水冬瓜傷科止痛酊質量標準提升研究

楊元鳳 李承筑 羅玉玲 陳啟乾 周訓蓉

【摘 要】

目的：新建薄層鑒別方法，更加全面有效地控制水冬瓜傷科止痛酊的質量。方法：采用薄層色譜法，在原有質量標準的基礎上，增加了黃連、姜黃、醋延胡索、梔子四味藥材的定性鑒別。結果：黃連、姜黃、醋延胡索、梔子的薄層色譜斑點清晰、專屬性強。結論：本研究建立的實驗方法操作簡單，結果可靠，重復性好，能夠更有效地控制該制劑的質量。

【關鍵詞】 水冬瓜傷科止痛酊；質量標準提升；薄層色譜法

【中圖分類號】R284.1?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）03-0028-04

Promotion on Quality Standard of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding

YANG Yuanfeng1，2 LI Chengzhu3 LUO Yuling1，4 CHEN Qiqian1，2 ZHOU Xunrong1，2*

1.Department of Pharmacy， The Second Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicin，Guiyang 550003，China;

2.Traditional Chinese Medicine Research Center， The Second Affiliated Hospital of Guizhou

University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550003，China;

3.Department of pharmacy， Bijie Medical College，Guiyang 550003，China;

4.Pharmaceutical Research and Development Center， The Second Affiliated

Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550003，China

Abstract：Objective To built up new TLC identification methods to control the quality of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding more effectively and comprehensively.Methods TLC was used for distinguishing the Coptidis rhizoma、Processed Rhizome of Corydalis with Vinegar 、Gardeniae fructus and Curcumae longae rhizoma based on the original quality standard in the preparation.Results The TLC spots of Coptidis rhizoma、Corydalis rhizoma、Gardeniae fructus and Curcumae longae rhizoma were clear and specific without interference.Conclusion The test method set up in this study was simple and easy to repeat，the results were trustworthy， which can preferably and effectively control the quality of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding.

Keywords：Shuidonggua Shangke Zhitong Ding; Promotion of Quality Standards；TLC

急性軟組織損傷是骨傷科臨床常見病，在中醫學中歸屬于“筋傷”的范疇，證屬氣滯血瘀，治宜活血化瘀，消腫止痛［1］。外敷中藥是中醫骨傷科治療急性軟組織損傷的特色，其不僅具有局部療效肯定、副作用少的特點，還可免除針灸之痛、服藥之苦［2］。

水冬瓜傷科止痛酊（曾用名：苗藥傷科止痛液）是我院骨傷科用于治療急性軟組織損傷的醫院制劑，具有活血化瘀、消腫止痛之功。處方由苗藥嘎炯令豆得（水冬瓜根皮）、黃芩、黃連、黃柏、梔子、伸筋草等22味藥物組成，臨床使用近11年，療效確切，未發現明顯毒副作用，取得了較好的經濟效益與社會效益［3］。但在目前執行的水冬瓜傷科止痛酊的質量標準［4］中，定性鑒別檢查項只有3味藥材的薄層色譜鑒別方法。根據《貴州省醫療機構制劑技術審評要點（中藥、民族藥）（試行）》中對定性鑒別藥味數的要求是至少要全處方的1/3的處方量，即該制劑至少需定性鑒別出7味藥材（全處方由22味中藥組成）才符合對產品質量有效控制的要求。為了提高水冬瓜傷科止痛酊的質量控制水平。按照新的醫療機構制劑技術評審要求，我院中藥制劑研發中心正對其進行深度開發研究。在原有3味藥材定性鑒別的基礎上，新建立了制劑中黃連、姜黃、延胡索、梔子4味藥材的薄層鑒別方法，提升了水冬瓜傷科止痛酊的質量標準，為其進一步研究奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZF-20D型暗箱式紫外分析儀（鞏義市予華儀器有限責任公司）；JY 3001型藥物電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋（上海金橋科析儀器廠）；SK8210HP型超聲波清洗機（上?？茖С晝x器有限公司）；101-2AB型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥 黃連（黃連）、姜黃、梔子、延胡索對照藥材（批號分別為121752-201801、121188-201605、120986-201610、120928-201609）均由中國食品藥品檢定研究院提供；水冬瓜傷科止痛酊（全方冰片、薄荷腦除外，其余20味飲片混合粉碎成最粗粉，裝入2層過濾袋，置密閉容器中，第一次加4.6倍60%乙醇，第二次加3倍60%乙醇，密閉浸漬2次，每次浸漬7 d，每天攪拌一次，過濾，棄渣。合并浸出液，混勻，加入冰片、薄荷腦，攪拌，使完全溶解，加60%乙醇至1000 mL，攪勻，即得。制備3批，批號分別為20211001、20211002、20211003），缺黃連、姜黃、醋延胡索、梔子的陰性樣品均由醫院中藥制劑研究中心提供；硅膠G 板（批號：20200901，由青島海洋化工有限公司生產）；試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃連薄層鑒別 取本品和缺黃連陰性制劑各1 mL，自然揮干至0.5 mL，分別作為供試品溶液和陰性對照液。另取黃連對照藥材0.3 g，加甲醇15 mL，超聲30 min，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗［5］，吸取上述三種溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G板上，以環己烷-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺（5∶3. 5∶1∶1. 5∶0. 5∶1）為展開劑，置用濃氨試液預飽和20 min的展開缸內，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視［6］，結果如圖1所示。

