種豬場豬偽狂犬病凈化探索

蒙炳超 馬 萍 李照偉 何 毅 陸躍堂 柏 城 鄭敏萍

(1 黔南州養殖業發展中心，貴州都勻 558000；2 貴州省動物疫病預防控制中心，貴州貴陽 550008；3 獨山縣養殖業發展中心，貴州獨山 558200；4 貴州日泉農牧有限公司，貴州獨山 558200；5 上海農林職業技術學院，上海 201600）

豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒感染引起的一種以生殖系統、呼吸系統和神經系統出現臨床癥狀的傳染病，主要危害妊娠母豬和仔豬，造成母豬流產、產木乃伊胎、產死胎、仔豬死亡率升高等，病毒可通過母體垂直傳播，也可通過犬、貓、鼠等儲存宿主傳播，還可通過被豬偽狂犬病病毒污染的工作人員服裝、器具及空氣等進行傳播[1,2]。豬感染偽狂犬病病毒后沒有特效治療藥物，預防和控制豬偽狂犬病的有效方法是凈化豬群和疫苗免疫[3]。根據《動物疫病凈化場評估管理指南》 《動物疫病凈化場評估技術規范》的相關要求和標準[4]，應采用偽狂犬病的疫苗免疫、監測、規范飼養、生物安全管理的凈化技術，推動種豬場通過省級以上動物疫病凈化評估、實現豬偽狂犬病的免疫凈化目標。貴州日泉農牧有限公司（以下簡稱“日泉公司”）泉興種豬場開展了豬偽狂犬病免疫凈化探索。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

國產商品化豬偽狂犬病gE抗體（簡稱“gE 抗體”）ELISA 檢測試劑盒和豬偽狂犬病gB 抗體（簡稱“gB 抗體”）ELISA 檢測試劑盒。豬偽狂犬病疫苗采用勃林格殷格翰公司生產的豬偽狂犬病弱毒疫苗（Bartha-K61）。

1.2 試驗方法

1.2.1 建立保障措施

一是組織保障，成立由公司總經理擔任組長、場長為副組長、種豬場內各部門負責人、實驗室負責人為成員的疫病凈化工作實施小組；二是技術保障，邀請當地動物疫病預防控制機構專家、集團公司養豬技術事業部專家及高校老師組成疫病凈化技術指導專家，全面負責動物疫病凈化的技術指導工作；三是經費保障，將疫苗、動物疫病檢測、消毒等經費列入養豬企業的年度經費預算。

1.2.2 完善生物安全和飼養管理

按照動物疫病凈化評估要求，結合生物安全和飼養管理實際情況，邀請當地動物疫病預防控制機構、集團公司、大專院校的專家幫助不斷完善生物安全和飼養管理相關的制度、操作規程、消毒效果評估等，并督促、指導做好管理措施的落實。

1.2.3 建立gE 抗體陰性種豬群

⑴在引種前逐頭采集豬只血清檢測gE 抗體和gB 抗體，選擇gE 抗體陰性、gB 抗體陽性豬作為引種豬只，引種豬只調入種豬場專用引種隔離舍隔離21 d，再做gE 抗體和gB 抗體檢測。如果引種目標場未開展豬偽狂犬病疫苗免疫，則gB 抗體和gE 抗體均為陰性豬作為引種目標豬。通過引種建立gE 抗體陰性種豬群。

⑵逐頭采集免疫豬偽狂犬病疫苗21 d 后的后備豬血清，檢測gE 和gB 抗體，gE 抗體為陰性、gB 免疫抗體為陽性的豬只，可從后備舍轉入種豬舍。gE 抗體陽性豬只立即復檢，若復核結果仍為陽性豬只，則立即淘汰。

1.2.4 種豬群凈化維持

⑴1年內分區域、分批次對種豬群進行1 次豬偽狂犬病gE抗體全覆蓋檢測，gE 抗體檢測陰性的豬群不能與未經gE 抗體檢測的豬群交叉混養，如果檢出gE 抗體陽性豬，則對陽性豬進行淘汰處理。

