頭(均為產奶奶牛)、可疑2頭(均為后備奶牛)、陰性2頭；5月5日檢測2頭犢牛為陰性。6月6日對可疑牛2頭進行復檢均為陰性。

鄒某孟養殖戶，位于北流市北流鎮新城村二隊，東經110°37'62"E，北緯22°74'20"N。建欄時間2016年，并當年從北流市奶場(因城市擴建停營)引進奶牛6頭，無辦理檢疫、流行病監測和落地報告手續，從此自繁自養，并收集犢牛養育種牛和商品肉?！，F共存欄黑白花奶牛22頭，其中產奶奶牛5頭、后備奶牛8頭、公牛1頭、犢牛8頭。4月25日監測產奶奶牛5頭，結果陽性3頭、可疑2頭；5月5日檢測17頭均為陰性；6月7日對可疑牛2頭進行復檢均為陰性。

正順養殖有限公司，位于北流市山圍鎮鐵爐村平山坡，東經110°24′E，北緯22°48′N，業主為吳某炎。建場時間為2016年，由原縣城郊區養殖點因城市擴建整體搬遷到此，自繁自養，也收集犢牛養育?，F共存欄黑白花奶牛35頭，其中產奶奶牛6頭、后備母牛5頭、犢牛24頭。5月7日檢測牛35頭，結果陽性3頭(其中產奶奶牛2頭，后備奶牛1頭)、可疑1頭(為產奶奶牛)、陰性31頭。6月18日對可疑牛1頭進行復檢為陰性。

柯某軍養殖戶，位于北流市山圍鎮鐵爐村，東經110°24′E，北緯22°48′N。建場時間為2006年，當年由中介從南寧賓陽縣奶農引進懷胎奶牛4頭(無任何手續)，從此自繁自養?，F共存欄黑白花奶牛22頭，其中產奶奶牛3頭、后備牛8頭、犢牛11頭。5月8日檢測22頭，結果陽性2頭(產奶奶牛)、陰性20頭。

徐某靜養殖戶，位于北流鎮環城村二十組，東經110°21′E，北緯22°41′N。建欄時間為1996年，當年從同村奶農彭某琨戶(2020年停營)引進奶牛3頭(無調運手續)，此后自繁自養?，F共存欄黑白花奶牛9頭，其中產奶奶牛4頭、后備奶牛3頭、犢牛2頭。5月17日檢測牛9頭，結果陽性1頭(產奶奶牛)、陰性8頭。

傅某海養殖戶，位于北流市民樂鎮斗口村傅屋，東經110°19′E，北緯22°47′N。建場時間為2015年，當年由欽州市合浦縣奶農運進奶牛2頭(無檢疫和落地報告等調運手續)，從事收集其他奶戶犢牛喂牛奶養育為主?，F共存欄黑白花牛18頭，其中產奶奶牛2頭、后備母牛1頭、犢牛15頭。5月23日檢測牛18頭，結果陽性2頭(產奶奶牛)、陰性16頭。

本次檢出陽性的14頭奶牛，都是原來在場內的奶牛。

2.2 追溯追蹤調查

通過排查陽性場點現場、問詢和查閱相關記錄等方式，對6個陽性場點進行了調查。

2.2.1 陽性場點基本情況 所有陽性場點均未取得動物防疫合格證，屬于散養戶，基本都位于距村居500 m以內的位置。如木棉奶牛場位于村道傍，北流市正順養殖有限公司位于山坡果園中，傅某海養殖戶位于離村道邊50 m的農田上，柯某軍養殖戶位于村民集居群間，徐某靜養殖戶位于離主干路50 m村民居邊竹林中，鄒某孟養殖戶位于離村邊200 m田野中。

養殖場設施簡易：欄舍都是石棉瓦棚舍，場點周圍有簡易的物理隔斷，養殖場出入口沒有設置消毒池，沒有隔離欄，沒有露天運動場，設置有化糞池。部分養殖戶周邊菜農可隨意出入到化糞池挑糞水淋菜。

