海洋真菌Penicillium sp.HD-1-1 次級代謝產物研究

王 聰，王玉妃，徐 輝，許 睿，蘭建洲，孔凡棟，周麗曼

廣西民族大學化學化工學院，林產化學與工程國家民委重點實驗室，廣西林產化學與工程重點實驗室，廣西林產化學與工程協同創新中心，廣西高校少數民族醫藥古方挖掘與開發重點實驗室，廣西 南寧 530006

海洋真菌具備特殊的生態環境（高鹽、高壓、寡營養等）、強大的基因簇，復雜的遺傳背景決定了其在次生代謝產物方面具有高產率的優勢，以及具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等生物功能多樣性[1-4]，是探索新型生物活性海洋天然產物（MNPs）的重要源泉[5-6]。

自1893 年Bartolomeo Gosio 首次報道霉酚酸（mycophenolic acid，MPA）以來，MPA 及其衍生物因其廣泛的生物活性包括抗炎、抗真菌、抗病毒、免疫抑制等受到廣泛關注。當前臨床實踐中，最常用的2 種MPA 衍生物是霉酚酸酯（mycophenolate mofetil，MMF）[7]以及霉酚酸鈉（mycophenolate sodium，MPS）。MPA 的特點是經胃腸道吸收很差，而MMF 的酯化反應顯著提高了其生物利用率，在預防器官移植排異領域做出了重要貢獻[8]，但易導致消化疾病、血液疾病、癌癥和神經系統疾病等。這些毒副作用以及MPA 在體內的葡萄糖醛酸化作用限制了MPA 類化合物的臨床應用。因此，MPA衍生物的研究和開發成為當前藥物研究的熱點，尋找更加有效且低毒的MPA 類似物作為潛在的藥物候選物成為研究人員關注的重點領域。海洋微生物在高鹽、高壓、低溫、寡營養的環境下產生有別于陸生微生物的獨特生理代謝途徑，進而更有可能產生結構新穎、活性獨特的次級代謝產物，為霉酚酸衍生物類藥物研究和開發帶來新的機遇。Chen 等[9]從南海深海沉積物來源的細小青霉次級代謝產物中分離得到3 種新的霉酚酸類似物，Zhang 等[10]從珊瑚來源的Penicilliumbialowiezense次級代謝產物中分離得到5 種具有良好免疫抑制活性的新的霉酚酸類似物，顯示了海洋天然產物在霉酚酸類似物研究方面的潛在價值。

