淺析基層獸醫實驗室人員工作中存在的問題

李 赟 楊旭華 李鐵全 田 瑾 白利鵬

(太原市動物防疫檢疫中心，山西太原 230027）

基層獸醫實驗室在開展非洲豬瘟等動物疫病監測、流行病學調查、疫情診斷等疫病防控中起著重要作用。而實驗室動物疫病檢測工作具有專業性強，生物安全水平高的特點。人員是實驗室工作開展的基本要素，檢測工作的規范性、人員整體素質水平直接決定著檢測結果的準確性?；鶎訉嶒炇胰藛T學歷普遍不高，很多非專業院校畢業，水平不扎實、試驗中操作不嚴謹、無消毒滅菌及自我保護意識，給實驗室檢測數據的輸出及生物安全帶來極大隱患[1]。因此，加強實驗室人員管理，建立標準化試驗流程，增加人員培訓是提高實驗室檢測結果準確、減少安全事件發生、保障實驗室工作順利開展的基礎。

1 存在的問題

1.1 樣品試劑接收隨意，保存方式不規范

大多基層實驗室就收樣環節無明確規程。首先未設置接樣崗位，無固定接樣人員[2,3]；樣品接收時不了解該樣品用于檢測的項目，采集的樣品是否符合文件或檢測要求；采樣單是否填寫完善，尤其是免疫背景，采樣數量，采樣人員聯系方式不核對。其次不檢查樣品；不核實樣品實際數量與采樣單是否一致，樣品編碼是否準確且具有唯一性；不檢查樣品是否存在管破裂、溢灑、污染、霉變及是否溶血或采樣量是否滿足需求等問題。第三點是樣品的保存不符合要求，未根據檢測項目開展時間和樣品類型分類保存；通常3 d 內開展檢測的樣品均可放置于4℃環境。血清、各類拭子、組織樣品、OP液、精液等可冷凍保存。超出3 d 檢測的，可置于冷凍環境，但全血、雞蛋等樣品不能冷凍[4]。同時要注意玻璃制品不應冷凍，防止管壁凍裂樣品溢出造成整體污染。樣品存放后不完善接樣信息；樣品保存過程中不規劃，隨意凍融也是常見現象。在試劑的驗收入庫上，主要體現在不注意試劑生產日期及有效期，保存溫度不按說明書執行。比如不同類型不同企業的抗原保存溫度不一致；核酸提取試劑盒存放溫度不一致，有的需冷藏，有的常溫即可，試劑盒中蛋白酶需拿出單獨-18℃保存等細節不注意。試劑保存溫度不當、抗原等物質失活，均導致試驗無法開展。

1.2 試驗操作僅憑經驗，細節把控不嚴謹

一是不嚴格按照試驗說明書操作，例如采用ELISA檢測方法時，試驗開始前包被板是否需要預洗；洗板時次數、每孔加液量及是否需靜置；顯色劑A 和B 的加樣方式；加樣后顯色時的環境溫度等細節均不按照規定操作，造成非特異性反應增加或試驗無果。稀釋樣品時，忽略混勻步驟或次數隨機，造成樣品稀釋倍數不準。二是移液器槍頭不及時更換，吸取同一液體時，基于不同人員手法熟練程度不同，當無法做到懸空加樣，碰觸到已添加樣品孔時，未立刻更換吸頭，造成后續整排孔污染。三是加樣順序隨機，如陰陽性對照品在整個樣品添加過程中，添加順序形不成規程，建議1 個實驗室同類試驗布板及加樣順序做統一規定。四是PCR 核酸檢測時，混樣數量不結合檢測樣品背景及檢測目的變化，而是固定不變，造成混樣基數過多，弱陽性檢不出，或基數較少試劑產生浪費。五是肉眼判定結果無第二人復核，如虎紅平板凝集試驗，試管凝集試驗和血凝（抑制）等試驗，主觀隨意性大，不同人判定易造成不同結果。同時還有人為操作隨意的習慣影響檢測準確性。如孵育包被板時多板疊摞，溫度感受不均；洗板后拍板不徹底，或力氣過大造成包被板液體殘留或整排脫落，樣品位置混淆。

1.3 忽視試驗環境溫濕度，時間意識差

環境溫濕度對試驗結果的影響很大[5]，例如做血凝（抑制）試驗，若不人為控制溫度，冬天和夏天凝集反應時間差異大，抗原抗體還未充分結合，就加入紅細胞，造成反應不充分；或為提高溫度直接把凝集板放于空調暖風直吹處、包被板不覆膜直接放培養箱，造成液體蒸發嚴重，總之，應在試驗期間保證整體或局部溫濕度的穩定，才能盡量減少對試驗結果的影響。同時多項目同時開展時，未做好規劃，造成洗板機、酶標儀等多板需同時使用，而儀器數量有限，導致包被板內物質因等待機器，被動反應時間加長；虎紅平板凝集試驗，一次性混合份數太多，造成判定結果時最先混合好的孔已過最佳判定時間；血凝抑制試驗一次性做數10 個板，不卡頭尾板加樣時間，造成每板反應時間把握不準，使反應不充分或反應過度；基層實驗室常規開展的試驗人工操作步驟多，溫濕度、時間不進行有效規劃把控勢必影響結果。

