白芷不同基原化學成分差異性研究

王靜 朱春璐 袁子民

【摘要】目的：對白芷（白芷和杭白芷）不同基原進行化學成分差異性研究。方法：對白芷和杭白芷飲片進行浸出物、總香豆素含量及特征指紋圖譜研究，浸出物按照2020版《中國藥典》四部2201項下方法測定，總香豆素含量采用紫外-分光光度法，特征指紋圖譜采用HPLC法。結果：二者質量差異較大，白芷的浸出物含量和總香豆素的含量明顯高于杭白芷，且特征指紋圖譜成分差異明顯。結論：白芷不同基原在所含化學成分方面存在一定的差異性，在制劑開發中應固定基原，以利于制劑的質量控制。

【關鍵詞】白芷；杭白芷；總香豆素；指紋圖譜

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）10-0045-04

Study on the Difference of Chemical Constituents of Angelica Dahurica from Different OriginsWANG Jing1ZHU Chunlu2YUAN Zimin1*

1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Dalian 116600，China；

2.Shiyao Group Yuanda Dalian Pharmaceutical Co.Ltd. Dalian 116021，ChinaAbstract：Objective To evaluate the difference of chemical constituents of Angelica dahurica （Angelica dahurica and Angelica dahurica var.formosana） from different sources. Methods The contents of extract， total coumarin and fingerprint of Angelica dahurica were studied. The determination of the extract was carried out in accordance with the method of item 2201 in the fourth part of the 2020 edition of the Chinese Pharmacopoeia. The content of total coumarin was determined by UV-spectrophotometry and the characteristic fingerprint of Angelica dahurica was established by HPLC. Results There was a great difference in quality between Angelica dahurica and Angelica dahurica var.formosana，the contents of extract and total coumarin in Angelica dahurica were significantly higher than those in Angelica dahurica.Conclusions There were some differences in the chemical components of Angelica dahurica from different sources. The base materials should be fixed in the development of compound preparation to facilitate the quality control of the preparation.

Keywords：Angelicae dahuricae；Angelica dahurica var.Formosana；Total Coumarins；Characteristic Fingerprint

白芷載于2020版藥典，分為白芷、杭白芷兩種基原［1］。產區主要分布在四川、河南、河北、浙江、安徽等地，現代研究［2-4］表明其主要含有香豆素、揮發油等活性成分，具有抗炎、鎮痛、解痙等藥理作用。目前，白芷質量評價以不同產地的成分差異研究報道較多［5-8］，對于白芷不同基原多指標的化學成分差異性的質量評價研究較少。另外，中國藥典主要以薄層鑒別、浸出物、歐前胡素含量測定作為化學成分質量控制指標，缺少全面表征其化學成分的控制標準。因此，本研究通過測定總香豆素、浸出物及多成分特征指紋圖譜的研究，對白芷不同基原進行化學質量分析及表征，以期為白芷質量標準的提升及其藥材的基原選擇提供科學依據。

1儀器與試藥

UV-3010紫外可見分光光度計（日本日立公司）； Agilent1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；白芷（1～10批，購于安國市光明飲片加工廠，產地河北安國）、杭白芷（1～10批，大連權健中藥飲片廠，產地四川）經遼寧中醫藥大學李峰教授分別鑒定為白芷Angelica dahurica （Fisch.ex Hoffm.） Benth.et Hook.F.、杭白芷Angelica dahurica （Fisch.ex Hoffm.） Benth.et Hook.f.var．Formosana （Boiss.） Shan et Yuan；歐前胡素對照品（批號：110826-200307；純度≥98%）購于中國藥品生物制品檢定所；異歐前胡素對照品（批號：ZM0531BB13；純度≥98%）、氧化前胡素對照品（批號：Y26A6S2757；純度≥98%）、水合氧化前胡素對照品（批號：R25A6F2764；純度≥98%）、白當歸腦對照品（批號：P0103SA13；純度≥98%）、白當歸素對照品（批號：P01028SA13；純度≥98%）、花椒毒酚對照品（批號：K21M5C1；純度≥98%）、佛手柑內酯對照品（批號：RF0224FA14；純度≥98%）均購于上海源葉生物科技有限公司；乙腈、甲醇、磷酸均為色譜純；水為娃哈哈純凈水。

2方法與結果

2.1浸出物的測定 取1～3批白芷和杭白芷粉末（過二號篩）約3 g，精密稱定，置150 mL具塞錐形瓶中，采用稀乙醇作為溶劑，參照2020年版《中國藥典》四部醇溶性浸出物測定方法（通則2201）項下的熱浸法進行測定。結果3批白芷的浸出物含量分別為68.54%、67.52%、70.30%，平均值為68.79%；3批杭白芷的浸出物含量分別為20.77%、21.56%、23.43%，平均值為21.92%。

2.2總香豆素的含量測定

2.2.1對照品溶液的制備 精密吸取0.32 mg/mL歐前胡素5 mL至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.032 mg/mL的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 分別取白芷、杭白芷粉末（過四號篩）約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇至50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液液0.5 mL置10 mL容量瓶中，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.2.3標準曲線的繪制 精密吸取2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、8.0 mL上述對照品溶液，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。以甲醇為空白，用紫外-可見分光光度法，在300 nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，歐前胡素濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.0314C-0.0058（r=0.9999），故濃度在0.0064～0.0256 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.4方法學考察 本研究總香豆素的含量測定主要參考課題組前期研究結果，方法學（精密度、穩定性、重復性、回收率）研究內容均符合有關規定，參考已發表的相關文獻［9］。

