酒泉市豬場主要病毒性疾病的檢測與分析

張溪 張翠花 南金魚 張若玉

摘? 要：為了解2023年酒泉市幾種主要豬病毒病的流行情況，本研究采用熒光定量RT-PCR方法，對酒泉市630份豬血清、270份豬組織進行了病原學檢測。結果顯示：檢出陽性血清107份，樣本個體陽性率由高到低依次為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（7.78％）、豬偽狂犬病病毒（4.92％）、豬細小病毒（4.29％）、非洲豬瘟病毒（未檢出）、豬瘟病毒（未檢出）、口蹄疫病毒（未檢出）；樣本混合感染率為3.80％，豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合豬偽狂犬病病毒感染率最高（1.90％）。本次病原學檢測可為酒泉市豬場疫病綜合防控提供參考。

關鍵詞：豬；病毒性疾??；病原學檢測

中圖分類號：S816 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）01-0031-04

隨著養豬業集約化、規?；潭鹊奶岣?，豬病的發生、流行情況也越來越復雜。疫病的流行與暴發成為制約養豬業健康有序發展的主要原因，嚴重危害了養豬業的發展和人民的健康。為摸清酒泉市豬病的流行情況和危害程度，給疫病的預警和防控提供科學依據，降低疫病暴發對養豬業的打擊，筆者在流行病學調查的基礎上于2023年7月對酒泉市15家規?；i場、52家散養戶、5家生豬屠宰場的630頭豬，900份樣本（血清630份，組織270份）開展了非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）、豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus，PRV）、豬細小病毒（porcine parvovirus，PPV）等病原檢測。

1? 材料與方法

1.1 樣本來源

隨機采集轄區內15家規?；i場、52家散養戶和3家生豬屠宰場。其中規?；i場包括? 6家種豬場和9家育肥豬場，每家豬場采集生豬血清30份，共計450份；散養戶共采集豬血清90份；每家屠宰場采集豬血清30份，并平行采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結各30份，共計90份豬血清、270份豬組織。

1.2 主要試劑

非洲豬瘟病毒、豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒熒光PCR檢測試劑盒均購自青島立見生物科技有限公司；豬細小病毒熒光PCR檢測試劑盒購自哈爾濱元亨生物藥業有限公司；DNA/RNA病毒基因提取試劑盒購自青島立見生物科技有限公司。

1.3 主要儀器

Step One型熒光PCR購自德國ABI Applied Biosystems公司。

1.4 樣本的處理

血清樣本：將0.5 mL血清，用高速冷凍離心機按12 000 r/min離心3 min，取離心上清液200 μL。

組織樣本：稱取豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結0.1～0.2 g或剪下黃豆大小的體積，并加入5倍體積生理鹽水（1～2 mL），用組織研磨器將組織研磨成組織勻漿液，取組織勻漿液? ? ? 0.5 mL，用高速冷凍離心機按12 000 r/min離心3 min，取上清液200 μL。

1.5 樣本的熒光RT-PCR檢測

按照各病原的熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書進行試劑配制，在熒光PCR儀上按照試劑盒說明書要求設定具體的反應條件并收集熒光信號。

1.6 不同病原的流行特點分析

根據熒光RT-PCR檢測結果，進行不同病原陽性率的統計分析，確定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV流行病學特點。

1.7 不同飼養規模的流行特點分析

根據熒光RT-PCR檢測結果，進行不同飼養條件下陽性率的統計分析，確定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV的區域性流行病學特點。

1.8 混合感染的檢測分析

根據熒光RT-PCR檢測結果，比對各病原的交叉感染情況，分析ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等致病源的混合感染情況。

1.9 不同組織樣本的病毒檢出情況分析

根據熒光RT-PCR檢測結果，對同一頭豬的血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結病毒檢出率進行分析，分析不同器官的病毒檢出率。

2? 結果

2.1 不同病原的流行特點分析

對630份血清進行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV陽性率的統計分析，結果如表1所示。由表1可知，PRRSV陽性率最高，達7.78％；PRV次之，為4.92％；PPV陽性率為4.29％；ASFV、CSFV、FMDV陽性率為0，表明不同病原陽性率差別較大。

2.2 不同飼養規模的流行特點分析

對不同飼養條件下的630份血清進行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV陽性率的統計分析，結果如表2所示，在不同養殖規模下不同病原的陽性率存在較大差異，陽性率由高到低依次為：散養戶、育肥豬場、種豬場、屠宰場；PRRSV的陽性率在不同飼養條件下均最高；散養戶中PRRSV、PRV、PPV陽性率均最高，分別為22.22％、12.22％和12.22％。表明不同飼養方式對不同病原陽性率的影響較大，散養戶可能標準化程度低、飼養管理粗放、防疫密度低、疫苗免疫品種少、消毒滅源不徹底，導致其陽性率最高。