潿洲島地處熱帶和亞熱帶交界處，是獨特的火山兼海洋地貌，具有十分豐富的微生物類群，是有待開發的微生物資源寶庫[11]。本研究從廣西潿洲島火山口來源的團扇藻樣品中分離得到一株青霉Penicilliumsp.HD-1-1，通過液態培養從發酵物中分離鑒定了1 個新的霉酚酸類化合物（1）和16 種已知的化合物，分別為霉酚酸（mycophenolic acid，2）、甲基麥考酚酸（methyl mycophenolic acid，3）、6-(5-甲氧羰基-3-甲基戊-2-烯)-3,7-二羥基-5-甲氧基-4-甲基苯酚-1-酮 [6-(5-methoxycarbonyl-3-methylpent-2-enyl)-3,7-dihydroxy-5-methoxy-4-methylphthalan-1-one，4]、6-(5-羧基-3-甲基戊-2-烯)-3,7-二羥基-5-甲氧基-4-甲基苯酚-1-酮 [6-(5-carboxy-3-methylpent-2-enyl)-3,7-dihydroxy-5-methoxy-4-methylphthalan-1-one，5]、7-羥基-5-甲氧基-4-甲基-6-(3-甲基-4-氧代戊基)-二氫異苯并呋喃-l-酮 [7-hydroxy-5-methoxy-4- methyl-6-(3-methyl-4-oxopentyl)-phthalan-l-one，6]、6-(3-羧基丁酯)-7-羥基-5-甲氧基-4-甲基苯酞-1-酮[6-(3-carboxybutyl)-7-hydroxy-5-methoxy-4-methylphthalan-1-one，7]、breynivosamide A（8）、傘形香青酰胺（anabellamide，9）、N-(N'-苯甲?；?S*-苯丙氨?；?-S*-苯丙氨醇苯甲酸酯[N(N'-benzoyl-S*-phenylalaninyl)-S*-phenylalaninol benzoate，10]、(3S,6R)-6-(對-羥苯基)-1,4-二甲基-3,6-二甲硫基哌嗪-2,5-二酮 [(3S,6R)-6-(p-hydroxybenzyl)-1,4-dimethyl-3,6-bis(methylthio)piperazine-2,5-dione，11]、(3R,6R)-6-(對-羥苯基)-1,4-二甲基-3,6-二甲硫基哌嗪-2,5-二酮[(3R,6R)-6-(p-hydroxybenzyl)-1,4-dimethyl-3,6-bis(methylthio)piperazine-2,5-dione，12]、(+)-新海膽靈A [(+)-neoechinulin A，13]、(3R,8S)-5,7-二羥基-3-(1-羥乙基)苯酚 [(3R,8S)-5,7-dihydroxy-3-(1-hydroxyethyl)phthalide，14]、5,7-二甲氧基-4-甲基異苯并呋喃-1(3H)-酮 [5,7-dimethoxy-4-methylisobenzofuran-1(3H)-one，15]、saccharonol A（16）、6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素（6,8-dihydroxy-3-hydroxy-methylisocoumarin，17）。其結構見圖1。通過CCK-8 法測試化合物對5 種腫瘤細胞（人非小細胞肺癌A549 細胞、人非小細胞肺癌NCI-H1581 細胞、人乳腺癌MCF7 細胞、人胃癌AGS 細胞、人結直腸癌HT29細胞）的細胞毒活性。結果顯示，化合物2 和3 對于AGS 細胞顯示出強細胞毒活性，半數抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值分別為0.69、1.12 μmol/L。此外，化合物2 對NCI-H1581細胞顯示出一定的抑制活性，其IC50值為17.95μmol/L，化合物3 對HT29 細胞顯示出中等抑制活性，其IC50值為19.30 μmol/L，豐富了霉酚酸衍生物作為海洋微生物來源天然產物的基礎研究。

圖1 化合物1～17 的結構Fig.1 Structures of compounds 1—17

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

HCB-1300V 型潔凈工作臺（青島海爾特種電器有限公司），LRH-500A 型生化培養箱（廣東泰宏君科學儀器股份有限公司），AD500S-P 型高剪切分散乳化機（上海昂尼儀器儀表有限公司），LDZX-75KBS 型立式高壓蒸汽滅菌器（上海申安醫療器械廠），ZF-20D 型暗箱式紫外分析儀（鞏義市予華儀器有限責任公司），Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司），Nacalai tesque COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ型（250 mm×10 mm，5 μm）半制備柱，COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ型（250 mm×20 mm，5 μm）色譜柱，YMC*GEL ODS-A-HG 反相硅膠（日本YMC Group），細胞級DMSO（SIGMA 公司），MCO-18AC 二氧化碳細胞培養箱（PHcbi 公司），布魯克400 MHz 核磁共振波譜儀（布魯克公司），MULTISKAN MK3 多功能酶標儀（Thermo 公司），CHEETAH 9200 型中壓制備色譜（天津博納艾杰爾科技有限公司），LC3000 型高效液相色譜儀（上海楚定分析儀器有限公司），實驗試劑為色譜純（蘇州速研醫藥科技有限公司）或分析純（成都市科隆化學品有限公司）。細胞毒活性測定的5 種腫瘤細胞（A549 細胞、NCI-H1581 細胞、MCF7 細胞、AGS細胞、HT29 細胞）均購自武漢普諾賽公司，所用陽性對照為鹽酸阿霉素（doxorubicin hydrochloride，Dox，Solarbio Life Sciences 公司）。

1.2 菌株來源及鑒定

菌株 HD-1-1 分離自廣西潿洲島火山口（N21°1′42.97′′，E109°7′46.29′′）的團扇藻樣品中，由上海生工生物工程股份有限公司完成菌株基因組DNA 提取、擴增、純化與測序工作，在NCBI 數據庫中對ITS 測序鑒定的結果進行比對，綜合菌株生長形態與ITS 測序鑒定結果（GenBank accession No.OR742886），將菌株鑒定為Penicilliumsp.HD-1-1，并利用MEGA（Version 7.0）繪制菌株的系統進化樹。

