不同品種大黃降尿酸、抗炎和瀉下作用比較研究*

王紅娟，呂小旭，鄒家棟，王 芳，張旭東

1 甘肅醫學院，甘肅 平涼 744000； 2 平涼市婦幼保健院，甘肅 平涼 744000；3 平涼旭陽科技有限責任公司，甘肅 平涼 744000

大黃為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatumL.）、唐古特大黃（Rheum tanguticumMaxim.ex Balf.）及藥用大黃（Rheum officinaleBaill.）的干燥根及根莖［1］。掌葉大黃主產于甘肅、青海等地，多為栽培，產量占大黃的大部分；唐古特大黃主產于青海、甘肅等地，野生或栽培；藥用大黃主產于四川、貴州等地，栽培或野生，產量較少［2］。大黃具有活血涼血，瀉下攻積，清熱瀉火，活血化瘀及止血的功效［3］。近年來，對大黃藥理作用的研究主要集中在抗炎、瀉下和解熱等方面［4-8］，也有將大黃作為臨床治療痛風性腎病常用藥物的研究［9］。本研究對不同品種大黃降尿酸、抗炎和瀉下作用進行了探討，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物270 只Wistar 大鼠，雌雄各半，體質量180～220 g，由中國農業科學院蘭州獸醫研究所動物實驗中心提供，動物生產許可證號：（甘）2015-0001。喂養于甘肅醫學院機能實驗室動物房，給予正常飼料喂養，自由飲水，適應性喂養1周。

1.2 藥物及試劑掌葉大黃為栽培品，由平涼旭陽科技有限責任公司提供；唐古特大黃為野生品，采自六盤山地區；藥用大黃購買于安徽省萬生中藥飲片有限公司。3 種大黃經甘肅醫學院程亞青教授鑒定為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃及藥用大黃的干燥根及根莖。氧嗪酸鉀（武漢遠成共創科技有限公司，批號：O0164）；次黃嘌呤（武漢遠成共創科技有限公司，批號：O0174）；苯溴馬?。ǖ聡章笏帍S，批號：1681550）；尿酸測定試劑盒（上海復星長征醫學科學有限公司，批號：D18010231）；醋酸地塞米松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：160332）；角叉菜膠（Ruibio公司，批號：FV17049M）；復方地芬諾酯（新鄉市常樂制藥有限公司，批號：17110251）；通便靈膠囊（貴州百靈企業集團正鑫藥業有限公司，批號：20161102）；印度墨水（福州飛凈生物科技有限公司，批號：180320）；超微量Na+-K+-ATP 酶檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：A070-2）；總蛋白測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：A045-2）。

1.3 實驗儀器CS系列全自動生化分析儀（長春迪瑞醫療科技股份有限公司）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；GJ8301-A型12號大鼠直形灌胃針（浙江省寧?？h電子醫藥儀器廠）；5 mL一次性使用GJ8301-A型人體靜脈血樣采集容器（瀏陽市三力醫用科技發展有限公司）；H-1650R型臺式高速冷凍離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；TDL-40B 型臺式離心機（上海安亭科學儀器廠制造）；SP-756P 型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司制造）；HH-6 型數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；PV200 型足趾腫脹儀（成都泰盟軟件公司）。

1.4 方法

1.4.1 藥物配置與分組 3 個品種大黃分別用蒸餾水煎煮2 次，合并煎煮液，濃縮成1 g/mL 溶液。共分為藥用大黃、掌葉大黃和唐古特大黃高（5 g/kg）、低劑量（1.25 g/kg）組［9］。

1.4.2 不同品種大黃降尿酸作用 將90只Wistar大鼠分為空白組、陰性對照組、陽性對照組，每組10 只，除空白組外其余各組大鼠灌胃次黃嘌呤1 g/kg，同時皮下注射氧嗪酸鉀250 mg/kg，建立大鼠急性高尿酸血癥模型［10-11］。造模1 h后，稱重并按“1.4.1”項下不同劑量灌胃，陰性對照組灌胃等體積生理鹽水，陽性對照組灌胃苯溴馬隆0.01 g/kg，給藥2 h后，各組大鼠斷頭采血，測定血尿酸含量。

1.4.3 不同品種大黃抗炎作用 將90 只Wistar大鼠分為空白組、陰性對照組、陽性對照組，每組10 只，大鼠稱重并測定正常鼠爪體積，按“1.4.1”項下不同劑量灌胃，陰性對照組灌胃等體積生理鹽水，陽性對照組灌胃醋酸地塞米松0.02 g/kg，各組灌胃30 min 后在大鼠右后腳跖（除空白組外）注射1%角叉菜膠混懸液0.1 mL/只，造模。測定30、60、120、240、360 min 后大鼠右后足容積，計算腫脹度［6］。剪下右足，稱重，按重量（g）∶體積（mL）=1∶9 的比例加入9 倍量生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿后按照考馬斯亮藍法測定大鼠足組織液中總蛋白含量［12］。