⑵全群檢測階段外的豬群，以不少于無疫公式（CL＝95%、P＝3%）的采樣數量，每季度采集1 次種公豬、基礎母豬及后備豬血清樣品進行gE 抗體檢測，檢測出gE 抗體陽性豬則立即淘汰[4,5]。

⑶以不少于預估期望值公式（CL＝95%、P＝90、e＝10%），每季度采集1 次種公豬、基礎母豬、后備豬血清進行gB 抗體檢測，評估豬偽狂犬病群體免疫效果。檢測結果出現群體免疫抗體合格率＜90%時，進行全群補免，補免后再次采集血清樣品進行檢測[4]。

⑷貴州省黔南州和獨山縣動物疫病預防控制機構按照《動物疫病凈化評估技術規范》相關要求，每年對種豬場至少開展2 次監督檢驗，采樣覆蓋不同豬群，每次采樣不少于30 頭份，分別檢測gE 抗體和gB 抗體[4]。

2 凈化結果

2.1 引種

2018年日泉公司按照1年內引種的檢測方案，引進PIC 種豬8 500 頭，在隔離場對8 500 頭種豬全部進行gE 和gB 抗體檢測，檢測結果均為陰性（引種前未進行豬偽狂犬病疫苗免疫）后轉入種豬場，建立種豬場gE抗體陰性種豬群。

2.2 維持凈化

2.2.1 監測抽檢

種豬入場后，按程序開展豬偽狂犬病的疫苗免疫，并按照維持豬場偽狂犬病凈化的方法，對gE 抗體和gB抗體進行檢測。在2019年1月至2021年7月的抽檢和監督檢驗中，共檢測基礎母豬、后備豬、公豬gE 抗體7 659 份，檢測結果全為陰性；檢測gB 抗體7 121 份，gB 抗體合格率為99.9%。

2.2.2 全群檢測

2021年8月至2022年5月，分7 批完成全群種豬的gE 抗體檢測，共檢測8 427 份（含2 次監督檢驗），gE 抗體全為陰性；在開展gE 全群檢測的同時，共抽檢1 052 份豬血清樣品進行gB 抗體檢測（含2 次監督檢驗），gB 抗體合格率為97.1%。

4年來，在維持階段，企業和官方對種豬場種公豬、基礎母豬、后備豬進行豬偽狂犬病監測，共計檢測gE抗體16 086 份，檢測結果全為陰性，檢測gB 抗體8 173 份，gB 免疫抗體平均合格率為99.5%，全場無豬偽狂犬病病例發生。

2.3 形成凈化佐證資料

按照《動物疫病凈化場評估技術規范》要求，對照《規模豬場主要動物疫病凈化審查評分表》，建立或完善人員培訓、凈污道錯時使用及消毒、無害化處理、消毒管理、生產管理、防疫管理、疫病監測等相關的制度、方案、操作規程，督促做好記錄和資料的歸檔等，做到各評分項有充分的材料或實物支撐。

3 討論與分析

根據國內外動物疫病凈化探索和實踐，在規?；N豬場開展豬偽狂犬病、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等疫病的凈化，逐步形成一套我國規?；N豬場主要疫病凈化技術方案和評估標準，也建設一批主要動物疫病凈化示范場[6,7]。按照國家的動物疫病凈化評估標準及相關的動物疫病檢測技術標準，口蹄疫、豬瘟的凈化需要采集活體豬扁桃體進行病原學檢測，常規的口蹄疫、豬瘟和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征等的血清學檢測難以區分野毒感染和疫苗免疫產生的抗體[5,6]。在工作實踐中，由于活體采集豬扁桃體技術要求高，豬只易產生應激等影響種豬生產，養殖企業接受程度不高。豬偽狂犬病疫苗為gE 基因缺失苗，用商品化的gE 和gB 抗體檢測試劑盒，即可快速、便捷和低成本地區分疫苗抗體和野毒感染抗體[8]。本文綜合檢測技術、養殖企業對采樣方式的接受度、經費需求、技術要求等因素考慮，將豬偽狂犬病免疫凈化作為本文凈化探索的病種。

