超聲輔助雙水相提取絞股藍皂苷工藝及其降糖活性分析

周 飆，胡 斌，柳 鑫，周 蕾

（武漢市第四醫院，藥劑科，湖北武漢 430034）

絞股藍，又名五葉參、七葉膽等，來源于葫蘆科絞股藍屬（Gynostemma）絞股藍[Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino]，具有清熱解毒、補氣生津之功效，有“南方人參”、“不老長壽藥草”的美譽[1-2]。絞股藍可全草入藥，含有豐富的多糖、黃酮、皂苷、氨基酸類成分，其中皂苷類成分是絞股藍的主要活性成分[3-4]。絞股藍皂苷含有人參皂苷Rb1、Rb3、Rd、絞股藍皂苷A 等200 多種成分，含量遠高于人參，具有降糖[5]、降脂[6]、改善脂肪肝[7]等作用。因此，絞股藍常被開發為茶飲、絞股藍總甙片、絞股藍飲料、絞股藍口服液等，具有良好的醫藥和市場價值。絞股藍皂苷的提取常采用水提法、酶法、超聲波法等，但活性成分含量較低，后期純化工藝復雜，其相關提取技術有待進一步改善[8]。

雙水相體系（Aqueous Two-phase System，ATPS）由兩相互不相溶的溶劑組成，利用組分在雙水相體系內的分配系數差異進行高效快速提取與純化[9]。雙水相體系提取條件溫和，可保留分子的生物活性，常用于酶、多肽、核酸、多糖等大分子的提取分離[10]。相較于傳統的提取方法，雙水相提取法具有分相快、條件溫和、操作方便快捷等優點，是一項效率高、應用前景廣闊的提取技術[11]。因此，雙水相體系也常用于中藥活性成分的提取與純化，如桃花總黃酮[12]、陳皮黃酮[13]、甘草三萜皂苷[14]等。研究結果表明，雙水相體系可快速高效地提取中藥活性成分，避免了繁雜的純化過程，且活性成分含量高、生物活性強[15]。

植物細胞壁常含有豐富的纖維素、木質素、果膠等，質地堅固，延展性強，溶脹破壁效率低[16]。超聲作為一項高效的細胞破壁技術，有利于活性成分快速釋放與溶解[17]。將超聲與雙水相提取技術聯用提取絞股藍皂苷，將有利于改善絞股藍皂苷的提取純化工藝及生物活性，更充分挖掘絞股藍資源。因此，本實驗擬通過超聲輔助雙水相提取絞股藍皂苷，采用響應面法獲得最佳提取工藝，并分析活性成分含量、降糖活性，為絞股藍皂苷資源的開發與利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

絞股藍 葫蘆科絞股藍屬（Gynostemma）絞股藍[Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino]全草，原產地四川（批號202011011），留樣保存于武漢市第四醫院藥劑科，天濟中藥材飲片有限公司；硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鉀、香草醛、冰乙酸、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XLIX、絞股藍皂苷XVII（以上均為分析純）、甲醇（色譜純）美國Sigmaaldrich 公司；α-葡萄糖苷酶（100 U/mg）、阿卡波糖、對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）分析純，上海源葉生物科技有限公司；高氯酸、無水乙醇 分析純，北京市通廣精細化工公司；磷酸緩沖鹽水溶液（pH7.3）、蒸餾水 自制。

Varioskan LUX 多功能酶標儀、Agilent 1260-6460 高效液相色譜質譜聯用儀 美國Thermo Fisher Scientific 公司；TGL-16M 臺式高速冷凍離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；多功能粉碎機 皇代電器有限公司；KQ5200DE 型數控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；BKQ-B5011 高壓滅菌鍋 濟南來寶醫療器械有限公司；XPR105DR/AC 萬分之一電子精密天平、XPR226DRQ 十萬分之一電子精密天平 瑞士Mettler Toledo 公司；FD-1D-50 真空冷凍干燥機 上海達洛科學儀器有限公司；Gen Pure 超純水系統 德國TKA 公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 雙水相溶劑的制備 稱取適量的鹽（硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉），置于錐形瓶中，隨后加水溶解，分別加入30%（w/w）乙醇，獲得雙水相體系，備用，如表1。