蛋白濃度=（測量OD 值-對照OD 值）/（標準OD值-空白OD值）×標準品濃度（0.536）

1.4.4 不同品種大黃瀉下作用 將90 只Wistar大鼠分為空白組、陰性對照組、陽性對照組，每組10 只，實驗當日大鼠禁食不禁水12 h，灌胃復方地芬諾酯（10 mg/kg）建立大鼠便秘模型［13］。建模1 h 后，稱重按“1.4.1”項下不同劑量灌胃，空白組和陰性對照組灌胃等體積生理鹽水，陽性對照組灌胃通便靈膠囊1 g/kg，20 min 后各組大鼠灌胃印度墨水，每只0.3 mL，并將大鼠置于籠架上，籠內鋪濾紙觀察糞便性狀。6 h 后斷頭處死大鼠，打開腹腔，取全段結腸，矢狀剖開，生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，放入液氮迅速冷凍后，研磨勻漿。按超微量Na+-K+-ATP 試劑盒操作方法，取0.1 g結腸測定Na+-K+-ATP酶［14］。

ATPase=（測 量OD 值-對 照OD 值）/（標 準OD值-空白OD值）×0.1×6×7.8

1.5 統計學方法采用SPSS 19.0軟件分析數據，計量資料以±s表示，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 尿酸變化情況與陰性對照組比較，不同品種大黃高、低劑量可降低尿酸值，差異有統計學意義（P＜0.01）。掌葉大黃高劑量組降低尿酸效果優于唐古特和藥用大黃高劑量組（P＜0.05）。掌葉大黃和藥用大黃高、低劑量相比差異有統計學意義（P＜0.05），而唐古特大黃高、低劑量比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠血尿酸含量（±s）

表1 各組大鼠血尿酸含量（±s）

注：*表示與陰性對照組比較，P＜0.01；#表示與相同品種大黃低劑量組比較，P＜0.05；△表示與相同劑量唐古特大黃組比較，P＜0.05；-表示等體積生理鹽水

尿酸（μmol/L）37.30±4.62*964.92±86.38 511.01±72.15*327.63±33.19*#△415.12±17.58*371.31±30.16*#△422.54±35.64*418.91±50.58*438.11±94.29*組別空白組陰性對照組陽性對照組掌葉大黃高劑量組掌葉大黃低劑量組藥用大黃高劑量組藥用大黃低劑量組唐古特大黃高劑量組唐古特大黃低劑量組鼠數10 10 10 10 10 10 10 10 10劑量（g/kg）- -0.01 5.00 1.25 5.00 1.25 5.00 1.25

2.2 大鼠足組織液總蛋白變化情況與陰性對照組比較，不同品種大黃高、低劑量均有抗炎作用，差異有統計學意義（P＜0.05）。唐古特大黃抗炎效果最好（P＜0.05）。同種大黃不同劑量抗炎效果比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠足組織液總蛋白含量（±s）

表2 各組大鼠足組織液總蛋白含量（±s）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與相同劑量唐古特大黃組比較，△表示P＜0.05；-表示等體積生理鹽水

總蛋白（g/L）1.31±0.20*2.68±0.26 1.59±0.33*1.88±0.23*△1.96±0.17*1.98±0.35*△2.13±0.10*1.61±0.23*1.83±0.27*組別空白組陰性對照組陽性對照組掌葉大黃高劑量組掌葉大黃低劑量組藥用大黃高劑量組藥用大黃低劑量組唐古特大黃高劑量組唐古特大黃低劑量組鼠數10 10 10 10 10 10 10 10 10給藥劑量（g/kg）- -0.02 5.00 1.25 5.00 1.25 5.00 1.25

2.3 大鼠足腫脹度變化情況注射1%角叉菜膠混懸液0.1 mL 后，在30～360 min，大鼠足趾腫脹明顯。與陰性對照組比較，唐古特大黃減輕大鼠足趾腫脹效果最好（P＜0.05），其次為掌葉大黃和藥用大黃。見表3。

表3 各組大鼠足腫脹度變化情況（±s）

表3 各組大鼠足腫脹度變化情況（±s）

注：*表示與陰性對照組比較，P＜0.01；△表示與相同劑量唐古特大黃組比較，P＜0.05；-表示等體積生理鹽水

組別鼠數劑量（g/kg）正常足容積（mL）足腫脹度（mL）120 min 0.41±0.04 0.32±0.02*0.34±0.03*0.37±0.03 0.37±0.04△0.39±0.04 0.32±0.03*0.35±0.03*240 min 0.45±0.03 0.35±0.02*0.37±0.04*0.39±0.04*0.40±0.03*0.41±0.03 0.36±0.04*0.38±0.04*陰性對照組陽性對照組掌葉大黃高劑量組掌葉大黃低劑量組藥用大黃高劑量組藥用大黃低劑量組唐古特大黃高劑量組唐古特大黃低劑量組360 min 0.49±0.04 0.38±0.03*0.41±0.04*0.42±0.04*0.44±0.04*△0.42±0.04*0.37±0.04*0.40±0.04*-0.02 5.00 1.25 5.00 1.25 5.00 1.25 10 10 10 10 10 10 10 10 1.19±0.12 1.24±0.11 1.24±0.15 1.27±0.18 1.14±0.17 1.25±0.16 1.23±0.12 1.21±0.13 30 min 0.32±0.02 0.20±0.01*0.25±0.01*0.29±0.01 0.29±0.01△0.30±0.02 0.21±0.02*0.29±0.01 60 min 0.39±0.02 0.26±0.02*0.30±0.03*0.32±0.02*0.32±0.04*0.34±0.03 0.28±0.02*0.30±0.02*