1.4 設備使用不按規程，維護保養不及時

人員在操作儀器設備中使用的方法不科學，在移液器等常用設備上形成暴力粗放型操作習慣。比如移液器裝配吸頭時為安裝牢固而猛烈撞擊；高量程二檔吸入液體時速度過快，液體反沖進移液器造成設備污染；試驗完畢的移液器未調至最大量程[6]。離心機離心時不配平；離心用玻璃管導致管壁破裂；離心完畢不及時消毒。洗板機使用完畢不用蒸餾水沖洗，停用時間稍長，造成板孔管堵塞。生物安全柜使用期間物品遮擋里外通風口，導致風向亂流；高效過濾器不按規定時間更換[7]。諸如此類操作均會造成設備讀數不準或頻繁故障，同時部分實驗室的儀器只使用不養護校準，設備精準度下降而不知，造成試驗結果誤差增大或錯誤。

1.5 試驗相關記錄不完善，報告不規范

很多試驗人員檢測出結果后，簡單記錄報告主管部門后完畢，不注重檢測過程的原始痕跡保存。應該從接樣后任務下達、試驗開展后設備的使用記錄、原始圖譜數據、結果匯總、試驗報告、樣品留樣記錄等應形成本實驗室一套完整的管理體系[8]，均屬人員工作的一部分，也為今后追溯提供依據。同時試驗人員出具報告不規范，報告內容無檢測依據、不填寫使用的主要儀器設備、不寫判定標準、無三級簽字、章證不完善等均是常見現象。

1.6 生物安全意識不足，自我保護意識差

實驗室人員生物安全意識直接影響自身健康和公共衛生安全[9]?；鶎訉嶒炇胰藛T在自身防護、試驗安全操作及環境消毒滅菌方面意識不足。一是表現在人員出入實驗室無屏障；試驗期間手套口罩不能全程佩戴，破損后不及時更換等。二是不規范的試驗操作造成安全隱患，如離心機使用期間管蓋密封不嚴造成樣品溢灑；應在生物安全柜內的操作而直接在試驗臺進行；生物安全柜不區分凈區、污區，操作上空間交叉造成污染，樣品液體流入排風口不易清理；使用過的試劑敞口堆砌，PCR 試驗提取或擴增板未經消毒隨意扔置，造成氣溶膠傳播[10]。三是試驗后做不到有效消毒，試驗垃圾無專業處理渠道是普遍現象。不能有效利用酒精、84 消毒液等液體消毒劑進行局部清潔，未養成儀器設備定期消毒習慣；同時PCR 實驗室不通風，不利于氣溶膠擴散；工作服及非一次性試驗耗材長久不消毒清洗。

2 應采取的措施和建議

2.1 人員工作精準定位，嚴格執行實驗室各項制度規程

根據實驗室人員數量，將接樣、出具報告、不同類試驗的開展、儀器設備的維護管理、標準查新、檔案管理等工作細化至崗位個人，保證試驗人員持證上崗。要熟練掌握負責崗位的主要內容、相關操作和該崗位的風險點，人數少的實驗室可以1 人多崗，總之專崗專人，提高試驗人員的責任心和使命感，制定考核標準，作為年底考核依據。引導試驗人員除關注試驗結果外，還要熟練掌握并執行實驗室的各項制度和規程。包括樣品接收、存放和管理、試劑耗材的使用、不同試驗操作、試驗結果的報告流程，尤其是儀器設備的使用維護、保養和校準，制定制度并嚴格執行；要細化每項試驗的標準化操作流程?？傊?，有完整的標準化操作規程并嚴格執行是試驗成功的關鍵[11,12]。

2.2 持續開展人員專業培訓，摒棄墨守成規的試驗習慣

基層人員流動性大，而獸醫實驗室檢測技術專業性強，要求人員短時間內掌握每一項試驗的原理、每一步所用試劑的目的，而不應只局限于流水線作業。一旦出現問題，應有能力分析原因，找出問題所在。當今檢測技術更新很快，為保證試驗方法的有效性和結果的準確性，應制定詳細的培訓計劃。試驗人員要不斷了解新檢測技術、掌握先進方法、完善試驗步驟、規范操作流程；掌握不同類試驗的優缺點、敏感性和特異性。在老帶新的過程中，要吸收老一輩試驗員的經驗，但對長期錯誤性操作方式或行為堅決改進。只有不斷提升實驗室全體人員的綜合能力，實驗室的檢測診斷水平才能持續提升。

2.3 提高人員生物安全意識，杜絕污染等安全事件發生

事實證明提升人員自身生物安全意識，是做好實驗室生物安全工作的基礎，大多數生物安全事故均來自人員意識不到位，應樹立實驗室工作生物安全第一的原則[13,14]。嚴格按照《實驗室生物安全通用要求》 (GB 19489-2008)與《病原微生物實驗室生物安全通用準則》（WS 233-2017)開展工作[15,16]，制定實驗室生物安全負責人負責總體工作。做好人員自身生物安全防護，實驗室試劑樣品的安全使用；同時建立實驗室環境生物安全管理章程，使生物安全的宣傳教育真正做到長效化。

3 結語

獸醫實驗室的工作包括多方面，而人作為實驗室的基本要素，對實驗室檢測診斷能力起著決定性作用。只有意識到長久以來一直存在的問題，根據各問題不斷改進，提升人員各個環節規范化的意識和檢測人員的專業技術水平，保證人員工作綜合能力穩步提升，才能保障基層獸醫實驗室在動物疫病防控中的技術支撐作用。