表1 不同組分雙水相體系的制備Table 1 Preparation of ATPSs with different components

1.2.2 絞股藍皂苷的提取 絞股藍藥材粉碎后，過80 目篩，備用。精確稱取絞股藍粉末M1（g），置于錐形瓶，加入上述不同的雙水相體系中，搖勻，超聲提取。以超聲功率300 W、液料比30:1（mL/g）、超聲時間50 min、提取溫度50 ℃作為提取條件，70%乙醇提取溶劑作為對照。過濾雙水相體系，靜置分層，取少許上、下相溶液，4 ℃冷藏，備用，用于絞股藍皂苷分配系數測定。取剩余的上相溶液，凍干，制備絞股藍皂苷提取物，并稱重，記錄重量M2（g）。精確稱取絞股藍皂苷，置入容量瓶中，加70%乙醇超聲溶解，定容，搖勻，制成1.0 mg/mL 樣品溶液，4 ℃冷藏，備用，用于絞股藍皂苷含量與得率測定。

1.2.3 雙水相溶劑的選擇 分別考察不同雙水相溶劑對絞股藍皂苷含量（%）、得率（%）、分配系數的影響，以絞股藍皂苷得率為指標，選擇雙水相溶劑。

1.2.4 單因素實驗 以20%乙醇（w/w）、30%硫酸銨（w/w）分別作為有機溶劑、無機鹽，液料比30:1 mL/g、超聲時間50 min、提取溫度50 ℃作為初始提取條件，并依據1.2.2 所述提取方法進行實驗。按照乙醇、硫酸銨質量分數（w/w）分別為10%、20%、30%、40%、50%，液料比分別為10:1、15:1、20:1、25:1、30:1 mL/g，超聲時間分別為30、40、50、60、70 min，提取溫度分別為30、40、50、60、70 ℃進行單因素實驗，考察乙醇質量分數、硫酸銨質量分數、液料比、超聲時間、提取溫度對絞股藍皂苷得率的影響。

1.2.5 響應面優化試驗 以單因素實驗結果為基礎，選取液料比、超聲時間、提取溫度作為自變量，絞股藍皂苷得率（y1）為響應值，利用Box-Behnken Design（BBD）設計三因素三水平的響應面優化試驗，如表2。

表2 響應面試驗因素水平設計Table 2 Factors and levels of response surface methodology

響應面二次回歸模型方程如下：

式中：β0為回歸截距，βj、βjj、βij分別為回歸系數，ei為正態隨機誤差。

1.2.6 絞股藍皂苷的分配系數、含量與得率測定

1.2.6.1 標準曲線繪制 精密稱量人參皂苷Rb1標準品，置于容量瓶中，加80%乙醇超聲溶解后，定容，搖勻，配制成0.1～1.0 mg/mL 人參皂苷Rb1標準品溶液，4 ℃冷藏備用。參照Milad 等[18]報道的測定方法，以人參皂苷Rb1濃度（C，mg/mL）、吸光度（y2）分別為橫、縱坐標，繪制皂苷含量測定的標準曲線方程：y2=3.4264C+0.1547（R2=0.9962）。在0.1～1.0 mg/mL濃度范圍內，人參皂苷Rb1濃度與吸光度呈現良好的線性關系。

1.2.6.2 絞股藍皂苷的分配系數測定 參照1.2.6.1項下方法，取1.2.2 項下的上、下相溶液測定吸光度，根據標準曲線方程y2，計算雙水相溶劑上、下相皂苷的濃度，獲得絞股藍皂苷分配系數y3：

式中：C上、C下為上、下相絞股藍皂苷的濃度，mg/mL。

1.2.6.3 絞股藍皂苷的含量與得率測定 參照1.2.6.1項下方法，取1.2.2 項下樣品溶液測定吸光度，根據標準曲線方程y2，計算樣品溶液中皂苷濃度，獲得絞股藍皂苷含量y4和得率y5：

式中：C樣為樣品溶液濃度，1.0 mg/mL；M1、M2分別為絞股藍粉末、上相絞股藍提取物質量，g。

1.2.7 人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、XLIX、XVII的含量與得率測定 配制人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、XLIX、XVII 標準品溶液，利用HPLC 對絞股藍皂苷提取物進行含量測定，以峰面積、濃度（mg/mL）為變量繪制標準曲線。同1.2.2 項下制備最佳工藝條件下絞股藍皂苷提取物（ATPS7 組）、絞股藍乙醇提取物（M7 組），并配制樣品溶液。按照下述HPLC 條件測定絞股藍皂苷各成分濃度，并依據式（3～4）計算人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XLIX、絞股藍皂苷XVII 的含量與得率[19]。