2 方法

2.1 菌株發酵

在PDA 培養基上接種Penicilliumsp.HD-1-1 置28 ℃恒溫培養箱中培養4 d，在超凈工作臺將長有菌的培養基劃成小塊投入滅菌后的真菌2 號液體培養基中，室溫條件下，靜置發酵30 d，發酵規模為300 mL×100 瓶。

真菌2 號發酵培養基：味精0.01 g/mL、磷酸二氫鉀0.000 5 g/mL、海水素0.033 g/mL、酵母膏0.003 g/mL、瓊脂0.02 g/mL、麥芽糖0.02 g/mL、葡萄糖0.01 g/mL、甘露醇0.02 g/mL。

2.2 次級代謝產物的提取分離

使用醋酸乙酯對Penicilliumsp.HD-1-1 菌株的發酵物進行了3 次萃取，經濾過和減壓濃縮，最終獲得了35.6 g 粗提物。用石油醚和90%甲醇-水各3 L 將粗提物充分溶解，在分液漏斗中混勻、靜置過夜。對完全分層的2 種液體分別進行減壓濃縮，得到石油醚萃取物4.05 g 和90%甲醇-水萃取物29.24 g。

對90%甲醇-水萃取物進行減壓硅膠柱色譜，采用石油醚-醋酸乙酯（1∶0、10∶1、9∶1、8∶1、6∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1）梯度洗脫，經過TLC-HPLC 的分析，合樣后獲得了12 個組分Fr.1～12。Fr.6（168.3 mg）通過HPLC 制備（C18半制備柱，甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液65∶35，4 mL/min），得到了化合物6（tR＝6.7 min，6 mg）和16（tR＝7.7 min，7 mg）。Fr.8（137.3 mg）通過HPLC（C18半制備柱，甲醇-酸水70∶30，4 mL/min）制，得到化合物9（tR＝18.6 min，12.3 mg）。Fr.9（1.901 1 g）通過高效液相色譜（C18色譜柱，甲醇-水70∶30，10 mL/min），得到化合物7（tR＝17.2 min，9 mg）、10（tR＝17.8 min，119 mg）、15（tR＝17.9 min，35 mg）。Fr.10（5.643 7 g）經中壓制備色譜，甲醇-水（10%→100%）梯度洗脫，共分得12 個組分Fr.10.1～10.12。Fr.10.4 經半制備HPLC，乙腈-酸水（40∶60，4 mL/min）分離得到化合物3（tR＝14.82 min，80 mg）。Fr.10.8 經半制備HPLC，乙腈-酸水（40∶60，4 mL/min）分離得到化合物2（tR＝14.9 min，5 mg）。Fr.11（7.776 6 g）經中壓制備色譜，甲醇-水（20%→100%）梯度洗脫，共分得9 個組分Fr.10.1～10.9。Fr.11.2 經半制備HPLC，甲醇-水（20∶80，體積流量4 mL/min）分離得到化合物14（tR＝9.1 min，3.2 mg）。Fr.11.4 經半制備HPLC，甲醇-酸水（40∶60，體積流量4 mL/min）分離得到化合物11（tR＝25.3 min，8.1 mg）、12（tR＝26.5 min，14.7 mg）、17（tR＝9.6 min，7.5 mg）。Fr.11.6經半制備HPLC，甲醇-酸水（60∶40，體積流量4 mL/min）分離得到化合物13（tR＝8.4 min，250 mg）。Fr.11.7 經半制備HPLC，甲醇-酸水（60∶40，體積流量4 mL/min）分離得到化合物4（tR＝16.5 min，7.5 mg）。Fr.11.9（3.75 g）經中壓制備色譜梯度洗脫，洗脫體系：甲醇-水（20%→100%），共分得10個組分Fr.11.9.1～11.9.10。Fr.11.9.3 經半制備HPLC，甲醇-酸水（55∶45，體積流量4 mL/min）分離得到化合物5（tR＝13.2 min，6.1 mg）。Fr.11.9.6經半制備HPLC，甲醇-酸水（60∶40，體積流量4 mL/min）分離得到化合物8（tR＝16.1 min，5.2 mg）、1（tR＝20.2 min，41.3 mg）。

