臨床待輸血患者RhE抗原和不規則抗體的檢測及其臨床意義

呂彬

（大連市血液中心 遼寧大連 116000）

1 前言

人體的紅細胞血型在民族、地域等方面的分布方面具有顯著差異，研究、分析不同人群的血型分布，對于科學地解釋某類疾病高發的原因具有重要意義，有助于對疾病的治療和預防。當前人類的血型系統已達36個，而Rh系統是其中最為復雜的一種，其含有54種Rh血型抗原，其中，D抗原、C抗原、E抗原、c抗原、e抗原與臨床輸血之間有密切聯系，抗原陰性的患者而言，一旦接受抗原陽性人員的血液后，會出現一種超出ABO系統之外的抗體，即紅細胞不規則抗體，一旦這種抗原抗體不匹配，會導致患者出現溶血性輸血反應[1]。另外，由于Rh系統存在著遺傳多態性，故不同種族和地域的人群，其Rh血型抗原的分布頻率也不同，所產生的不規則抗體也存在較大差異，因此為患者輸血前，必須進行相關檢測。鑒于此，本文對RhE抗原和不規則抗體的檢測的有效性進行研究，以期為相關人員提供參考。

2 資料與方法

2.1 一般資料

選取2019年2月—2020年2月，本血液中心督導的多家用血醫院患者血液標本共200例，采用微柱凝膠法對所有患者的RhE抗原進行檢測。其中，男性患者132例，女性患者68例；患者的年齡范圍為22～68歲，年齡均值為（44.6±3.5）歲；具有臨床免疫史患者103例，無臨床免疫史患者97例。本研究已獲我中心倫理委員會授權，所有患者的性別、年齡和免疫史等病歷資料無特異性差異（P＞0.05）。

入組標準：經血常規、肝腎功能等檢測，均無明顯異常者；患者及其家屬均自愿參與研究，并簽署知情同意書。排除標準：并發重度認知障礙、慢性疼痛病史、嚴重的精神疾病者；入組前已存在高血壓的患者；對此次研究涉及藥物過敏者；有長期服用鎮痛藥物史者；并發腎、心、肝等功能嚴重異常者；并發惡性腫瘤者；尚處于妊娠期與哺乳期中的女性患者。

2.2 儀器與方法

FYQ免疫微柱孵育器；TD-A型血型血清學離心機；血型檢測卡；抗人球蛋白檢測卡；血型反定型試劑盒；不規則抗體試劑；低離子強度鹽溶液；紅細胞血型抗體鑒定細胞。所有試劑均需要在有效期內使用。

對標本ABO、RhD、RhE血型進行檢測：對患者的靜脈血液進行采集，將血樣添加至含EDTA抗凝劑的試管；將采集得到的標本配制成0.8%的紅細胞生理鹽水懸液；參照ABODE血型檢測卡（即微柱凝膠）的說明書進行操作；應用專用型離心機，以900 r/min離心2 min，再以1 500 r/min離心3 min，肉眼判定其結果。

若紅細胞與抗體間相結合在微柱凝膠中生成的特異性抗原抗體復合物，其浮于凝膠的表面或是其中即為陽性反應，由此說明了，在受檢者的紅細胞表面具有相應的抗原；對于受檢者的紅細胞沒有與抗體間相結合，不具有特異性抗原抗體復合物生成，游離的紅細胞逐步沉至微柱凝膠的底部即為陰性反應，由此說明了，在受檢者的紅細胞表面不具有相應的抗原。

對標本進行不規則抗體篩查：采集患者的靜脈血，并將其置于不具有抗凝劑的試管中；37℃條件下靜置2 h，以2 000 r/min離心10 min，獲得上清液；用低離子強度鹽溶液（LISS），將1～3號的O型篩選出紅細胞，并配制成0.8%的懸液；對抗人球蛋白檢測卡（即不規則抗體篩檢）的微管進行標記，參照試劑卡相關的說明書進行操作；將試劑卡置于37℃條件下，進行15 min的孵育；立即應用專用型離心機，以900 r/min離心2 min，再以1 500 r/min離心3 min，肉眼判定其結果，結果判定方法同上。若1～3號管都呈現出陰性，表明在受檢者的血清中不具有該標準O型篩選紅細胞抗原特異性的免疫球蛋白G（IgG）類不完全抗體；若1～3號管，具有1管或超出1管呈現出陽性，表明在受檢者的血清中具有該標準O型篩選紅細胞抗原特異性的IgG類不完全抗體。

對不規則抗體進行鑒定：在檢出不規則抗體呈現出陽性的標本后，需要應用1～10號譜細胞進行微柱凝膠法抗體特異性鑒定。應用微柱凝膠抗球蛋白技術，將其依次與由10人份的O型紅細胞所構成的譜紅細胞與自身紅細胞（均為0.8%的低離子懸液）間進行反應。與譜紅細胞中的1份或多份進行凝集，與自身紅細胞中的不凝集即為抗體陽性，并參照與譜紅細胞的反應格局，判定抗體的特異性。對于與自身紅細胞凝集的，需要應用巰基試劑（2-ME）以排除自身的冷凝集素。

