早產兒BPD 的危險因素及血漿BMP-7 miR-15b 25-（OH）D3 對其診斷價值分析

馬萌萌 趙學輝 楊 潔

支氣管肺發育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）是引起持續性呼吸窘迫的一種慢性肺部疾病，在早產兒中具有較高的發病率[1］。早產兒一旦發生BPD可引起黏膜上皮出現不可逆損傷，即使患兒接受足療程治療，也會嚴重影響生長發育[2］。因此，有效分析早產兒BPD 的危險因素，對降低早產兒BPD 的發生風險，并促進早產兒生長發育意義重大。既往報道，早產兒BPD 的發生可能與胎齡、吸氧時間、機械通氣時間及細胞因子水平變化等有關[3-4］。骨形成蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）是轉化生長因子超家族重要成員，其參與機體的肺損傷及損傷后組織修復過 程[5］。微 小 核 糖 核 酸-15b（Microribonucleic acid-15b，miR-15b）可參與細胞增殖分化、血管生成等調控過程，其水平變化與肺部疾病進展過程有關[6］。25 羥基維生素D3[25 hydroxyvitamin D3，25-（OH）D3］是一種促進機體生長發育的類固醇激素，其低表達可在一定程度上影響肺功能和結構[7］。但目前關于早產兒BPD的危險因素及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對其的診斷價值仍需探究?；诖?，本研究以早產兒為對象進行研究，旨在進一步探索早產兒BPD 的危險因素及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對其診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2022 年1 月至2023 年3月河北省滄州中西醫結合醫院收治的136 例早產兒的臨床資料。根據是否伴有BPD[8］，將其分為BPD 組（n=45）和非BPD 組（n=91）。納入標準：①胎齡＜32 周者；②住院時間≥28 d 者；③出生后2 d 內入院并進行生化檢查者；④臨床資料齊全者等。排除標準：①伴有染色體異常、嚴重先天畸形、先天性心臟病及遺傳代謝性疾病者；②并發氣胸、膈疝、胸腔積液、胎糞吸入綜合征者；③病情嚴重難以存活者；④重癥肺炎引起的肺實變、肺不張需長期氧依賴者等。本研究經醫院醫學研究倫理委員會批準并同意（倫理批號：CZX2022017），患兒家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 由經統一培訓的臨床資料調查員收集符合納入排除標準的患兒臨床資料，主要包括胎兒數目、分娩方式、出生體質量、胎齡、性別、機械通氣時間、吸氧時間、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內出血、有無膿毒血癥、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病等。

1.2.2 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3及血清清蛋白（albumin，ALB）、前白蛋白（prealbumin，PA）水平檢測 出生后2 d 內采集所選患兒的空腹靜脈血6 mL，取4 mL 抗凝后進行離心處理（時間15 min，離心半徑8 cm，速率3 000 r/min），取2 mL 血漿用酶聯免疫吸附試驗測定血漿BMP-7、25-（OH）D3水平，試劑盒均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。同時取2 mL 血漿用Trizol 法（試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司）提取總核糖核酸（ribonucleic acid，RNA），得到合格標本（濃度為100～500 ng/μL、吸光度值為1.8～2.0）后進行反轉錄，獲得互補脫氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA），反轉錄試劑盒購自北京智杰方遠科技有限公司。采用ABI Prizm7300 序列檢測系統（美國Applied Biosystems 公司）進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reactio，PCR）測定血漿miR-15b 水平。美國賽默飛公司提供引物設計及合成，以U6 為內參，PCR 引物序列如下：U6 正向引物為5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物為5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；miR-15b 正向引物為5'-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3'，反向引物為5'-GCGTAGCAGCACATCATGG-3'。采用2-ΔΔCt法計算miR-15b 相對濃度。另取2 mL 全血進行離心處理（時間15 min，離心半徑8 cm，速率3 000 r/min），取血清用酶聯免疫吸附試驗測定血清ALB、PA 水平，試劑盒均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.3 觀察指標 比較兩組患兒胎兒數目、分娩方式、出生體質量、胎齡、性別、機械通氣時間、吸氧時間、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內出血、有無膿毒血癥、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病 及 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3、血清ALB、PA 水平；分析早產兒發生BPD 的危險因素；評估血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對早產兒BPD 的診斷價值。