飼養方式均是以圈養的形式飼養，飼料以牧草、甘蔗尾、玉米稈、玉米衣、菠蘿渣、稻秸及部分成品料為主。

2.2.2 以往監測情況 6個陽性場戶，在引進奶牛都無檢疫和流行病學檢測，無法證明來源健康。由于年份較遠，初始引進奶牛已經作肉牛淘汰，都沒有向檢疫機構報檢記錄。2021年3月份北流市動物疫病預防控制中心曾對這6個陽性場點進行過結核病監測，當時檢測結果均為陰性。

2.2.3 奶牛調出調入情況 6個陽性場點，都是在建好欄舍時調入奶牛，都沒有經過動物防疫機構檢疫和流行病檢測。調入奶牛后都是人工授精自繁自養，所產犢牛自行培育，母犢培養后備奶牛，再也沒有調入奶牛。并更新換代把老弱初始奶牛作為肉牛淘汰。淘汰奶牛時也未向當地檢疫機構報檢，沒有調出檢疫報告。產奶奶牛往牛奶暢銷的養殖戶間互動時有發生，但沒報移動檢疫。從2021年3月份至今沒有奶牛從市內外調出調入。

2.2.4 糞便處理情況 6個陽性場(戶)點都建設有化糞池，用于收納牛尿及清洗場地污水凈化；牛糞一直都是收集經發酵后作牧草肥料自用。

2.2.5 牛奶銷售及處理情況 產出的牛奶全部經巴氏滅菌或高溫消毒的熟奶進行銷售，消費群體主要以鄰近居民為主，目前沒有收到有因喝這6個陽性場點的牛奶感染結核桿菌的人間病例消息。

結核病檢測結果為陽性后，陽性場點也沒有再出售過牛奶，所產出牛奶都被以高溫消毒的方式進行無害化處理。

根據以上情況，北流市動物疫病預防控制中心綜合分析認為：一是6個陽性場點的結核病來源無法查明；二是陽性場點對外散播病原的可能性較低。

3 處置情況

按照《牛結核病防治技術規范》的技術要求，對陽性場點進行如下處置。

3.1 同群牛的處置

對陽性場點的所有牛只進行就地隔離，禁止出入。同時對可疑牛只單獨隔離，并派專人監督畜主執行到位，并且在42 d后進行復檢。

3.2 陽性奶牛的處置

對14頭陽性奶牛進行了淘汰無害化處理。4月29日淘汰了木棉奶牛場的陽性奶牛3頭和鄒業孟養殖戶的陽性奶牛3頭；5月13日淘汰了北流市正順養殖有限公司的陽性奶牛3頭和柯有軍養殖戶的陽性奶牛2頭；5月27日淘汰了徐楚靜養殖戶的陽性奶牛1頭和傅廷海養殖戶的陽性奶牛2頭。所有淘汰陽性奶牛都是送至陸川縣國環病害動物無害化處理有限公司進行無害化處理。同時已經開始按照相關文件規定，對被撲殺的奶牛進行撲殺補助申請程序。

3.3 消毒

分別向6個陽性場點發放60 kg二氯異氰脲酸鈉粉，指導畜主用二氯異氰脲酸鈉消毒水對飼養場所、用具及相關物品進行清洗消毒，對場內可能被污染的飼料、墊料及雜物采取挖坑焚燒處理，對當時場內牛糞進行了堆積密封或化糞池發酵處理，每天對隔離場地采用二氯異氰脲酸鈉消毒水進行噴灑消毒，在飼養場出入口處設置消毒池，并放置消毒水。

4 結果分析

4.1 術后炎性反應峰值分布

本次奶牛結核病流行學調查，在提純牛型結核菌素注射前和術后48、72、96 h點測量術部皮皺厚度，被監測為結核病陽性奶牛14頭、可疑奶牛5頭，共19頭；術后炎性反應皮皺厚峰值在48 h監測點的有序號2、8、13、14、15、17奶牛，占31.58%；峰值在72 h監測點有序號1、3、4、5、6、7、9、11、12、16、18、19奶牛，占63.16%；峰值在96 h點的有序號10奶牛，占5.26%。詳見表2。