2.3 電子圓二色譜（electronic circular dichroism，ECD）計算

根據密度泛函理論（density functional theory，DFT）在Gaussian 09 軟件中進行ECD 計算。首先通過hyperchem 軟件對在5.0 kcal/mol（1 kcal＝4.2 kJ）內進行了初步構象搜索，之后在B3LYP/6-31G（d）水平上進行幾何優化和單點能計算，獲得Boltzmann 占比在1%以上穩定構象。用SCRF/PCM方法在相同的DFT 水平上評價甲醇溶液的溶劑效應并通過B3LYP/6-31G（d）中的TDDFT 計算得到化合物甲醇中的電子激發能和旋轉強度（選擇的激發態數目為30 個）。

2.4 化合物抗腫瘤活性測試

采用CCK-8 法測定細胞毒活性[12]，用DMSO將化合物溶解為20 μmol/L 的溶液。用10 %胎牛血清培養液將細胞稀釋成單細胞懸液，96 孔板每孔接種90 μL 5×104個/mL 的貼壁細胞，在37 ℃、5%CO2的條件下預培養24 h。之后每孔加入10 μL 樣品溶液，培養48 h 后，吸出舊培養基和樣品溶液，每孔各加入100 μL 稀釋10 倍的CCK-8 溶液，在27 ℃、5% CO2條件下培養4 h（避光操作，實時觀察）。用酶標儀檢測450 nm 處吸光度（A），用Excel標準化處理原始數據，按照公式計算初篩抑制率。若抑制率大于50 %則說明化合物對腫瘤細胞有較好抑制活性，后續對其進行IC50測定，用GraphPad Prism 8（版本8.0.2，GraphPad Software Inc）計算IC50，實驗結果以±s表示。實驗中每個濃度設3個復孔，同時設置空白組、藥物組和對照組，以鹽酸阿霉素為陽性對照。

抑制率＝(A對照－A藥物)/(A對照－A空白)

3 結果與分析

3.1 菌株鑒定結果

菌株HD-1-1 的ITS 序列PCR 擴增序列長度為508 bp，這與NCBI 數據庫中的Penicilliumsp.在系統進化樹上是同一分支，進一步觀察其形態特征可以發現，菌落絨狀致密邊緣為白色，能生成大量的孢子，孢子面為藍綠色，這與青霉菌的形態特征是一致的。因此，初步鑒定HD-1-1 這一菌株是青霉菌Penicilliumbrevicompactum，并將其命名為Penicilliumsp.HD-1-1（圖2）。

圖2 菌株Penicillium sp.HD-1-1 的系統發育樹Fig.2 Phylogenetic tree of Penicillium sp.HD-1-1

3.2 化合物結構鑒定

表1 化合物1 的1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz, CD3OD) 數據Table 1 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz, CD3OD) data of compound 1

圖3 化合物1 的主要1H-1H COSY、HMBC 和ROESY 相關性Fig.3 Key 1H-1H COSY, HMBC and ROESY correlations of compound 1

圖4 化合物1 的實測和計算ECD 譜圖Fig.4 Experimental and calculated ECD spectra of compound 1

化合物2：白色粉末；ESI-MSm/z343.1 [M＋Na]+，分子式C17H20O6；1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 5.25 (1H, t,J= 6.9 Hz, H-2′), 5.22 (2H, s, H-3),3.76 (3H, s, 5-OMe), 3.38 (2H, d,J= 6.9 Hz, H-1′),2.36 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-5′), 2.26 (2H, t,J= 7.6 Hz,H-4′), 2.14 (3H, s, H-8), 1.81 (3H, s, H-7′)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ: 177.3 (C, C-6′), 173.8 (C,C-1), 164.8 (C, C-5), 154.7 (C, C-7), 146.6 (C, C-3a),135.0 (C, C-3′), 124.4 (CH, C-2′), 123.6 (C, C-6),117.8 (C, C-4), 107.7 (C, C-7a), 70.8 (CH2, C-3), 61.6(CH3, 5-OMe), 35.8 (CH2, C-4′), 33.8 (CH2, C-5′),23.6 (CH2, C-1′), 16.3 (CH3, C-7′), 11.4 (CH3, C-8)。該化合物的數據與文獻報道的一致[14]，故鑒定化合物2 為霉酚酸。

