相同提取條件下野生大球蓋菇羊肚菌馬鞍菌多糖含量的比較研究

李文文， 努爾買買提，韓大勇，石 越

（1.伊犁師范大學 微生物資源保護與開發利用重點實驗室，新疆伊寧 835000；2.伊犁師范大學 生物與地理科學學院，新疆 伊寧 835000）

1 概述

1.1 大球蓋菇

1.1.1 大球蓋菇種屬及外形特征

大球蓋菇（Stropharia rugoso-annulata）別稱皺環球蓋菇（Crinkled global mushroom），隸屬真菌界，擔子菌亞門（Basidiom ycotina）、層菌綱（Hymenomycetes）、同擔子菌亞綱（Homobasidiomycetes）傘菌目（Agaricales）、球蓋菇科（Strophariaceae）、球蓋菇屬（stropharia），其子實體單生、叢生或群生，中等至較大，單個菇團可達數千克。菌蓋近半球形，后扁平，直徑5～45 cm；菌蓋肉質，濕潤時表面觸感具有黏性。幼嫩子實體剛開始為白色，常有乳頭狀的小突起，隨著子實體長大，成熟菌蓋漸變成紅褐色或暗褐色，老熟后褪為褐色至灰褐色。菌蓋上有纖維狀鱗片，隨著子實體的生長成熟而逐漸消失。菌蓋邊緣內卷，常附有菌幕殘片。菌肉肥厚，色白。菌褶直生，排列密集，初為污白色，成熟后變成灰白色，隨菌蓋平展，逐漸變成褐色或紫黑色。菌柄近圓柱形，靠近基部稍膨大，柄長5～20 cm，柄粗0.5～4.0 cm，菌環以上接近白色，接近光滑，菌環以下有黃色細條紋。

大球蓋菇見圖1。

圖1 大球蓋菇

1.1.2 生活習性

大球蓋菇適應能力較強，高低溫都可生長，但是兩者培育出的菌種外形稍有不同，溫度高時生長快，菇蓋較小且薄，產量較低。溫度低時生長慢，菇蓋較厚，菇質更高，溫度在25 ℃左右生長環境較適宜，在子實體生長期間需要光照，以此來沉淀菇身色素，增加菌種色澤，提高品質。

1.1.3 分布地

大球蓋菇在主要分布在我國新疆、臺灣、香港、四川、陜西、甘肅、云南、吉林、西藏等地。

1.1.4 藥用價值

大球蓋菇對人體有較大的好處，子實體中含有大量的優質蛋白、多糖及其各種礦物質，這些物質經過血液流通，可清除人體血液中的膽固醇、降血壓、軟化血管，還可促進消化，增強人體免疫力。

1.2 羊肚菌

1.2.1 羊肚菌種屬及外形特征

羊肚菌（Morchella esculenta）別稱羊肚蘑、編笠菌、羊肚菜，隸屬真菌界，子囊菌門（Ascomycota）、子囊菌亞門（Ascomycotina）、盤菌綱（Discomycete）、盤菌目（Pezizale）、羊肚菌科（Morchella division）、羊肚菌屬（Morchella），其子實體菌蓋接近球形、橢圓形或卵形，可高達10 cm，其頂端鈍圓，菌種表面有類似羊肚狀的凹坑，凹坑深度不定，呈蛋殼色或淡黃褐色，柄近圓柱形，接近白色，中間呈空心，圓筒形。

羊肚菌見圖2。

圖2 羊肚菌

1.2.2 生活習性

羊肚菌喜低溫、高濕環境，在這種環境下易萌發子實體，所以野生羊肚菌子實體的生長時間一般在每年3—5 月或8—9 月。有研究表明，羊肚菌的野外生長條件主要取決于上一年11—12 月份的降雨量，而羊肚菌生長的快慢取決于當年3—5 月份3～5 cm表層土壤溫度是否接近11 ℃。因此，羊肚菌的初生期與初生期地區的溫度、降雨量和降雨時間有很大關聯。羊肚菌多生長在土壤濕潤或降雨量多而且容易保濕的環境中。光線對子實體的形成有一定的促進作用，子實體的生長發育具有趨光性。足夠的氧氣和通風良好的場所是保證羊肚菌正常生長發育的必要條件。

1.2.3 分布地

羊肚菌在我國的分布及其廣泛，北至東北三省，南至廣東、福建、臺灣，東至山東，西至新疆、西藏、寧夏、貴州共28 個省、市、自治區。

1.2.4 藥用價值

羊肚菌含有大量的氨基酸、蛋白質、脂類、維生素、碳水化合物及礦物質，同時羊肚菌還含有可提高免疫力與抗腫瘤作用的多糖，且有促進腸胃蠕動、幫助消化、提神醒腦、補腎壯陽的功效。

1.3 馬鞍菌

1.3.1 馬鞍菌種屬及外形特征

馬鞍菌（Ascomycetes），別稱雞冠子，隸屬真菌界，子囊菌綱（Ascomycetes）、盤菌目（Pezizale）、馬鞍菌科（Saddle bacteria families），其子實體菌蓋呈馬鞍形，寬約2～4 cm，表面呈褐色或者近乎黑色，菇傘表面光滑或呈卷曲狀，傘邊緣與柄分離，柄呈圓柱形，內呈空心狀，長4～9 cm。