1.4 統計學方法 采用SPSS 24.0 軟件進行統計分析，計數資料用率表示，采用χ2檢驗，計量資料以-x±s表示，兩組間均數比較采用獨立樣本t檢驗。采用單因素分析影響早產兒發生BPD 的相關因素，并利用多因素logistic 回歸分析其危險因素。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對早產兒BPD 的診斷價值。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 早產兒BPD 的單因素分析 兩組患兒機械通氣時間、吸氧時間、有無膿毒血癥及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組胎兒數目、分娩方式、出生體質量、胎齡、性別、吸氧濃度、有無胎膜早破、有無顱內出血、母親年齡、母親有無妊娠高血壓綜合征、母親有無妊娠糖尿病及血清ALB、PA 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 早產兒BPD的單因素分析

2.2 早產兒BPD 的多因素logistic 回歸分析 將有差異的單因素（機械通氣時間、吸氧時間、血漿BMP-7 水平、血漿miR-15b 水平、血漿25-（OH）D3 水平：具體數值；膿毒血癥：無=0，有=1）作為自變量，將早產兒BPD發生情況作為因變量（BPD=1，非BPD=0），采用向前極大似然法進行多因素logistic 回歸分析，結果顯示，機械通氣時間長（＞均值7 d）、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低是早產兒BPD 的獨立危險因素（P＜0.05）。見表2。

表2 早產兒BPD的多因素logistic回歸分析

2.3 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對早產兒BPD的診斷價值 以BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3為檢驗變量，以早產兒BPD 發生情況為狀態變量，繪制ROC曲線，結果顯示，BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3的曲線下面積值＞0.8，準確度較高，將3 項指標聯合，其預測早產兒BPD 的曲線下面積值為0.947，高于3 項指標單獨檢測（P＜0.05），靈敏度為84.44%，特異度為90.11%。見表3、圖1。

圖1 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3 診斷早產兒BPD 的ROC曲線

表3 血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3對早產兒BPD的診斷價值

3 討論

BPD 是早產兒常見的并發癥之一，在早產兒中具有較高的病死率，嚴重影響早產兒生存質量[9-11］。因此，早診斷、早治療早產兒BPD，對預防早產兒發生反復下呼吸道感染、高反應性氣道疾病，并促進患兒生長發育遲緩等情況的改善尤為關鍵。

本研究發現，兩組患兒機械通氣時間、吸氧時間、有無膿毒血癥及血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3水平比較，差異有統計學意義；進一步分析發現，機械通氣時間長、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低是早產兒BPD 的危險因素。機械通氣時間長容易導致早產兒氣道黏膜受損，進一步增加氣壓傷的發生風險，進而易損傷患兒肺組織和結構，增加BPD 的發生概率[12-14］。BMP-7 是絲氨酸/蘇氨酸激酶受體，其可通過參與調控Smads 信號通路而參與機體肺損傷過程，正常情況下其水平較低，但當機體發生肺損傷時其水平異常升高[15］。既往有學者指出，血漿BMP-7 是早產兒BPD 的獨立危險因素，且其對早產兒BPD 具有一定的診斷價值[16］，與本研究結果基本相符。BMP-7 參與早產兒BPD 的疾病進展過程，考慮可能與BMP-7 水平升高可加重機體肺損傷有關。miR-15b 被認為是一種致癌基因，可參與細胞增殖與分化過程，并可參與調節血管生成的各個階段[17-18］。血漿miR-15b在BPD 早產兒血漿中明顯上調[19］。miR-15b 參與早產兒BPD 的疾病進展過程考慮可能與miR-15b 水平升高可損傷肺結構和功能有關。維生素D 屬類固醇激素，在促進機體生長發育過程中起著重要作用[20］。25-（OH）D3可通過AD 受體介導而和AD 反應元件結合，發揮調節AD 靶基因表達的作用，而AD 信號通路基因在機體肺發育的囊狀期、假腺期均處于偏高水平，可在一定程度上促進生長發育[21］。25-（OH）D3缺乏，會增加肺部炎癥發生的概率，而充足的25-（OH）D3不僅可促進蛋白質及肺表面活性磷脂的合成，還可促進纖維原細胞及Ⅱ型肺泡上皮細胞的分化，使肺功能成熟，但當其水平偏低時可在一定程度上影響肺功能成熟，進而影響生長發育[22］。25-（OH）D3參與早產兒BPD 的疾病進展過程，考慮可能與25-（OH）D3水平降低可影響肺功能成熟有關。此外，本研究發現，血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯合診斷早產兒BPD 的曲線下面積值高于血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3單獨檢測，表明血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯合檢測可相互補足，進一步提高對早產兒BPD 的診斷價值。

綜上，早產兒BPD 的危險因素與機械通氣時間長、血漿BMP-7、miR-15b 水平偏高、血漿25-（OH）D3水平偏低有關，且血漿BMP-7、miR-15b、25-（OH）D3聯合檢測對早產兒BPD 的診斷價值更高。