絞股藍皂苷成分測定的HPLC 色譜條件：Kromasil 100-5 C18色譜柱（5 μm，150×4.6 mm）；流動相為甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；洗脫模式：0～5 min（甲醇：10%→20%），5～40 min（甲醇：20%→40%）；流速0.5 mL/min；柱溫30 ℃；波長203 nm；進樣量10 μL。

1.2.8 分子對接 運用Autodock vina 將人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XLIX、絞股藍皂苷XVII 對接α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase，PDB ID：6FZY），驗證絞股藍皂苷降糖的藥效物質基礎，并選取與α-葡萄糖苷酶結合能最優的構象分析做圖。

1.2.9 降糖活性測定 精密稱取1.2.7 項下絞股藍皂苷提取物（ATPS7 組）、絞股藍乙醇提取物（M7組），制備成不同濃度的樣品溶液，以阿卡波糖為陽性藥物，濃度范圍為10～120 μg/mL。以PNPG 為底物，反應體系參照He 等[20]報道的方法，并在405 nm波長處，測定各孔的吸光度，計算α-葡萄糖苷酶活性的抑制率I，如式（5）：

式中：Ab、Ac、Ay分別為不加酶體系、不加樣品體系、樣品體系的吸光度。

1.3 數據處理

2 結果與分析

2.1 雙水相體系的選擇

絞股藍皂苷由皂苷苷元與糖基組成，極性較大，可溶于水、甲醇、乙醇等。雙水相體系通過乙醇和鹽對水分子的激烈競爭，形成上、下相?；诓煌愋偷臒o機鹽形成的雙水相體系具有各異的物理化學特性，通過疏水鍵、氫鍵、離子鍵、生物親和作用等相互作用，可選擇性提取皂苷，如茶皂素[21]、人參皂苷[22]、薯蕷皂苷[23]等。如圖1 所示，不同類型ATPS 對絞股藍皂苷的得率均高于70%乙醇。乙醇-硫酸銨體系絞股藍皂苷的得率最高為7.3%，皂苷含量為58.1%；乙醇-碳酸鈉體系的絞股藍皂苷得率最低為6.02%，皂苷含量為55.5%?？赡茉蚴?，碳酸鈉分子溶解度較低，皂苷分子與離子間作用力相對較弱，導致提取效率降低；同時，下相的極性變小，適合皂苷分子分配至下相，從而使得皂苷得率降低[21]。分配系數測定結果表明，絞股藍皂苷在乙醇-硫酸銨體系的分配系數為10.4，高于乙醇-碳酸鈉體系的分配系數5.9。故選擇乙醇-硫酸銨體系作為提取絞股藍皂苷的溶劑體系。

圖1 不同雙水相體系的絞股藍皂苷得率、含量及分配系數Fig.1 Yield,content and partition coefficient of gypenosides by using different ATPSs

2.2 單因素實驗結果

2.2.1 乙醇質量分數的選擇 乙醇是乙醇-硫酸銨雙水相體系重要的組成成分，與水可無限互溶，但含有憎水基團和親水基團，可影響雙水相體系分相能力、目標成分的得率[10]。如圖2 所示，隨著乙醇質量分數增加，乙醇-硫酸銨體系對絞股藍皂苷得率呈先增加后降低的趨勢，皂苷最高得率為7.37%?？赡茉蚴?，當硫酸銨質量分數為30%（w/w）時，乙醇質量分數為10%（w/w），乙醇憎水基團與銨離子、硫酸根、水分子等產生的排斥力無法平衡親水基團與水分子的親和力，從而無法分相[22]。隨著乙醇質量分數增加至20%，上相親水能力增強，使得溶劑體系分相。同時，上相極性增加有利于絞股藍皂苷的溶出，并富集于上相。當乙醇質量分數高于30%時，乙醇質量分數過大，增加了上相的脂溶性，降低了絞股藍皂苷的溶出而得率降低[24]。故選擇乙醇質量分數為30%。

