分析合肥市某地區4 663 例體檢女性HPV 感染情況

羅 倩 陳 琳 丁 錦

據統計，我國每年新發宮頸癌病例占全世界的20%[1］。研究顯示，宮頸癌是女性惡性腫瘤中常見類型，在中國每年新增子宮頸癌病例約14 萬，死亡病例約3.7 萬[2-4］。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）本質是一群無包膜的雙鏈DNA 病毒，主要通過性生活傳播[5］，就目前已知基因型別有200 多種[6］。在某個致病因素下，HPV 的DNA 可以整合到宿主細胞的DNA 上，從而影響細胞的基因調控，遂即可能導致宮頸發生病變甚至癌變[7-8］，且按照致癌潛能，可將HPV 主要分為高危型和低危型[9］。在不同條件下，HPV 基因型別的感染率有差異，與不同的影響因素密切相關，如環境因素、社會因素及個人因素等[10］。本研究主要通過對2022 年合肥市某地區不同年齡段的常規體檢女性HPV 感染結果進行綜合分析，為該地區女性HPV疫苗接種的選擇提供相關建議，同時也為我國產HPV疫苗繼續研發提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022 年1～12 月中國科學技術大學附屬第一醫院南區健康管理中心常規體檢要求篩查宮頸HPV 的女性4 663 例。年齡24～72 歲，平均（43±11）歲。排除標準：月經期、該時間段因已知陽性再次復查仍為陽性的體檢人員。納入標準：要求初次在本中心體檢人員且已有性生活史、無宮頸疫苗接種史、無盆腔化療放療史、無婦科手術史、近1 周無陰道用藥史、近3 d 無同房、無流產史、無婦科疾病史、無妊娠哺乳期、近3 個月無激素用藥史、無自身免疫性疾病史。按照年齡分為5 組（24 歲～、31 歲～、41 歲～、51歲～和61～72 歲組），本研究已通過中國科學技術大學附屬第一醫院倫理委員會審批（倫理號：2023-RE-142）。

1.2 方法

1.2.1 標本采集與保存 由婦科醫師進行樣本采集，用無菌擴陰器（揚州美林醫療器械有限公司）暴露宮頸，用棉拭子擦拭過多的分泌物，宮頸刷在宮頸口轉動3～5 周采集足量的宮頸脫落細胞，然后迅速放進樣本管（安徽同科生物科技有限公司）中，密閉送檢。樣本應立即檢測，如果樣本不能立即檢測，在2～8℃條件下保存不應超過1 d，或在（-20±5）℃條件下保存不應超過28 d。-70℃可長期保存（24 個月），盡量避免反復凍融樣本（凍融次數不超過10 次）。采用泡沫箱加冰袋密封進行運輸（運輸時間不超過5 d）。

1.2.2 檢驗原理 基于實時熒光定量聚合酶鏈（polymerase chain reaction， PCR）技術，通過實時熒光PCR儀，在4 種PCR 反應混合液中分別采用4 種熒光通道檢測HPV 基因。該檢測體系含有尿嘧啶糖基化酶和脫氧尿嘧啶防污染措施，用來排除假陽性結果。以人β-珠蛋白（HBB）作為內參對樣本的采集、脫氧核糖核酸（DNA）的提取及PCR 抑制因素進行監控。

1.2.3 實驗步驟 首先，通過檢驗科醫師先取出試劑盒中各組分，室溫解凍，待其溫度達室溫后混勻備用，根據待測樣本數、陰性對照數量和陽性對照數量，按比例（每反應PCR 反應液43.5 μL+酶混合液1.5 μL）取相應量的PCR 反應液和酶混合液，分別充分振蕩混勻制備成HPV16/58/35/HBB-PCR 反應混合液、HPV18/33/51/66-PCR 反應混合液、HPV45/59/39/56-PCR 反應混合液和HPV31/52/68/53-PCR 反應混合液，在離心機中低速離心30 s，每反應分別按照PCR 反應液43.5 μL+酶混合液1.5 μL 分裝至熒光PCR 反應管中，2～8℃保存備用。其次，將懸浮于細胞保存液中的樣本振蕩混勻后，取1 mL 細胞保存液于1.5 mL 離心管中，12 000 r/min 離心5 min，棄上清（如有明顯溶血，可用生理鹽水漂洗數次，直至無明顯溶血）。加入100 μL DNA 提取液，充分混勻，100℃孵育10 min。12 000 r/min 離心2 min，2～8℃保存備用。取陽性對照和陰性對照各20 μL 至1.5 mL 離心管，分別加入100 μL DNA 提取液，充分混勻，100℃孵育10 min，12 000 r/min離心2 min，2～8℃保存備用。再次，取處理過的待檢樣本、陽性對照、陰性對照各5 μL，分別加到4 種PCR反應混合液的PCR 反應管中，蓋上管蓋（如有氣泡，可用手指彈擊，去除氣泡），在離心機中低速離心30 s 至管壁無明顯液珠。最后，將PCR 反應管放入PCR 擴增儀樣品槽，按對應順序設置待檢樣本、陽性對照、陰性對照。TK6000 選擇FAM 通道、JOE 通道、ROX 通道、CY5 通道。設置Reaction Volume 為50。擴增條件為50℃ 2 min，95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min（收集熒光），循環45 次；38℃ 5 s 終止，反應結束后記錄和保存結果。

