鹽酸達泊西汀片的體外溶出曲線相似性評價

郭巧蘭 陳良梅 安 明

1.包頭醫學院藥學院，內蒙古包頭 014040；2.天士力研究院江蘇天士力帝益藥業有限公司，天津 300410

鹽酸達泊西汀是用于治療早泄的短效的5-色胺再攝取抑制劑[1]，通過減少神經元對血清素的吸收[2]以及神經遞質對細胞突觸前和突觸后受體之間電位差的影響來延緩早泄癥狀[3]。鹽酸達泊西汀具有pH依賴性（pKa=8.6）[4]，在中性溶液中的溶解度較低[5]，在生物藥劑學分類系統中屬于Ⅳ類藥物，溶出度成為藥物吸收的限制環節[6]，這類藥物的體外溶出至關重要[7]。同時普通口服固體制劑給藥后，藥物在體內的溶解和釋放對于藥物的吸收起重要作用[8]。本研究考察鹽酸達泊西汀片在不同溶出介質中的體外溶出曲線[9]，并通過相似因子（?2）法與參比制劑的溶出曲線進行相似性評價[10]，為后續相關研究提供數據支持。

1 材料

1.1 儀器

7080DS自動溶出度儀(美國安捷倫科技有限公司）；Cary60紫外分光光度計(美國安捷倫科技有限公司)；XS105DU十萬分之一電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；S220 pH計[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；TS-100C恒溫搖床（上海天呈實驗儀器制造有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸達泊西汀原研片60 mg（德國美納里尼集團楊森公司，批號：1800101）；鹽酸達泊西汀自制片60mg（天士力研究院，批號：D03、D04、D05、D06）；鹽酸達泊西汀原料藥[廣州市同暉化工有限公司，批號：2DPH(M)0060820]；鹽酸達泊西汀對照品（杭州國瑞生物科技有限公司，批號：WR20211202）；甲醇（美國Supelco公司，色譜純，批號：1148507118）

2 方法與結果

2.1 溶出介質制備

按照《普通口服固體制劑溶出度實驗技術指導原則》[11]配制9種介質，分別為pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.0醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 5.8磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.0磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.4磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液及水。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取27 mg鹽酸達泊西汀對照品置于10 ml容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度并搖勻，作為儲備液。精密量取1 ml儲備液置于100 ml容量瓶中，加相應溶出介質稀釋至刻度，搖勻得到對照品溶液。

2.3 溶解度的測定

根據搖瓶法分別測定達泊西汀原料在pH 1.0、pH 4.5、pH 5.5、pH 5.8、pH 6.8和水6種介質中的飽和溶解度并繪制曲線，結果見圖1。溶出介質pH在1.0～4.5時，達泊西汀呈現較高溶解度，該pH區間不同處方工藝自制片的體外溶出度較快，難以反映不同制劑工藝導致的自制片溶出度差異。溶出介質在pH 4.5～6.8時，原料藥溶解度顯著降低，因此可選擇具有區分力的溶出條件以區分不同制劑工藝片劑對體外溶出度的影響。

圖1 達泊西汀原料藥的pH-溶解度曲線

2.4 方法學考察

2.4.1 檢測波長的確定 精密稱量處方中可能使用的輔料，分別加6種介質充分溶解并過濾，得到空白輔料溶液。在200～400 nm內對空白輔料溶液、空白溶劑和對照溶液進行紫外掃描。結果表明，鹽酸達泊西汀在292 nm處有最大吸收峰，而空白溶劑和空白輔料溶液在292 nm處無明顯吸收，所以選擇292 nm為測定波長。

2.4.2 線性關系考察 精密量取適量的鹽酸達泊西汀儲備液置于100 ml量瓶中，用6種溶出介質稀釋至刻度，分別配制成15、20、30、40、45 μg/ml的不同濃度對照品溶液。根據紫外分光光度法，測定不同濃度溶液在292 nm處的吸光度。以鹽酸達泊西汀的質量濃度（x）為橫坐標，吸光度（y）為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程，結果見表1，在15～45 μg/ml內呈良好線性關系。