表2 監測為陽性與可疑奶牛數值

4.2 判定取值分析

本次診斷監測，在48 h、72 h、96 h 3個時間點的監測值中，只要有1個點術后炎性反應皮皺厚峰值與術前值差≥4 mm，判定為陽性；未做24/120 h點監測，如有可能，如增加24、120 h點，對反應過快或慢點牛只監測，結果準確性更有輔佐。本診斷沒有按"提純牛型結核菌素說明書”術后炎性反應72 h監測值為判定，是否妥當有待商榷。

4.3 奶牛福利對疫病影響

本次檢測時，強調業主要規范場地用具清潔衛生消毒，加強牛只運動和日曬，豐富糧草營養供給，增強機體抵抗力，業主有可能結合鏈霉素、對氨基米楊酸鈉等藥物療養，可疑牛5頭在隔42 d復檢均為陰性。相呼應，表1中5個均為陰性的奶牛養殖戶，共同點是欄舍通風透氣良好，有配套露天運動場，每天按時擠奶、供料飽食后，開栓獲解繩自由活動，然后清潔欄舍，并每星期消毒1次。

5 結 論

1)北流市屬于南亞熱帶季風氣候區，廄棚陰暗潮濕、通風不良、灰塵氨氣濃度大、夏季悶熱、冬季濕冷，如無夏季散熱和冬季保暖設施，久而容易引起機體抵抗力降低，誘發疾病[4]，也是造成環境污染問題所在。部分奶農，利用閑置的老舊泥磚瓦豬欄、倉庫，稍加改造，沒有露天運動場，舍內圈養為主，糞污凈化設施欠完善，欄舍選址及設施未達動物防疫環境衛生要求，久而發生疫病在所難免。良好飼養環境、足夠糧草營養、適當運動和日曬，可促進牛防疫功能系統抵御病毒菌侵害。

2)結核桿菌在100 ℃可瞬滅，牛奶沸點為107℃；結核病菌感染人主要通過消化道。6個陽性牛場戶的從業人員及家屬，做醫學檢查，沒發現有患結核病例。目前沒有收到有因喝這6個陽性場點的牛奶感染結核桿菌的人間病例消息。表明牛奶經巴氏滅菌或高溫消毒的熟奶進行銷售，對外散播病原感染人的可能性較低。

3)奶水牛養殖戶4戶，存欄奶水牛共360頭，檢測結果均為陰性。表明奶水牛對北流市夏季悶熱、冬季濕冷自然環境具有較強適應性，對結核病菌易感性低。

6 建 議

6.1 加強監測凈化疫病

北流市奶業，是以小散戶養殖奶牛為主體，近期內無法改變。應每年進行1次結核病流行病學調查，對陽性牛無害化處理；每季度對陽性場點的所有牛只進行牛結核病監測，淘汰陽性牛，確保牛群健康；主管局派農業執法人員，監督陽性場點的業主嚴格做好場地物品衛生消毒管理工作。健康人員才能飼養牲畜；加強飼養管理，牛舍出入口設置消毒池，飼養用具每月定期消毒1次，確保環境衛生。

6.2 普及防疫法律法規、疫控技術

加強對奶牛養殖者的牛疫病檢疫工作，需調入奶牛，須有近期口蹄疫檢疫，布魯氏菌病、結核病等流行病監測結果為陰性，方可調入，并做好落地報告和備案。落地隔離觀察1個月以上再行檢疫，陰性者才能合群。派遣技術人員，定期或不定期到場戶組織業主進行奶牛疫病防控技術培訓；組建奶牛養殖業主微信群，宣傳動物防疫法律法規、支持奶業發展政策措施等信息，促進業主間交流經驗，接受養殖戶的相關咨詢。

6.3 示范帶動安全養殖

引導社會游資投入，按動物防疫要求，規范選址科學布局，高起點建設欄舍通風透氣良好、配套露天運動場、管理規范的奶牛養殖示范場，示范帶動社會奶農科學養殖，確保乳品質量和公共衛生安全。