2.3 觀察指標

RhE抗原檢測結果：觀察所有患者的RhE抗原檢測情況，判斷其陰性率和陽性率；不規則抗體篩查結果：觀察所有患者的不規則抗體篩查情況，觀察其具體的抗體類型。

2.4 統計學處理

采用SPSS22.0軟件對所有數據進行分析，計數數據表示為“[例（%）]”表示，以χ2對數據差異實施檢驗；計量數據表示為（±s），對數據差異實施t檢驗，P＜0.05，表明數據具有統計意義。

3 結果

3.1 RhE抗原檢測結果

RhE抗原檢測的結果表明，RhE抗原的陽性率為51.0%、RhE抗原的陰性率為49.0%，數據對比不存在特異性差異（P>0.05），詳見表1。

表1 RhE抗原檢測結果（%，n）

3.2 不規則抗體篩查結果

不規則抗體篩查的結果表明，不規則抗體共8例，占比4.0%。其中，抗-E體占3.5%，其余抗體占0.5%，數據對比存在明顯差異（P<0.05），詳見表2。

表2 不規則抗體篩查結果（%，n）

4 討論

紅細胞血型不規則抗體一般都是由人類紅細胞作為抗原對刺激同族免疫而產生作用的[2]，一旦輸入血型不合的血液，就會進一步對機體造成刺激而出現抗體，特別是對于存在輸血史的患者而言，能夠對之前無法檢出的抗體來進行激活。近年來的研究表明[3]，紅細胞異源免疫是臨床輸血患者的一種常見并發癥，是臨床上紅細胞不規則抗體所導致的一種溶血性輸血反應，同時也是輸血死亡的一大重要因素[4]。在非傳染輸血性反應中，遲發型的血清反應是3種溶血性輸血反應中最為重要的一種。在紅細胞規則抗體中，Rh系統抗體是由免疫系統刺激產生的，其中抗-E抗體是近年來最為常見的一種抗體。

我國臨床輸血技術規范只要求對患者的ABO血型和RhD抗原進行檢測，而對于RhE抗原并沒有特殊性的要求[5]。由于我國人群的RhE陰性率比較高，且明顯高于RhD陰性率，若在輸血前沒有做好相應的預防措施，易出現同種免疫，一旦產生不規則抗體，會導致臨床上難以配血，甚至造成十分嚴重的后果[6]。對具有輸血史、妊娠史的患者而言，需要對其就同種抗體進行篩查、鑒定，在具備相應條件后，才能夠對該類患者應用RhE等Rh系統進行抗原同型輸注，以減少機體生成Rh系統同種抗體的機率[7]。

產生不規則抗體的原因多是輸血、妊娠所生成的紅細胞同種免疫[8]。由于妊娠會生成免疫應答，故女性生成不規則抗體、發生溶血反應的機率相較于男性更高[9]。在臨床中，需要尤其關注待輸血的女性患者，對非RhD抗原引發的同種免疫反應，需要給予更多的關注。在法國，需要對獻血者、受血者均進行ABO、Rh、Kell系統表現型常規鑒定，并規定對年齡低于50周歲的女性輸血患者需要實現Rh、Kell系統間的相匹配（其中，包括RhC、RhE、Rhc、Rhe、K抗原），以防止生成不規則抗體[10]。近幾年，紅細胞同種異源免疫問題已在發達國家獲得較高的關注，部分研究人員提出，在進行輸血以前表現型的擴展性匹配（EM），即把僅ABO、RhD同型匹配擴展至RhC、RhE、Rhc、Rhe、K、Fya、Jka、S等相關抗原的匹配，可以避免不規則抗體的生成及其負面作用，但是，該類十分精準地匹配需要以較大規模的血清學篩查基因分型為前提，使找出最為合適供血者的工作更加復雜，故現階段，該類表現型匹配在國外只被應用于特定的患者群體，例如，鐮狀細胞性貧血患者、β-地中海貧血的患者等[11]。

在我國，給予不規則抗-E抗體具有的多發性，與白種人群預防抗-D抗體間相似，應做到在輸血前對患者、獻血者進行RhE抗原檢測，以對兩者的RhE抗原進行更為準確地分型，并促進ABO、RhD、RhE之間的匹配性輸血得以實現[12]。唯有如此，才能夠在源頭上降低不規則抗-E抗體的總陽性率，以防生成抗-E抗體對患者再次輸血造成困難，保障臨床輸血的安全性[13]。

本文采用微柱凝膠法對RhE抗原進行檢測，并予以不規則抗體檢測，結果顯示，，RhE抗原的陽性率為51.0%（102/200），RhE抗原的陰性率為49.0%（98/200）；不規則抗體共8例，占比4.0%，中抗-E體7例，占比3.5%，其余抗體1例，占比0.5%，數據對比存在明顯差異（P<0.05）。

綜上所述，在臨床待輸血患者中，最常出現的不規則抗體為抗-E體，而對其予以RhE抗原檢測，并做好血型同型匹配輸血，能夠有效避免患者出現抗-E體，有助于保證臨床輸血的安全性。