2.3 混合感染的檢測分析

對630份血清進行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV交叉感染情況比對分析，結果如表3所示，含兩種或兩種以上病原的樣本共24份，混合感染率為3.80％，PRRSV+PRV混合感染率最高，為1.90％，PRRSV+PPV混合感染率為1.11％，PPV+PRV混合感染率為0.79％，未檢測到PPV+PRV+PRRSV三種病原混合感染的情況，表明臨床中有混合感染情況發生，應提高重視。

2.4不同組織樣本的病原檢出情況分析

對3家生豬屠宰場90頭豬的血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結等樣本進行平行采樣，并對ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等疫病進行RT-PCR檢測，分析不同器官的病原檢出率，結果如表4所示。由表4可知，豬血清、肺臟、扁桃體、頜下淋巴結等樣本病原檢出結果相同，表明RT-PCR檢測準確率高，敏感性強。

3? 結論

試驗選取15家規?；i場（種豬場6家，育肥豬場9家）、52家散養戶和3家生豬屠宰場，采集豬血清樣本630份，組織樣本270份，通過對不同病原、不同飼養規模，不同組織樣本進行熒光PT-PCR檢測，檢出陽性血清107份，樣本個體陽性率分別為PRRSV 7.78％、PRV 4.92％、PPV 4.29％，其中ASFV、CSFV、和FMDV均未檢出陽性樣本。表明PRRSV、PRV、PPV在酒泉市豬場（散養戶）中普遍存在。根據檢測結果顯示，PRRSV感染率最高，尤其散養戶中陽性率達22.20％。PRRSV在種豬場和育肥豬場陽性率分別為5.00％和5.90％；PRV在散養戶、種豬場和育肥豬場陽性率分別為12.20％、2.78％和4.81％；PPV在散養戶、種豬場和育肥豬場陽性率分別為12.20％、3.33％和3.33％。這表明部分散養戶飼養管理手段粗放、防疫密度低、接種的疫苗品種少，對豬病的預防控制能力較弱。通過流行病學調查顯示，酒泉市豬口蹄疫和豬瘟疫苗免疫率高，且從未發生過非洲豬瘟，根據檢測結果顯示ASFV、CSFV和FMDV陽性率為0，說明接種疫苗對疫病的預防和控制呈正相關。

豬感染RRSV、PRV、PPV后臨床表現均為公豬種用性能下降，母豬返情久配不孕，妊娠母豬流產，產死胎、木乃伊胎和新生仔豬死亡的臨床表現，臨床診斷很難區分。根據檢測結果顯示PRRSV、PRV、PPV有交叉感染的情況，使用熒光RT-PCR的方法能夠準確地鑒別病毒，從而采取合理的預防治療手段。對有臨床癥狀的豬要及時隔離治療并做好消毒滅源工作，以防疾病的傳播和出現繼發感染。

在生豬屠宰場中檢出PRRSV、PRV、PPV等病毒，說明臨床健康豬存在帶毒現象，建議豬場定期開展病原學檢測，以便有效防止病原的傳播。

ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等病原引起的病毒性疾病在臨床上無特效藥物，主要通過接種疫苗進行預防，但為了防止大腸桿菌、沙門菌等繼發感染，在發生疫病時常用抗菌素和磺胺類藥物進行防治，可以減少發病率和死亡率。通過有效的檢測手段對病原進行準確、及時的監測和診斷是防控疫病的重要環節。在生產中可采取以下措施：嚴禁從暴發疫病的地區引進種豬；對于購入的豬應立即隔離觀察并進行血清學或病原學檢查；制定和實施科學合理的免疫程序；定期開展臨床檢查、實驗室檢測和消毒滅源工作。

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基金項目：酒泉市科技局科技支撐計劃項目——PRRS（豬繁殖與呼吸綜合征）的防治技術研究與應用（項目編號：2023CA2007）

作者簡介：張溪（1988－ ），女，碩士，獸醫師，主要從事動物防疫、病原學監測、免疫抗體檢測等工作；E-mail：515801697@qq.com

*通信作者：張翠花（1981－ ），女，本科，獸醫師，主要從事動物防疫、病原學監測、免疫抗體檢測、疫情報告及分析等工作；E-mail：350509808@qq.com