表1 不同溶出介質線性回歸方程

2.4.3 精密度實驗 取適量對照品溶液，用紫外分光光度法重復測定6次。RSD分別為0.29%、0.45%、0.36%、0.55%、0.63%和0.61%。結果表明，該儀器具有良好的精密度。

2.4.4 穩定性實驗 取適量6種介質的對照品溶液，置于室溫下0、2、4、6、8、12和24 h并測量吸光度。RSD分別為0.54%、0.38%、0.59%、0.41%、0.51%和0.46%，表明鹽酸達泊西汀室溫下24 h內在6種介質中具有良好的穩定性。

2.4.5 回收率實驗 分別精密稱取約21.6、27.3、30.0 mg的鹽酸達泊西汀原料并置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻并作為儲備液。分別精密量取1 ml儲備液放入100 ml容量瓶中，加入處方輔料，分別加入6種介質稀釋至刻度，搖勻并過濾。根據紫外分光光度法測定292 nm處的吸光度值，計算鹽酸達泊西汀回收率和RSD。3個濃度樣品（80%、100%、120%）中的鹽酸達泊西汀平均回收率在99.4%～99.7%，RSD分別為0.70%、0.48%、0.20%、0.28%、0.19%、0.32%，表明在6種介質中的鹽酸達泊西汀回收率均良好。

2.5 溶出度測定

按《中華人民共和國藥典》2015年版第4部分通則0931[12]，溶出介質900 ml，取樣時間為5、10、15、20、30、45和60 min，根據紫外分光光度法測定3批不同處方（批號：D03、D04、D05）自制片吸光度，計算平均累積溶出度并繪制溶出曲線，結果見圖2～7。

圖2 pH 1.0介質中的3批自制片溶出曲線

2.6 溶出介質的區分力考察

為進一步考察溶出介質的區分力，在常見的4種介質評價中，加入了pH 5.5、pH 5.8兩種介質，考察了3批工藝參數不同的自制片的溶出曲線相似性，結果見表2。由表可知6種介質均表現出D03批與D05批自制片溶出曲線的不相似以及D04批與D05批的溶出曲線相似性。自制片D03和D04批在pH 5.5批和pH 5.8兩種介質中的溶出曲線明顯不相似，表明兩種介質具有一定區分力。

圖3 pH 4.5介質中的3批自制片溶出曲線

圖4 pH 5.5介質中的3批自制片溶出曲線

圖5 pH 5.8介質中的3批自制片溶出曲線

圖6 pH 6.8介質中的3批自制片溶出曲線

圖7 水中的3批自制片溶出曲線

表2 ?2結果統計表

2.7 溶出曲線相似性評價

通過該6種介質評價經處方優化的自制片D06與原研片的溶出曲線相似性，結果見圖8。結果顯示，與 原 研 片 的?2分 別 為69.9、67.5、67.9、68.9、68.3、67.0，結果均大于50，表明自制片D06與原研片在6種介質中的溶出曲線相似。

圖8 自制片D06與原研片在6種不同介質中的溶出曲線

3 討論

具有區分力的溶出方法在固體制劑的處方工藝中發揮重要作用，可以區分出不同處方藥物的內在質量屬性[13]。本文闡述了具有區分力的溶出方法的篩選和驗證思路[14]，為固體制劑的處方工藝研發提供了參考。對于仿制藥，與原研片具有相似的體外溶出曲線，雖不能完全證明具有和原研片的生物等效性，但可大大提高生物等效性（BE）的通過率。

各國普遍使用?2法雖計算簡便，但也存在局限性[15]。為進一步的體內外相關性評價，需要在此基礎上通過其他模型類擬合統計法進行綜合評價，掌握體外溶出評估體系，才能在仿制藥的再評價和質量標準的建立提供便利[16]。