脂蛋白a（LPa）的標準化檢測進展

陳尚武

摘要：脂蛋白（a）是一種低密度脂蛋白的變體，包含載脂蛋白（a）的蛋白質。遺傳和流行病學研究已確定脂蛋白（a）是動脈粥樣硬化和相關疾?。ü谛牟?、中風）的危險因素。脂蛋白（a）分子結構復雜，國內目前使用的檢測方式繁雜不一，檢測結果差別較大，難以做到實驗室之間結果統一，不利于制定治療標準。在國際臨床化學和實驗室醫學聯盟組織（IFCC）的努力下已建立參考方法和參考物質，推薦使用以nmol/L為單位報告測量值，推進了脂蛋白（a）的標準化檢測進程。

關鍵詞：脂蛋白a;標準化檢測;動脈粥樣硬化;冠心病;中風;進展

【中圖分類號】 R541.4 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）13--01

血漿脂蛋白Lp（a）的水平與心血管疾病的風險呈正相關，這一點在已有的病例對照研究和前瞻性臨床研究中，均已得到充分的證實[1-2]。我們對12個前瞻性研究進行meta分析，共納入1617例冠心?。–HD）病例與10035例對照組，統一Lp（a）濃度計量單位后可得出結論如下：排除不良生活方式、不合理膳食等生活因素，以及高血壓、血脂異常等生理因素后，脂蛋白a對于95%的白種人是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的獨立風險因子（此結論不區分性別）[3];Lp（a）會隨著低密度脂蛋白膽固醇（LDL）的升高，而增加患心臟疾病的風險，但在高脂血癥的冠狀動脈疾病進展中未表現出明顯的相關性[4-5]。若Lp（a）能夠標準化測量將在公共衛生領域產生影響，為早期預測心血管疾病風險領域作出貢獻。

一、Lpa的分子特性

脂蛋白a是一種低密度脂蛋白（LDL），包裹著單分子載脂蛋白B-100（apoB100）和載脂蛋白（apoa）分子。 apo（a）與纖溶酶原（一種纖溶酶原）具有結構同源性，纖溶酶原酶含有多個稱為kringle的結構域，這些結構域可作為結合基序并產生多種apo（a）亞型。一旦在肝細胞中合成，apo（a）就會釋放到血漿中，并與富含TG的apoB100脂蛋白結合形成Lp（a）。apo（a）或Lp（a）亞型的質量主要取決于一個特定的kringle重復序列，即KIV-2域的結構（大小或長度和分子量）。 KIV-2拷貝數量的這種異質性大約占Lp（a）血漿水平個體間最大差異（高達1，000倍）的一半。大型，高分子量apo（a）亞型的肝細胞分泌率較低，并且由于大多數個體對兩種不同的亞型是雜合的，因此，血漿中最小，低分子量的亞型通常占具有兩個不同apo（a）等位基因者的血漿。血漿Lp（a）的質量主要與合成有關，特別是與釋放到血漿中的特定同工型的分子量有關。在高加索人中，升高的Lp（a）水平通常與低MW apo（a）亞型相關，但存在種族差異。

由于Lp（a）的水平主要是由6號染色體上的apo（a）基因決定，因此不同個體間和種族間有著極為不同的Lp（a）水平。因為環餅區域KIV的2段數量變化很大，導致apo（a）分子大小跨度在187’000到662’000 Da范圍內。這一復雜的分子結構也使得Lp（a）無法用簡單的摩爾系數進行摩爾單位與質量單位進行換算。

為了使結果在可控范圍內準確，避免分子大小的異質性對檢測結果的影響，建議采用nmol/L來表達Lp（a）蛋白的測量值。這一方法即便選定基于針對Lp（a）分子上所包含的可變區域的抗體檢測也不對結果產生影響。這個方法采用的抗體可識別每一Lp（a）顆粒上的一份apo（a）。若采用mg/L的單位表達Lp（a）測量值會出現患者apo（a）分子小于所使用的定標液中的apo（a）分子時，則實驗傾向于得到低于患者實際Lp（a）水平的結果;患者apo（a）分子大于所使用的定標液中的apo（a）分子，則實驗傾向于得到高于患者實際水平結果的現象。nmol/L的方法利用WHO/IFCC國際參考試劑（SRM2B）的抗體識別每一顆粒上的一份apo（a），可達到標準化檢測，實驗室間結果可比對的目的[6]。

二、Lp（a）目前的檢測方法和標準化趨勢

如上面所述，不同地區和不同的研究團隊對Lp（a）和心血管疾病的相關性和風險性評估因為以下幾個方面的原因導致研究結果與結論存在較大區別[6]（1）不同的試劑生產商使用了不同的Lp（a）抗體制備試劑。Lp（a）在個體和種族間的含量差異可達1000倍，其含量主要由6號染色體上的apo（a）基因決定，KIV-2數量的變化使得apo（a）分子大小變化從187’000 至662’000 Da不等，若使用該片段抗原將出現檢測結果差異較大的情況。（2）不同研究之間使用的檢測方法學不同。目前臨床上所使用的Lp（a）檢測方法包括：特定蛋白儀的免疫散射比濁法、生化儀普遍使用的免疫透射比濁法、非競爭ELISA、ELISA雙抗體夾心法、免疫熒光法、免疫擴散電泳等。 （3）由于Lp（a）分子的多態性，不同生產廠家之間所應用的校準品、質控品與待測樣本中Lp（a）的分子大小不同、且標準品不同批號間分子大小難以長期保持一致，造成檢測結果的高估或者低估。（4）標本采集流程，或使用的標本是血漿還是血清、新鮮標本還是冷凍標本，冷凍標本是否反復凍融等都對檢測結果有所影響。對Lp（a）檢測進行標準化是目前檢驗醫學亟需解決的問題， 進一步明確Lp（a）與心血管疾病的關系只能建立在在統一的標準方法和參考物質基礎上，進而建立統一的治療目標和療效監測手段。

為了標準化檢測，準備合適的Lp（a）血清參考樣品以校準不同檢驗系統是很重要的。系統中病人的參考樣本必須具有相同的免疫化學特性。WHO/IFCC SRM 2B表現出其參考試劑的必要的穩定性及互通特性，它通過提供一種以精準度為校準基礎的校準方法（不受apo（a）異質性影響），在標準化系統中起到關鍵的作用。根據歐盟《體外診斷醫療器械指令》（IVDD）的要求，試劑公司校準品的值需可溯源至高水平的參考物質。為此可采用WHO/IFCC SRM 2B，它的定值可溯源至Lp（a）協同參考檢測系統。Lp（a）的檢測系統在校準方面達成了全球共識，通過使用可追溯至“世衛組織/ IFCC脂蛋白（a）免疫測定國際參考試劑”的標準化方法，WHO/IFCC SRM 2B的上市將消除測試系統之間差異的主要因素。得益于有系統間可比較的結果出現，Lp （a）的參考區間和cut—off值對于各類人群未來心血管疾病發生風險的增加程度可以作為一個參考（7）。

參考文獻：

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[2]張保珍， 薄濤. 探討人血漿脂蛋白相關磷脂酶A2和血清脂蛋白（a）對缺血性腦卒中風險預估的價值[J]. 首都食品與醫藥， 2019， 26（1）：62-62.

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