圖2 乙醇質量分數對絞股藍皂苷得率的影響Fig.2 Effects of ethanol mass fraction on the yield of gypenosides

2.2.2 硫酸銨質量分數的選擇 硫酸銨易溶于水，以離子形式存在于體系，是乙醇-硫酸銨雙水相體系下相的重要組成部分[14]。如圖3 所示，隨著硫酸銨質量分數增加，乙醇-硫酸銨體系對絞股藍皂苷得率呈先降低后基本不變的趨勢，皂苷最高得率為7.48%?？赡茉蚴?，當下相鹽離子質量分數為10%時，水分子對銨離子、硫酸根離子、乙醇親水基團具有很強的親和力，銨離子、硫酸根離子與乙醇間的排斥力較弱從而無法分相[14]。隨著硫酸銨的量逐漸增加，下相鹽離子的親水力增強，促使體系分相；同時，使下相獲得更多水分子而極性和體積增加[23]。因此，絞股藍皂苷在下相富集增加。上相的體積減小，脂溶性增強，絞股藍皂苷得率降低。當鹽離子濃度過高達到40%時，下相無機鹽飽和析出，無法增加下相離子濃度和極性[25]。故選擇硫酸銨質量分數為20%。

圖3 硫酸銨質量分數對絞股藍皂苷得率的影響Fig.3 Effects of (NH4)2SO4 mass fraction on the yield of gypenosides

2.2.3 液料比的選擇 在中藥提取過程中，溶劑的提取能力是有限的，可直接影響活性成分的得率[15]。如圖4 所示，隨著液料比增加，乙醇-硫酸銨雙水相體系對絞股藍皂苷得率呈現先快速增加后逐漸降低的趨勢，皂苷最高得率為7.74%?？赡茉蚴?，絞股藍細胞壁由纖維素、木質素、果膠等構成，具有堅固性和延展性[16]。當液料比低于25:1 時，溶劑相對較少，提取能力有限，而原料偏多，細胞組織無法充分溶脹。隨著液料比增加，溶劑充分滲透至粉末和細胞組織內，滲透壓增加使細胞壁破裂，有利于皂苷溶出和富集從而得率提升。當液料比超過25:1（mL/g）時，溶劑過多會阻礙超聲破壁效率，并促使多糖、蛋白質、氨基酸等溶出，使得絞股藍皂苷得率和含量降低。溶劑過多，亦無法充分挖掘其提取能力，易造成資源浪費[26]。故選擇液料比為25:1（mL/g）。

圖4 液料比對絞股藍皂苷得率的影響Fig.4 Effect of liquid-solid ratio on the yield of gypenosides

2.2.4 超聲時間的選擇 達瑪烷型皂苷是絞股藍重要的活性成分，具有良好的降糖[5]、降脂[6]、改善脂肪肝[7]等作用，但其結構不穩定[27]。超聲是一項高效的細胞破壁技術，將其與雙水相提取技術有機結合，被廣泛用于中藥成分的提取。如圖5 所示，隨著超聲時間增加，雙水相體系對絞股藍皂苷得率呈現先大幅增加后緩慢降低的趨勢，皂苷最高得率為7.53%?？赡茉蚴?，絞股藍細胞壁堅固又極具延展性，阻礙了細胞組織內成分的溶出。當時間低于50 min 時，超聲破壁效率低，延長超聲時間有利于絞股藍皂苷的溶出。當時間超過50 min 時，超聲消耗了大量的能量，亦降解了部分不穩定的達瑪烷型皂苷，從而使絞股藍皂苷得率降低[17]。故選擇超聲時間為50 min。

圖5 超聲時間對絞股藍皂苷得率的影響Fig.5 Effect of ultrasonic time on the yield of gypenosides

2.2.5 提取溫度的選擇 提高提取溫度是促進分子運動，提升中藥成分得率的重要手段。然而，達瑪烷型皂苷結構不穩定，易降解，對溫度較敏感[8,27]。如圖6 所示，隨著提取溫度增加，雙水相體系對絞股藍皂苷得率呈現先緩慢增加后快速下降的趨勢，皂苷最高得率為7.61%?？赡茉蚴?，當溫度低于50 ℃時，升高溫度可加快皂苷分子的熱運動，有利于其充分溶出和擴散，因此絞股藍皂苷得率上升。當溫度超過50 ℃時，溫度偏高，加快了部分絞股藍皂苷降解。同時，高溫易使雙水相體系上相乙醇揮發，降低了上相溶劑的體積和提取能力，從而絞股藍皂苷得率快速下降[28]。故選擇提取溫度為50 ℃。

