原子吸收法測定AD鈣奶中鈣含量的方法學驗證*

李俠 史靜曉 李艷婷 郭偉偉 郭霄飛 徐莉娜***

1（山西省太原市農業技術推廣服務中心，山西太原 030030）

2（山西農業大學，山西太原 030031）

3（山西省晉中市綜合檢驗檢測中心，山西晉中 030600）

AD 鈣奶是在牛奶中添加了維生素A 和維生素D，能夠促進機體對鈣的吸收。鈣能夠維持神經肌肉的正常興奮性，促進神經末梢分泌乙酞膽堿，也能改善細胞膜的通透性，增加毛細血管的致密性；與體內80多種酶的活性有關，具有促進器官發育和智力提高、改善味覺、促進傷口愈合以及提高免疫功能等作用。本試驗采用GB 5009.92—2016《食品安全國家標準 食品中鈣的測定》中火焰原子吸收光譜法測定AD 鈣奶中鈣的含量，并通過線性考察、重復性、精密度、加標回收等試驗進行方法學驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

PinAAcle 900H 原子吸收光譜儀：PerkinElmer；AUW120D 分析天平,島津菲律賓工廠；SH-II-5B 電熱板,黃驊菲斯福實驗儀器有限公司。

1.2 試劑

鈣標準物質、硝酸、磷酸二氫氨、氧化鑭、76%高氯酸＋67%硝酸（1＋1），所用試劑均為分析純；實驗用水為去離子水。

1.3 方法

按照GB 5009.92—2016《食品安全國家標準食品中鈣的測定》第一法火焰原子吸收光譜法進行檢測。

1.3.1 鈣標準工作溶液制備

吸取1.00 mL標準儲備液（10 g/L），置于100 mL量瓶中，用2%HNO3溶液定容至刻度，搖勻，得標準中間液（100 mg/L），再分別吸取標準液0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.00 mL、6.00 mL置于100 mL 容量瓶中，另在各容量瓶里加入5 mL鑭溶液（20 g/L），用2% HNO3 溶液定容至刻度，混勻，得到質量濃度分別為0.0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、6.0 mg/L 的標準工作液。

1.3.2 線性考察

將鈣標準系列溶液按照質量濃度由低到高的順序分別導入火焰原子霧化器，測定其吸光度值，以質量濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，制作標準曲線。

1.3.3 原子吸收儀工作條件

原子吸收儀工作條件見表1。

表1 原子吸收儀的工作條件

1.3.4 供試品、質控樣品及空白溶液制備及檢測

1.3.4.1 試樣處理

準確稱取已混合均勻的待測試樣0.5 mL，置于25 mL 燒杯中，加硝酸15 mL，樣品加蓋靜置過夜，置于電熱板按程序消解(100 ℃升溫,130 ℃消解)，消解完全后，180 ℃趕酸至1 mL 左右。取下放冷，用水轉移至25 mL 納氏比色管中，稀釋至刻度，并在稀釋液中加入一定體積的鑭溶液（20 g/L），使其在最終稀釋液中的質量濃度為1 g/L，混勻，即得待測溶液，也可根據實際測定需要再稀釋。同樣條件作試劑空白試驗。

1.3.4.2 測定

在與測定標準溶液相同的試驗條件下，將試樣溶液導入火焰原子霧化器，測定吸光值，與標準系列比較而定量。

2 方法學驗證

2.1 線性考察

鈣標準溶液的標準曲線見圖1。

圖1 鈣標準曲線圖

由圖1 可知，在鈣標準溶液質量濃度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范圍內，鈣溶液吸光度值與質量濃度呈良好的線性關系，線性方程為Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81）。

2.2 重復性試驗

取樣品6 份平行處理，測定，計算樣品含量及RSD值，測定結果見表2。由表2可知，重復性試驗的RSD值為8.58%，符合方法精密度＜10%的要求。

表2 重復性試驗結果

2.3 精密度試驗

取樣品1 份，測定6 次，計算樣品含量及RSD值，測定結果見表3。由表3 可知，重復樣品間結果誤差小，相對標準偏差0.36%，說明方法精密度較好。

表3 精密度試驗結果

2.4 回收率試驗

按照試驗設計進行加標回收試驗，試驗按高、中、低3 水平進行，每個濃度水平平行制備3 份樣品，測定含量并計算回收率和相對標準偏差，獲試驗結果見表4。由表4 可知，3 種水平加標回收率范圍92.42%～111.74%，RSD 范圍1.55%～1.69%，符合GB/T 27417—2017《合格評定化學分析化學分析方法確認和驗證指南》中回收率和RSD的要求。

表4 樣品回收率試驗結果

2.5 檢出限

平行制備試樣空白20份，測定吸光度值，計算空白值標準偏差（Sb），檢出限公式為：

CL=3Sb/b，

式中：CL—方法檢出限；

Sb—空白值標準偏差；

b—方法校準曲線的斜率。

測定結果表明，若取樣量為0.5 g，定容體積10 mL，則最小檢出限為0.45 mg/kg，方法定量限為1.42 mg/kg，符合GB 5009.92—2016 中檢出限0.5 mg/kg，定量限1.5 mg/kg的要求。

3 結論

經驗證，在鈣標準溶液質量濃度0.0 mg/L～6.0 mg/L 范圍內線性良好，線性方程為Y=0.060 21X+0.001 96（R2=0.999 81），重復性試驗RSD 為8.58%，精密度試驗RSD為0.36%，3 種水平加標回收率范圍92.42%～111.74%，RSD范圍1.55%～1.69%，該方法線性和范圍、檢出限、定量限、回收率、精密度以及重復性的試驗結果均滿足GB/T 27417—2017 和GB 5009.92—2016 的相關要求。該方法線性良好、易操作、重現性良好、測量結果準確，滿足實驗室檢測需求。