1.3 統計學方法 采用SPSS 26.0 統計軟件進行數據分析。正態分布計量資料用±s表示；計數資料以頻數和/或率表示，組間比較采用χ2檢驗，同時對數據進行Cochran-Armitage 線性趨勢χ2檢驗。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV 感染率 4 663 例篩查宮頸HPV 的女性中，實際HPV 陽性人數為393 例，HPV 陽性人數感染率為8.43%（393/4 663）。各年齡段之間，HPV 陽性人數感染率差異有統計學意義（χ2=13.070，P=0.011），HPV 的3 種感染模式感染率差異有統計學意義（χ2=27.731，P＜0.001）。Cochran-Armitage 趨勢檢驗結果顯示，Z=-2.726，P=0.006。見表1、2。

表1 各年齡組HPV感染率分布情況

表2 各年齡組HPV的3種感染模式[例（%)]

2.2 HPV 多重感染 多重感染總人數為69 例，在多重感染中，二重感染率13.23%（52/393）及檢出率1.12%（52/4 663）最高。多重感染率在61～72 歲組最高3.16%（6/190）。各年齡段之間，多重感染率差異無統計學意義（χ2=3.474，P=0.482）。見表3、4。

表3 HPV多重感染檢出情況

表4 各年齡組多重感染率分布情況

2.3 HPV 亞型感染排位 HPV 感染情況檢出率排名前3 的為52 型（1.91%，89/4 663）、53 型（1.24%，58/4 663）及16 型（0.94%，44/4 663），即是所謂的優勢亞型。在各個年齡組，排名前3 的一重感染型別和多重感染型別皆有差別，均以52 型為主，而24 歲～組則增加了58 和59 型，61～72 歲組增加了53、56 型；即使同一個年齡組，排名前3 的一重感染型別和多重感染型別也略有差別，包括少見的51 型和66 型。見表5。

表5 各年齡組HPV優勢亞型分布情況

3 討論

眾所周知，HPV 基因型別分布受多種因素影響，因此進行不同地區的HPV 感染率以及感染常見亞型的分析，對HPV 的流行病學及疫苗接種有重要意義，由于缺乏抗HPV 病毒的特異性藥物，HPV 感染更多需要接種疫苗來預防[11］。

本研究中，HPV 感染率首先是61～72 歲組中最高，其次是51 歲～組，再次24 歲～組，可看出數據的分布存在首尾2 個高峰，與袁建暉等[12］研究結果基本符合。分析61～72 歲組及51 歲～組感染率高的主要原因是HPV感染有隱匿性特點，與其絕經后激素水平、陰道內環境、機體免疫力、潛伏病毒再激活或病毒持續感染等相關，應重視此類人群的篩查，做好預防工作[13］。分析24 歲～組感染率較高的主要原因是性生活較多，增加感染的概率。本研究最小年齡為24 歲，雖缺乏小于24 歲的研究數據，但對低年齡段的女性保護也要引起重視。此外，各個年齡段中，HPV 感染率是有差異的，感染的模式也存在差異，可見年齡是一重要影響因素，Cochran-Armitage 檢驗發現，隨著年齡的增加，HPV 感染有上升趨勢，考慮與高年齡段可能缺少疫苗的保護有關，因此，應盡可能降低高年齡段的感染率。

本研究HPV 多重感染中主要為二重感染，其次為三重感染，最少的為四重感染。由此能看出隨著感染型別增加，感染人數逐漸減少，四重感染有3 人，其年齡分別為35 歲、44 歲和58 歲，多重HPV 感染率在61～72 歲組中最高，但是多重感染在各個年齡之間差異無統計學意義，與茅書為等[14］研究結果基本符合，因此對于HPV 多重感染要積極治療。

本研究HPV 感染率第一位的亞型為52、53 和16。與Zhang 等[15］研究結果基本符合。在多重感染中，HPV 16 以混合感染方式出現，伴有HPV 53 和HPV 51。由此看出，HPV 52 是合肥地區重點防治的亞型，可針對性選用含有52 型的預防性HPV 疫苗，且主要以單一感染為主。李見等[16］調查徐州地區重點防治亞型為HPV 16，羅志粦等[17］調查莆田地區重點防治亞型為HPV 52，馬麗娜等[18］調查黑龍江地區重點防治亞型也為HPV 16。優勢亞型的差異考慮原因主要為多種因素，其中最主要的是因素是地域環境差異[19］。趙雪蓮等[20］研究表明，年齡、民族、受教育程度、職業、經濟條件等重要因素影響著宮頸癌篩查和HPV 認知水平。本地仍需加大宣傳的力度以及途徑，盡管人們目前對HPV 疫苗認知率欠缺，但愿意接種HPV 疫苗人數所占比例相對較高[21-22］。

綜上所述，選擇性應用預防性HPV 疫苗是必要的，也能為我國女性HPV 疫苗繼續研發提供新思路。本文不足之處，后期可隨訪宮頸疫苗接種情況，來進一步評價疫苗接種情況對不同年齡段感染率，多重感染分布以及優勢亞型的影響。