DNA 檢測技術分析血跡陳舊度的初探*

李海霞 彭 穎 李晨華 李學剛

（廣東警官學院刑事技術系，廣東 廣州 510440）

利用DNA 分析技術檢測陳舊血跡的DNA，通過DNA 的數量和質量分析，了解血跡DNA 的降解過程，目前研究主要集中于不同載體對DNA 降解的影響及存儲DNA 的狀態效果［1-2］。其中，A.L. Rahikainen 等利用存儲16 年的FTA 血卡研究DNA 的質量變化，評估依賴于時間的降解情況，從1998 年到2013 年的8 個時間點隨機采集了4 個FTA 樣本，采用Quantifiler?Human Plus (HP)定量試劑盒測定提取DNA 樣品的數量和質量，證明FTA 卡存儲效果較明顯，DNA 較為穩定。然而國內外關于利用DNA 檢測技術判斷血跡陳舊度的研究較為鮮見。

本研究通過直擴法、Chelex-100 提取法、磁珠提取法等DNA 檢測方法對陳舊血跡進行DNA 質與量檢測，比較分析各自圖譜的均衡性，峰值、峰面積的差異性等，得出利用DNA 檢測技術對血跡陳舊度的初步探索。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2009 ～ 2018 年每年度各2 份血濾紙檢材，共20 份血濾紙檢材，均為本鑒定中心日常檢案的檢材。

1.2 方法

根據《法庭科學DNA實驗室檢驗規范》（GA/T383-2014）標準，通過直擴法、Chelex-100 提取法、磁珠提取法等3 種不同的DNA 分析方法對陳舊的血濾紙進行檢測。采用1.2mm 打孔器對20 份血濾紙檢材進行取樣，其中，直擴法取1 片血濾紙，Chelex-100 提取法與磁珠提取法取3 片血濾紙，同時，加入10%的Chelex-100懸液為30μL，磁珠提取法的洗脫液亦為30μL，其余步驟按照試劑說明書進行規范操作提取DNA。采用GoldeneyeTM DNA 身份鑒定系統 20A 試劑盒（基點認知，北京，簡稱20A）進行擴增，2 種方法均為全模板擴增，即加入3.84μL 的DNA 提取液，擴增熱循環數為30 個循環，其余步驟按照商業試劑盒說明書進行操作。采用ABI-3130 遺傳分析儀進行電泳分離和基因分型。利用GeneMapper?ID V2.0 軟件進行分型結果的分析。

2 結果

因血濾紙檢材的放置年份長久，取樣面積并不多，為了確?；蚍中偷臏蚀_性，每個血濾紙檢材所得基因分型均與之前檢案的圖譜進行比較，血濾紙檢測所得圖譜（見圖1 ～圖2）。從不同年份圖中的峰高值和峰面積值可以看出，血濾紙存在降解趨勢，年份越久降解趨勢越明顯。按照265bp 作為大小片段的分界線，將各個基因座分為小片段基因座和大片段基因座，即小片段基因座包含D19S433、D5S818、D21S11、D3S1358、D13S317、D7S820、AMEL、vWA、D8S1179、TH01、D12S391 和D2S1338，大片段基因座包含D18S51、D6S1043、D16S539、CSF1PO、Penta D、TPOX、Penta E 和FGA，3 種方法的大小片段的峰高值和峰面積值（見表1 ～表3）。從表1 可以看出，無論是大片段還是小片段，直擴法的峰高值和峰面積值是最高的，其次是磁珠提取法，最低是Chelex-100 提取法。不同年份的大小片段峰高值和峰面積值的比值（見表4），從表2 可以得出，直擴法、Chelex-100提取法和磁珠提取法的峰高比值分別為3.24、4.13、3.31，同理，峰面積比值分別為2.81、3.57、2.81，直擴法和磁珠提取法的峰高和峰面積比值相當，而Chelex-100 提取法的峰高和峰面積比值差異大些。

圖1 檢材編號為1 的圖譜

圖2 檢材編號為18 的圖譜

表1 不同年份檢材直擴法的峰高和峰面積（單位：千）

表2 不同年份檢材Chelex-100 提取法的峰高和峰面積（單位：千）

表3 不同年份檢材磁珠提取法的峰高和峰面積（單位：千）

表4 不同年份的大小片段峰高值和峰面積值的比值

3 結論

直擴法、Chelex-100 提取法和磁珠提取法是目前最為常用的DNA 提取法。直擴法可以達到簡化實驗步驟，縮短檢驗時間、減少污染、節約檢材和成本的效果，但是對于雜質較多或降解較為嚴重的檢材，直擴法不一定是最佳選擇［3-4］；Chelex-100 提取法可以做到DNA 量無損失，對于污染輕、雜質少的接觸DNA 檢材用此法提取出的DNA 片段更加完整，但在實驗過程中，Chelex-100 法卻不能有效地排除DNA 混有的雜質和降解的DNA 碎片的干擾［5］；磁珠提取法可有效去除檢材中的雜質，提高DNA 的質量，并在降解和腐敗檢材上的處理略勝一籌，但在去除雜質的同時，會對DNA 存在的量造成一定的損失，對于微量檢材是不利的［6］。3 種不同的DNA 檢測方法存在各自的優缺點，根據不同條件的檢材選擇合適的DNA 檢測方法進行分析。

本研究通過3 種不同的方法分析血跡陳舊度，從圖譜可以看出，與大片段的峰高值和峰面積相比，小片段均高些，而且越久年份的血濾紙降解程度越明顯，從而說明用DNA 檢測方法去分析血跡陳舊度是可行的，圖譜結果可以明顯得出結論。

從檢測結果的均衡性、峰高比值和峰面積比值來看，直擴法對于2009 ～ 2018 年血濾紙檢材的檢測，在同等條件之下，較其他兩種方法，其檢測的峰高值和峰面積是最高的，檢測效果是最好的，長達14 年的血濾紙依然能檢測出較為完整的圖譜。假設3 片血濾紙的DNA 含量為100%，直擴法1 片血濾紙的DNA 含量為33%，而Chelex-100 提取法和磁珠提取法僅為12.8%，排除其他因素的影響，DNA 含量的不同直接影響圖譜的結果。因檢材量有限，未能做到DNA 含量精準相同，若檢材條件允許的情況下，可進一步研究。

從血濾紙的保存年份進行分析發現，普遍是年份越久的，峰高和峰面積的均值越大，比值亦越大。同時，亦發現2011 年和2012 年度的血濾紙檢材與這個結論不符，無論哪種DNA檢測方法，這4 個檢材的峰高和峰面積的比值均變化較大，是檢測保存條件的問題還是提供血液的個體差異問題，原因仍需進一步探討。