圖6 提取溫度對絞股藍皂苷得率的影響Fig.6 Effect of extraction temperature on the yield of gypenosides

2.3 響應面試驗優化工藝及結果分析

表3 為響應面試驗設計及絞股藍皂苷得率結果，利用Design-expert 12 軟件擬合，獲得絞股藍皂苷得率y1（%）與液料比（A）、超聲時間（B）、提取溫度（C）三因素的多項式回歸方程：

表3 試驗設計及絞股藍皂苷得率Table 3 Experimental design and the yield of gypenosides

式中A、B、C、AC、A2、B2、C2對絞股藍皂苷的影響顯著（P<0.05），AB、BC 的影響不顯著（P>0.05）。如表4 所示，模型P值<0.05、失擬項P失擬項>0.05、F失擬項>0.5，表明雙水相提取絞股藍皂苷的得率模型擬合度較高；模型決定系數R2=0.9796，RAdj2=0.9534，表明該模型與絞股藍皂苷得率的相關度較好，可用于預測分析；三因素的F值順序為FC>FB>FA，其對模型的影響次序為提取溫度>超聲時間>液料比。

表4 方差分析結果Table 4 Results of variance analysis

響應面曲面圖的坡度陡峭程度和等高線的密集程度，可反應自變量之間的相互作用。響應面坡度越陡峭、等高線越密集，表示兩因素相互影響較顯著，反之影響較小。在交互作用研究中，各因素之間相互作用如圖7 所示。影響絞股藍皂苷得率的各交互作用因素順序為AC>BC>AB。

圖7 液料比、超聲時間、提取溫度對絞股藍皂苷得率的響應面分析圖Fig.7 Response surface analysis of liquid-solid ratio,ultrasonic time and extraction temperature on the yield of gypenosides

利用Design-expert 12 軟件擬合，最佳提取工藝為液料比27.75:1 mL/g、超聲時間51.39 min、提取溫度51.76 ℃，絞股藍皂苷得率為8.04%?？紤]實驗的可操作性，最佳工藝條件調整為：液料比28:1 mL/g、超聲時間52 min、提取溫度52 ℃。在上述最佳工藝下條件下，ATPS7 組乙醇-硫酸銨雙水相體系提取絞股藍皂苷得率為7.91%，近似于模型預測值8.04%，誤差為0.13%，遠高于M7 組70%乙醇提取絞股藍皂苷得率5.38%。表明該模型適用于絞股藍皂苷的提取，乙醇-硫酸銨雙水相體系是高效提取絞股藍皂苷的溶劑。

2.4 絞股藍皂苷成分含量測定

絞股藍主要的活性成分是絞股藍皂苷，具有良好的降糖[5]、降脂[6]、改善脂肪肝[7]等作用。絞股藍皂苷結構主要為達瑪烷型四環三萜類型，可分為人參皂苷和絞股藍皂苷兩類。人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XLIX、絞股藍皂苷XVII 是絞股藍皂苷的主要活性成分[27]。絞股藍皂苷HPLC 圖譜如圖8，雙水相提取絞股藍皂苷各成分的標準曲線、得率、含量如表5～表6 所示。乙醇-硫酸銨雙水相提取的絞股藍皂苷中絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 得率分別為0.83%、0.09%、1.42%、4.04%，含量分別為6.54%、0.71%、11.18%、31.87%，均高于70%乙醇提取的絞股藍皂苷各成分得率和含量。從活性成分得率和含量，進一步證實了乙醇-硫酸銨雙水相提取絞股藍皂苷的技術優勢?？赡茉蚴?，乙醇-硫酸銨雙水相體系中，靜電作用、疏水作用、生物親和作用等更有利于絞股藍皂苷成分溶出；并通過上下相的極性差異進行分配，富集于上相，故達到高效提取絞股藍皂苷的效果[29-30]。