2.2 姜黃薄層鑒別 取本品和缺姜黃陰性制劑各1 mL，自然揮干至0.5 mL，分別作為供試品溶液和陰性對照液。另取姜黃對照藥材0.2 g，加無水乙醇20 mL，振搖后放置30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述三種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇-甲酸（96∶4∶0.7）展開，取出，晾干，置365 nm紫外光燈下檢視［7-8］，結果如圖2所示。

2.3 醋延胡索薄層鑒別 取本品和缺延胡索陰性制劑各10 mL，水浴蒸干，分別加甲醇50 mL，超聲30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液和陰性對照液。另取延胡索對照藥材1 g，加甲醇50 mL，同法制成對照藥材溶液。吸取上述三種溶液各3? μL，分別點于同一硅膠G板上，以甲苯-丙酮（15∶1）展開，取出晾干，置碘缸中約3 min，取出，揮盡板上吸附的碘后，置365 nm紫外光燈下檢視［9］145-146，結果如圖3。

2.4 梔子薄層鑒別 取本品和缺梔子陰性制劑各1 mL，自然揮干至0.5 mL，分別作為供試品溶液和陰性對照液。另取梔子對照藥材1 g，加50%甲醇10 mL，超聲40 min，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液各2 μL，點于同一硅膠G 板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）為展開系統，預飽和15 min，展距8 cm，取出，晾干，可見光下檢視［10］，結果見圖4A；再噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，結果如圖4B所示。

3 討論

質量是醫院制劑的根，如果制劑質量出現問題，不僅達不到臨床治病的效果，還有可能會適得其反，產生不良后果。因此，做好醫院制劑的質量管理就成為重中之重。隨著科學技術的發展，檢測手段的進步以及《中國藥典》質量標準的不斷提升，我院部分研究批準較早的醫院制劑品種存在質量標準水平較低（如檢測指標過低、檢查項目少，檢測方法專屬性較差等），這就制約著醫院制劑的健康快速發展。質量標準的不斷提高，能有效監測產品的質量，及時發現異常情況，保證配制制劑用于人體的安全、有效和質量可控。因此，為了提升和完善我院醫療機構制劑質量標準，以我院中藥制劑研發中心為平臺，開展水冬瓜傷科止痛質量標準提升的研究，制定更加科學合理制劑質量標準。

水冬瓜傷科止痛酊全方22味藥物，現有質量標準僅有3個定性指標和1個定量指標。根據貴州省醫療機構制劑評審要求，該制劑定性鑒別藥味數至少要7味，因此我們需要在3個定性指標的基礎上，新建立至少4味藥材的薄層鑒別方法。課題組根據前期質量標準研究結果［4］，參照《中國藥典》2020年版一部［9］318，343-344及相關文獻［11］，對還未進行薄層鑒別研究的君藥水冬瓜根皮，臣藥梔子、黃連、黃柏，佐藥姜黃、醋延胡索、酒續斷進行定性鑒別，結果酒續斷、水冬瓜根皮供試品溶液分離度欠佳，陰性樣品中某些成分存在干擾。黃柏薄層色譜圖上相應的位置上雖陰性無干擾，但重現性差。最終建立了文中黃連、姜黃、醋延胡索、梔子4味藥材的薄層鑒別方法，符合對產品質量有效控制的要求。

3.1 供試品溶液制備方法考察 查閱并分析現行版《中國藥典》一部，黃連、姜黃、梔子3味藥材供試品溶液所用提取溶劑分別是甲醇、無水乙醇、50%甲醇，與水冬瓜傷科止痛酊所用浸提溶劑60%乙醇極性相差不大，是因為甲醇和乙醇兩者結構相似、分子組成僅相差一個亞甲基（-CH2），都是極性較強的有機溶劑，因此制劑中黃連、姜黃、梔子3味藥材的供試品溶液制備未做特殊處理，直接取制劑1 mL自然揮干至0.5 mL即可。

3.2 展開劑的選擇 延胡索的展開劑參照《中國藥典》2020年版一部延胡索［9］145-146定性鑒別項下的種類與極性，調整原為甲苯-丙酮（9∶2），現將甲苯-丙酮改為（15∶1），結果色譜分離好，Rf值適中。梔子的展開系統預實驗以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）為展開劑［9］259，結果供試品溶液色譜斑點模糊不清，不易于鑒別。后參照楊立國等［10］對梔子藥材的薄層鑒別方法研究項下的展開條件，結果色譜斑點數清晰，分離度良好。最終確定梔子的展開劑為氯仿-甲醇-冰醋酸-水（5∶2∶0.5∶0.5），預飽和15 min。

3.3 TLC耐用性考察 本實驗分別考察了不同溫度（4 ℃、25 ℃、35 ℃）、不同濕度（18%、58%、88%）對TLC結果的影響，結果供試品在不同溫度、不同濕度條件下的色譜行為基本一致，說明文中所用定性鑒別方法耐用性均較好。

參考文獻

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（收稿日期：2022-06-02 編輯：劉 斌）