2.4 大鼠瀉下情況與陰性對照組比較，不同品種大黃灌胃后大鼠首次黑便時間縮短（P＜0.05）。其中唐古特大黃組大鼠首次黑便時間最短，高劑量組總黑便次數最多，其次為掌葉大黃和藥用大黃（P＜0.05）。掌葉大黃和唐古特大黃高、低劑量比較差異有統計學意義（P＜0.05），藥用大黃高、低劑量比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 各組大鼠6 h內首次黑便時間和總黑便次數（±s）

表4 各組大鼠6 h內首次黑便時間和總黑便次數（±s）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05；與相同品種大黃低劑量組比較，#表示P＜0.05；與相同劑量唐古特大黃組比較，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01；-表示等體積生理鹽水

6 h內總黑便次數（次）6.20±0.24*0.80±0.04 4.00±0.59*3.70±0.35*#△2.50±0.69*△2.80±0.97*△2.20±0.89*△4.70±0.78*#3.60±0.67*組別空白組陰性對照組陽性對照組掌葉大黃高劑量組掌葉大黃低劑量組藥用大黃高劑量組藥用大黃低劑量組唐古特大黃高劑量組唐古特大黃低劑量組鼠數10 10 10 10 10 10 10 10 10給藥劑量（g/kg）--1.00 5.00 1.25 5.00 1.25 5.00 1.25 6 h內首次黑便時間（min）56.44±5.27*281.23±8.55 223.84±18.17*195.13±20.15*#△222.98±17.45*△220.35±11.22*△△235.32±9.26*△△175.35±10.14*#202.21±8.76*

2.5 大鼠腸道Na+-K+-ATP酶活力與陰性對照組比較，不同品種大黃高、低劑量均有降低Na+-K+-ATP酶活力的作用，差異有統計學意義（P＜0.05）。唐古特大黃降低Na+-K+-ATP酶活力的作用強于掌葉大黃（P＜0.05）。相同品種大黃高、低劑量比較差異有統計學意義（P＜0.05）。3種大黃降低Na+-K+-ATP酶活力的作用強度依次為唐古特大黃、掌葉大黃和掌葉大黃。見表5。

表5 各組大鼠腸道Na+-K+-ATP酶活力（±s）

表5 各組大鼠腸道Na+-K+-ATP酶活力（±s）

注：與陰性對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與相同品種大黃低劑量組比較，#表示P＜0.05；與相同劑量唐古特大黃組比較，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01；-表示等體積生理鹽水

劑量（g/kg）Na+-K+-ATP酶［U/（mg·h）］5.62±0.15*6.51±0.20 3.95±0.17**4.13±0.15**#△4.98±0.17**△4.45±0.12**#△△5.02±0.24**△△3.54±0.15**#4.19±0.16**組別空白組陰性對照組陽性對照組掌葉大黃高劑量組掌葉大黃低劑量組藥用大黃高劑量組藥用大黃低劑量組唐古特大黃高劑量組唐古特大黃低劑量組鼠數10 10 10 10 10 10 10 10 10--1.00 5.00 1.25 5.00 1.25 5.00 1.25

3 討論

本研究結果顯示，大黃有降尿酸作用，其中以掌葉大黃的作用最強，而甘肅省種植大黃主要為掌葉大黃，這為大黃品質的優選提供了依據；大黃具有一定抗炎作用，但是各品種大黃高、低劑量之間無差異，可能原因是測量時間短，同時還與大黃中具有抗炎活性的指標成分不顯著有關，還需找出相關抗炎指標成分進一步分析。瀉下研究預實驗中，用地芬諾酯建立大鼠便秘模型，初次用量50 mg/kg，6 h 觀察黑便不明顯，解剖發現大鼠胃極度膨大，可能因為復方地芬諾酯劑量過大，導致胃腸長時間不能有效蠕動進行排便，因此不斷調整劑量為10 mg/kg，與文獻報道有一定差別［12］。本研究結果顯示，3 種大黃均有顯著瀉下作用，唐古特大黃效果較優。但本實驗所選樣品單一，還需對大黃不同品種質量進行比較研究。

綜上所述，大黃作為甘肅省的“道地藥材”，現主要以掌葉大黃為主，其次為唐古特大黃。本研究對不同品種大黃降尿酸、抗炎和瀉下作用進行比較研究，評價3 種大黃的治療效果，使其能夠指導臨床用藥，發揮不同品種大黃的治療優勢，促進大黃的進一步開發利用。