圖8 絞股藍皂苷雙水相提取物（A）、乙醇提取物（B）、標品（C）色譜圖Fig.8 HPLC chromatogram of the aqueous two-phase extract(A),the ethanol extract (B) and standard substance (C)of gypenosides

表5 絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 標準曲線方程Table 5 Standard curve equation for determination of gypenoside XLIX,ginsenoside Rb3,gypenoside A and gypenoside XVII

表6 絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 得率與含量Table 6 The yield and content of gypenoside XLIX,ginsenoside Rb3,gypenoside A and gypenoside XVII

2.5 分子對接技術篩選α-葡萄糖苷酶活性的絞股藍皂苷

通過抑制ɑ-葡萄糖苷酶的活性可以降低餐后血糖值，有助于降低糖尿病的發病率[20]。在分子研究中，分子對接技術常用于篩選生物活性化合物，發揮著重要作用。分子對接結果顯示如圖9，絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 與α-葡萄糖苷酶具有良好的結合能力，其結合能分別為-9.4、-7.7、-7.7、-7.7 kcal/mol。結果表明，絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 作為絞股藍的主要活性成分，具有良好的體外降血糖潛力。

圖9 人參皂苷XLIX（A）、絞股藍皂苷Rb3（B）、絞股藍皂苷A（C）、絞股藍皂苷XVII（D）與α-葡萄糖苷酶分子對接結果Fig.9 Results of molecular docking between ginsenoside XLIX(A),gypenoside Rb3 (B),gypenoside A (C),gypenoside XVII(D) and α-glucosidase

2.6 絞股藍皂苷降糖活性測定

如圖10 所示，ATPS7 組絞股藍皂苷抑制α-葡萄糖苷酶半數抑制濃度（IC50）為20.2 μg/mL，優于M7 組IC50值39.1 μg/mL、對照組阿卡波糖IC50值31.3 μg/mL。結果表明絞股藍皂苷具有良好的降糖活性，乙醇-硫酸銨雙水相體系提取的絞股藍皂苷降糖活性更強，可能與其皂苷含量較高有關。從降糖活性角度出發，進一步表明乙醇-硫酸銨雙水相體系是提取絞股藍皂苷的良好溶劑體系，可選擇性提取活性成分，保留生物活性。

圖10 絞股藍皂苷雙水相提取物、乙醇提取物對ɑ-葡萄糖苷酶活性的抑制率Fig.10 Inhibition rate of the aqueous two-phase extract,the ethanol extract from gypenosides on ɑ-glucosidase activity

3 結論

皂苷類成分是絞股藍的主要活性成分，具有降糖、降脂、改善脂肪肝和肥胖等作用。雙水相體系作為新型提取技術，提取效率高，避免了反復低效的萃取過程，且條件溫和，可保留活性分子的生物活性。本實驗制備了分別含硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉等6 種不同的雙水相體系用于提取絞股藍皂苷，以絞股藍皂苷得率為響應值，篩選了乙醇-硫酸銨雙水相體系為最佳提取溶劑，并優化了乙醇、硫酸銨質量分數。通過單因素實驗和BBD 響應面法，考察了液料比、超聲時間、提取溫度。結果顯示，在最佳提取工藝（28:1 mL/g、超聲時間52 min、提取溫度52 ℃）條件下，絞股藍皂苷得率為7.91%，接近模擬值8.04%。在最佳工藝條件下，主成分絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 得率分別為0.83%、0.09%、1.42%、4.04%，優于乙醇提取的絞股藍皂苷。分子對接結果表明，絞股藍皂苷XLIX、人參皂苷Rb3、絞股藍皂苷A、絞股藍皂苷XVII 可與α-葡萄糖苷酶有效的結合，結合能分別為-9.4、-7.7、-7.7、-7.7 kcal/mol，具有良好的降糖潛力。雙水相提取的絞股藍皂苷抑制α-葡萄糖苷酶活性IC50為20.2 μg/mL，優于乙醇提取的絞股藍皂苷。通過α-葡萄糖苷酶活性抑制實驗，進一步驗證了雙水相提取保留生物活性優勢。結果表明雙水相提取的絞股藍皂苷得率、含量、活性均優于傳統的乙醇提取方法。因此，乙醇-硫酸銨雙水相體系對絞股藍皂苷具有良好的提取能力，為絞股藍皂苷資源的開發與利用提供科學依據。