動物疫病凈化是一項長期的工作，為此公司高度重視，統籌做好組織保障、經費保障和技術保障工作。通過成立豬偽狂犬病凈化工作小組、做好疫病凈化經費保障、建立專家指導機制和養豬技術外部審計機制等4 方面開展工作。為了通過省級以上豬偽狂犬病凈化評估和實現豬偽狂犬病免疫凈化的目標，在實施種豬場豬偽狂犬病免疫和檢測凈化技術的基礎上，按照《動物疫病凈化示范場評估標準（試行）》，將疫病凈化檢測與綜合防控措施同步建立、同步實施，由資料組負責人員管理、衛生環保、無害化處理、消毒管理和疫病監測等相關的制度、方案、操作規程、記錄表格的制定和資料歸檔等，確保4年來動物疫病凈化資料的完整，做到各打分項有材料或實物作為支撐。黔南州和獨山縣動物疫病預防控制機構從2019年開始，將種豬場豬偽狂犬病凈化的監督檢驗列入年度動物疫病監測計劃，每年開展不少于2次的監督檢驗[9]。根據《規?；N豬場主要疫病凈化評估標準》，豬場在開展豬偽狂犬病凈化的同時，積極推動開展豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬口蹄疫等疫病的凈化探索，制定并落實凈化監測方案，按照非洲豬瘟無疫小區的管理要求，做好非洲豬瘟病毒的監測和防控[10]。

由于泉興種豬場是新建場，且引種豬只全部為豬偽狂犬病gE抗體陰性個體，因此，在凈化策略上，主要是實施免疫凈化，做好維持和證明無豬偽狂犬病病毒感染。在凈化的維持階段，每次采集不少于100 頭份血清樣品進行gE 抗體檢測，基于本文選用的幾種國產gE 和gB ELISA 抗體檢測試劑都沒有標注試劑的敏感性和特異性，抽樣方法存在誤差等，為更全面地評估和掌握豬場的豬偽狂犬病維持情況，決定分批次開展一次gE 抗體的全群采樣檢測。但是全群采樣檢測對時間、人力、財力要求較高，同行在開展無疫證明時，根據時間、人力、經費等情況，可增加抽檢頻次、調整證明無疫公式中的預期流行率等參數，或者在gE 抗體檢測的基礎上，對流產母豬、有疑似臨床癥狀豬只、種豬場內部環境、病死豬無害化處理區環境等高風險環節，引入豬偽狂犬病熒光RT-PCR、病毒分離等病原學檢測方法，增加抽樣檢測的準確性，也可較為科學地評估豬場豬偽狂犬病的流行情況[11-13]。該場在開展豬偽狂犬病凈化之初，即按照《動物疫病凈化場評估技術規范》，建立并不斷完善飼養和生物安全管理的相關制度、方案、記錄等，有完整的豬場健康巡欄、診療、無害化處理、引種、淘汰、銷售等記錄，科學的生產性能指標統計和分析方法，當地動物疫病預防控制機構嚴格做好監督檢驗等，可更全面地加以佐證豬場的凈化效果，同時也為凈化評估做好支撐。在嚴峻的非洲豬瘟防控形勢下，豬場建立了全面的生物安全管理體系，提升生物安全管理水平，2020年該種豬場通過“國家首批非洲豬瘟無疫小區”評估認證[14-17]。在完整的資料支撐和科學的檢測保障下，2023年該種豬場的豬偽狂犬病免疫凈化通過“國家級動物疫病凈化場”評估認證。因此，建議在開展動物疫病凈化工作中，應提前謀劃，重視相關資料收集和做好疫病監測。

4 結論

在4年的豬偽狂犬病凈化過程中，通過gE 抗體抽檢和全群采樣檢測，gE 抗體檢測都為陰性，抽檢gB 抗體合格率都大于90%，且在臨床觀察中，未發現豬偽狂犬病臨床病例。此外，加以完整的健康巡欄、診療、無害化處理、引種、淘汰、銷售等記錄和科學的生產數據及實驗室檢測等的佐證，較為全面反映了種豬場豬偽狂犬病的監測凈化情況，嚴格落實重大動物疫病防控措施，該種豬場于2022年通過“國家級豬偽狂犬病動物疫病凈化場”評估認證，實現豬偽狂犬病的免疫凈化目標。