化合物3：褐色粉末；ESI-MSm/z357.1 [M＋Na]+，分子式C18H22O6；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ: 5.23 (3H, s, H-3, 2′), 3.75 (3H, s, 5-OMe), 3.56 (3H,s, 6′-OMe), 3.37 (2H, d,J= 7.0 Hz, H-1′), 2.39 (2H, t,J= 6.9 Hz, H-5′), 2.26 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-4′), 2.14(3H, s, H-8), 1.80 (3H, s, H-7′)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 175.6 (C, C-6′), 173.8 (C, C-1), 164.8 (C,C-7), 154.8 (C, C-5), 146.6 (C, C-4), 134.8 (C, C-3′),124.6 (CH, C-2′), 123.6 (C, C-7a), 117.8 (C, C-6),107.7 (C, C-3a), 70.8 (CH2, C-3), 61.5 (CH3, 5-OMe),52.0 (CH3, 6′-OMe), 35.7 (CH2, C-4′), 33.7 (CH2,C-5′), 23.6 (CH2, C-1′), 16.2 (CH3, C-7′), 11.4 (CH3,C-8)。該化合物的數據與文獻報道的一致[15]，故鑒定化合物3 為甲基麥考酚酸。

化合物5：棕色粉末；ESI-MSm/z359.2 [M＋Na]+，分子式C17H20O7；1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.60 (1H, brs, H-3), 5.25 (1H, t,J= 6.3 Hz, H-2′),3.76 (3H, s, 5-OMe), 3.40 (2H, d,J= 6.9 Hz, H-1′),2.28～2.38 (4H, m, H-4′, 5′), 2.25 (3H, s, H-8), 1.81(3H, s, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 179.5(C, C-6′), 171.7 (C, C-1), 165.2 (C, C-5), 154.5 (C,C-7), 145.7 (C, C-3a), 135.2 (C, C-3′), 125.5 (C, C-6),124.1 (CH, C-2′), 120.3 (C, C-4), 108.8 (C, C-7a),100.9 (CH, C-3), 61.5 (C, 5-OMe), 35.8 (CH2, C-4′),33.9 (CH2, C-5′), 23.7 (CH2, C-1′), 16.3 (CH3, C-7′),11.1 (CH3, C-8)。該化合物的數據與文獻報道的一致[16]，故鑒定化合物5 為6-(5-羧基-3-甲基戊-2-烯)-3,7-二羥基-5-甲氧基-4-甲基苯酚-1-酮。

化合物10：白色粉末；ESI-MSm/z529.3 [M＋Na]+，分子式C32H30N2O4，1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 7.66～7.70 (4H, m, H-2′′, 2′′′, 6′′, 6′′′),7.18～7.41 (10H, m, H-2, 2′, 3, 3′, 4, 4′, 5, 5′, 6, 6′),7.35～7.52 (6H, m, H-3′′, 3′′′, 4′′, 4′′′, 5′′, 5′′′), 4.80(1H, dd,J= 9.5, 5.8 Hz, H-8′), 4.57 (1H, m, H-8),4.41 (1H, dd,J= 11.5, 4.5 Hz, H-9α), 4.14 (1H, dd,J= 11.4, 6.4 Hz, H-9β), 3.28 (1H, m, H-7′α), 3.12(1H, dd,J= 13.8, 9.0 Hz, H-7′β), 2.94 (1H, dd,J=13.7, 6.6 Hz, H-7α), 2.88 (1H, dd,J= 13.7, 8.3 Hz,H-7β)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 173.1 (C,C-9′), 170.4 (C, C-7′′), 170.3 (C, C-7′′′), 139.1 (C,C-1), 138.5 (C, C-1′), 135.6 (C, C-1′′), 135.0 (C,C-1′′′), 132.9 (C, C-4′′′), 132.6 (CH, C-4′′), 130.3 (CH,C-2′, 6′), 130.2 (CH, C-2, 6), 129.6 (CH, C-2′′′, 6′′′),129.5 (CH, C-3, 5), 129.5 (CH, C-3′′, 5′′), 129.5 (CH,C-3′′′, 5′′′), 128.5 (CH, C-4′), 128.4 (CH, C-2′′, 6′′),127.9 (CH, C-3′, 5′), 127.6 (CH, C-4), 66.8 (CH2,C-9), 56.3 (CH2, C-8′), 51.9 (CH2, C-8), 38.0 (CH2,C-7′), 37.8 (CH2, C-7)。該化合物的數據與文獻報道的一致[20]，故鑒定化合物10 為N-(N'-苯甲?；?S*-苯丙氨?；?-S*-苯丙氨醇苯甲酸酯。