2.2.5總香豆素含量測定結果 取1～3批白芷和杭白芷供試品溶液，以稀乙醇溶液為空白，在300 nm處測量吸光度，按照標準曲線，計算各供試品溶液中總香豆素含量，結果3批白芷的總香豆素含量分別為26.43%、24.89%、26.04%，平均值為25.79%；3批杭白芷的總香豆素含量分別為14.18%、13.44%、13.01%，平均值為13.54%。

2.3特征指紋圖譜

2.3.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；柱溫：30 ℃；檢測波長：300 nm。流動相：A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液;梯度洗脫：0～50 min，A為5%～65%，B為95%～35%；50～70 min，A為65%～95%，B為35%～5%；流速：1 mL/min；供試品溶液進樣量：10 μL。

2.3.2供試品溶液的制備 分別取1～10批白芷和1～10批杭白芷飲片，粉碎（過60目篩），分別精密稱取粉末0.4 g，置容量瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定，超聲處理（250 W，40 kHz）1h，放冷，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3.3混合對照品溶液的制備 精密稱取各對照品適量，加甲醇制成每1 mL含花椒毒酚0.0175 mg、水合氧化前胡素0.0034 mg、白當歸素0.012 mg、佛手柑內酯0.0125 mg、白當歸腦0.0132 mg、氧化前胡素0.0065 mg、歐前胡素0.016 mg、異歐前胡素0.0125 mg的混合對照品，即得。

2.3.4穩定性試驗 精密吸取同一白芷供試品溶液10 μL，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h進樣測定，記錄特征指紋圖譜，以22號峰為參照峰，計算各共有特征指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果RSD值均小于2%，表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.3.5精密度試驗 精密吸取同一白芷供試品溶液10 μL，連續測定6次，以22號峰為參照峰，計算各共有特征指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果RSD值均小于1.5%，表明儀器精密度良好。

2.3.6重復性試驗 精密稱取同一白芷粉末各6份，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，分別依法測定各特征指紋圖譜。以22號峰為參照峰，計算共有特征指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果RSD值均小于3%，表明方法的重復性良好。

2.3.7特征指紋圖譜的建立及特征峰分析 取白芷和杭白芷，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進行測定［10］，得到白芷、杭白芷的特征指紋圖譜，經《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》2012版處理，結果表明白芷共有模式確定了18個指紋峰，杭白芷共有模式確定了20個指紋峰，經分別相似度比較，1～10批白芷的相似度分別為0.983、0.982、0.986、0.989、0.988、0.989、0.983、0.983、0.983、0.982；1～10批杭白芷的相似度分別為0.962、0.975、0.976、0.969、0.963、0.972、0.978、0.966、0.977、0.967。結果如圖1～5所示。經對比白芷和杭白芷的HPLC特征指紋圖譜相似度為0.832，二者在化學成分方面存在明顯差異。白芷與杭白芷的共有峰分別為1號、3號、6號、7號、8號、9號、10號、11號、12號、13號、15號、16號、17號、22號、23號、24號，其中2號、4號、5號、14號為杭白芷特有成分，18號、19號、20號、21號為白芷特有成分。經對照品確認，11號峰為花椒毒酚、12號峰為水合氧化前胡素、13號峰為白當歸素、16號峰為佛手柑內酯、20號峰為白當歸腦、 21號峰為氧化前胡素、22號峰為歐前胡素、24號峰為異歐前胡素。

3討論

基于本研究結果，白芷的浸出物含量和總香豆素的含量明顯高于杭白芷，說明浸出物含量和總香豆素之間存在一定的正相關，二者質量差異較大，因此，白芷不同基原存在化學成分的差異性，特別是在白芷制劑的研究與開發中，應重視基原的選擇，以確保制劑質量的一致性。

特征指紋圖譜的研究中，考察了甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-水等流動相系統，結果以乙腈-0.1%磷酸溶液流動相的梯度系統的指紋峰分離效果最佳，重復性好。測定波長選取了254 nm和300 nm進行考察，結果在300 nm測定波長下的特征指紋圖譜基線穩定，波動小，無溶劑峰干擾，故確定300 nm為測定波長。

王麗赟等［11］以15份不同主產區的白芷為材料進行基原差異分析，結果應用核基因ITS2序列可以區分白芷與其變種杭白芷，而葉綠體基因matK序列不能有效區分白芷與其變種杭白芷，但該法專業技術要求較高，樣品處理繁瑣。章軍等［12］采用RP-HPLC法對不同品種白芷藥材進行指紋圖譜的鑒別，結果通過指紋圖譜可鑒別白芷和杭白芷，但該研究中只指認了歐前胡素、異歐前胡素共有峰，對其它特征峰或共有峰并未確定成分。而本研究經對照品確認共指認確定了8個指紋峰，其中白芷中含有的白當歸腦（20號峰）、氧化前胡素（21號峰）特征峰，在杭白芷中并不含有，因此，可以通過特征指紋圖譜的方法能夠快速區分白芷與杭白芷。

參考文獻

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（收稿日期：2022-09-15編輯：陶希睿）