化合物15：白色粉末；ESI-MSm/z383.1 [2M＋Na]+，分子式C9H8O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 10.28 (2H, s, 5, 7-OH), 6.41 (1H, s, H-6), 5.09 (2H,s, H-3), 1.90 (3H, s, H-8)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 169.1 (C, C-1), 162.0 (C, C-5), 156.0 (C,C-7), 149.3 (C, C-3a), 108.6 (C, C-4), 102.2 (C, C-7a),102.1 (CH, C-6), 67.7 (CH2, C-3), 10.2 (CH3, C-8)。該化合物的數據與文獻報道的一致[24]，故鑒定化合物15為5,7-二甲氧基-4-甲基異苯并呋喃-1(3H)-酮。

化合物16：黃色粉末；ESI-MSm/z407.1 [2M＋Na]+，分子式C10H8O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 6.32 (1H, s, H-4), 6.30 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-5),6.28 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-7), 2.23 (3H, s, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 167.9 (C, C-1),167.3 (C, C-3), 164.9 (CH, C-4), 155,6 (C, C-4a),141.5 (CH, C-5), 105.5 (C, C-6), 103.4 (CH, C-7),102.4 (C, C-8), 99.7 (C, C-8a), 19.2 (CH3, C-9)。該化合物的數據與文獻報道的一致[25]，故鑒定化合物16為saccharonol A。

化合物17：黃色粉末；ESI-MSm/z417.2 [2M＋H]+，分子式C10H8O5；1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 6.50 (1H, brs, H-4), 6.35 (1H, m, H-5), 6.33 (1H, m,H-7), 4.34 (2H, s, H-9) ；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 167.5 (C, C-1), 167.4 (C, C-8), 164.9 (C,C-6), 157.4 (C, C-3), 140.7 (C, C-4a), 104.8 (CH, C-4),104.4 (CH, C-5), 103.0 (CH, C-7), 99.9 (C, C-8a), 61.3(CH2, C-9)。該化合物的數據與文獻報道的一致[26]，故鑒定化合物17 為6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素。

3.3 活性測試結果

通過測試13 個化合物對5 種腫瘤細胞（A549、NCI-H158、MCF7、AGS、HT29）的抑制活性（表2）發現，化合物2 和3 對AGS 細胞具有較強抑制活性，IC50分別為0.69、1.12 μmol/L。此外化合物2 對NCI-H1581 細胞具有中等抑制活性，IC50值為17.95 μmol/L，化合物3 對HT29 細胞具有中等抑制活性，IC50值為19.30 μmol/L。

表2 13 個化合物的細胞增殖抑制活性測試Table 2 Antitumor activities for 13 compounds

4 討論

本研究以潿洲島火山口海洋真菌Penicilliumsp.HD-1-1 為研究對象，分離得到1 個新的霉酚酸類化合物（1）以及16 個已知化合物（2～17）。通過分析活性測試結果及化合物之間的結構差異，發現化合物2 和3 僅在C-6′位置有差異，說明C-6′位置的COOH 酯化為COOCH3增加了化合物對于HT29 細胞的細胞毒活性，降低了化合物對于AGS細胞和NCI-H1581 細胞的細胞毒活性?；衔? 和5 相比，說明苯并呋喃環上C-3 位置的羥基取代降低了化合物對于5 種腫瘤細胞的細胞毒活性?；衔?、4 與化合物3 相比，說明苯并呋喃環上C-3位置發生的甲氧基取代、及羥基取代降低了化合物對于5 種腫瘤細胞的細胞毒活性。結構的改變可能影響其在體內的吸收和穩定性、對腫瘤細胞的親和力、片段的酶分解行為，這些因素微妙相關進而造成活性的變化[27]。

本研究發現的新霉酚酸類衍生物，豐富了海洋天然來源的MPAs 家族。此外，還研究了該類化合物對于5 種腫瘤細胞（A549、NCI-H1581、MCF-7、AGS、HT29）的細胞毒活性，為霉酚酸衍生物的生物活性探索研究提供了相應參考，以期獲得新的有前途的霉酚酸類藥物先導化合物。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突