馬鞍菌見圖3。

圖3 馬鞍菌

1.3.2 生活習性

馬鞍菌生長在夏季的4—5 月份，一般叢生，喜炎熱干旱環境，這種特有的環境使其肉質鮮美、營養豐富。

1.3.3 分布地

馬鞍菌生長時分為單生或群生，其主要分布在我國新疆、河北、山西、黑龍江、江蘇、浙江、西藏、陜西、甘肅、青海、四川等地。

1.3.4 藥用價值

馬鞍菌內含有大量的蛋白質、多糖、皂苷及大量礦物質，這些物質進入人體后激活人體內抗體，增強免疫力，其中礦物質元素與人體內自由基發生反應，延緩人體衰老，同時馬鞍菌還可調節人體內分泌，增強人體胰腺功能，可降低糖尿病的發生率。

2 試驗過程

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗材料

自然曬干子實體大球蓋菇、羊肚菌、馬鞍菌3 種菌種；葡萄糖、濃硫酸、苯酚、石油醚、95%無水乙醇、三氯乙酸、果膠酶。

2.1.2 儀器設備

HH-S6 型數顯恒溫水浴鍋，江蘇金怡儀器科技有限公司產品；UPR-II-15TNZ 型優普系列超純水機，四川優普超純科技有限公司產品；RV 8 S096 型旋轉蒸發儀，上海愛郎儀器有限公司產品；H1750R 型高速臺式冷凍離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司產品；DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海齊欣科學儀器有限公司產品；TU-1901 型全波段紫外分光光度計、布氏漏斗，北京譜析通用儀器有限公司產品。

2.1.3 試驗方法

取自然曬干的3 種子實體各20 g，研磨成粉末狀，分3 次倒入濾紙疊好的紙包中，上下封口，將濾紙包塞入提取管中，紙包底部盡量與提取管底端接觸，不可高于虹吸管，將石油醚倒入提取瓶中，其量2/3 左右即可，抽提6～8 h，用玻璃棒蘸取提取管中的石油醚至無脂肪即可。提取結束后將濾紙包用鑷子夾出放入小燒杯中，將小燒杯放入通風櫥中通風，待濾紙包干燥以后，將菌種粉末倒入燒杯中，加果膠酶10 mg，蒸餾水60 mL，于40 ℃條件下靜置2 h 后取出，加入蒸餾水100 mL，用玻璃棒攪勻，于100 ℃沸水中水浴2 h，用布氏漏斗進行第1 次抽提，第1 次抽提結束后將濾渣回收，加入蒸餾水100 mL，沸水浴1 h，再次抽提，第3 次加入蒸餾水50 mL，沸水浴30 min 再次進行抽提，將3 次濾液合并，將濾液倒入旋轉蒸發儀中進行濃縮，濃縮至原體積的1/3 左右，加入濃縮體積后7%的2 mol/L三氯乙酸溶液，充分振蕩使其混合均勻，將其放入4 ℃環境中靜置15 h 左右，將上清液用膠頭滴管吸出，溫度4 ℃條件下以轉速12 000 r/min 離心10 min，將離心后的上清液倒入燒杯內，加入3 倍體積的95%的無水乙醇，再次于4 ℃環境中靜置15 h 左右進行分層，將上層液體清除，下層沉淀于60 ℃烘箱烘干即為菌種多糖。

2.2 葡萄糖標準溶液的制備

精確稱量葡萄糖10 mg，加入蒸餾水定容至100 mL，分別取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 mL于試管中，加蒸餾水于1 mL，再加入質量分數為6%的苯酚溶液1 mL，硫酸5 mL，靜置10～15 min混合均勻，沸水浴加熱20～25 min，冷卻至室溫，將分光光度計調至波長490 nm 處測吸光度，并繪制出標準曲線。

葡萄糖標準曲線見圖4。

圖4 葡萄糖標準曲線

2.3 多糖樣品總含量的測定

精確稱量粗多糖10 mg，加入蒸餾水定容到100 mL，取多糖溶液1 mL，同上2.2 過程所示，于波長490 nm處測吸光度，根據上述葡萄糖標準曲線計算出樣品總糖含量。

2.4 多糖提取液多糖含量的測定

精確稱量3 種菌種各1 g，研磨成粉末狀，同2.1 試驗方法過程所示，靜置分層以后，取上層清液各1 mL，加蒸餾水定容至100 mL，取此溶液1 mL，同2.2 過程所示，于波長490 nm 處測吸光度，根據上述葡萄糖標準曲線計算出提取液中的糖含量。

3 結果與分析

3.1 葡萄糖標準曲線

經計算葡萄糖標準曲線為Y=8.247 6X+0.050 8，R2=0.999 1。經試驗測定，測得大球蓋菇的吸光度為0.311，將吸光度帶入葡萄糖標準曲線得大球蓋菇的葡萄糖質量濃度為0.032 mg/mL。

3.2 換算因子公式

式中：W1——大球蓋菇菌種粗多糖的質量，10 mg；

C1——粗多糖溶液中葡萄糖質量濃度，0.032 mg/mL；

D——稀釋倍數，100。

將上述數據帶入公式得換算因子F=3.13。

同上3.1 計算過程得，羊肚菌吸光度為0.276，葡萄糖質量濃度為0.027 mg/mL，換算因子為3.7；馬鞍菌吸光度為0.305，葡萄糖質量濃度為0.031 mg/mL，換算因子為3.22。

3.3 多糖含量測定公式

式中：C2——大球蓋菇多糖提取液中葡萄糖質量濃度，0.219 mg/mL（計算過程同3.1）；

D——稀釋倍數，100；

F——換算因子，3.13；

W2——大球蓋菇多糖提取液樣品質量，1 g。

經計算得大球蓋菇多糖含量為6.7%，羊肚菌多糖含量為8.1%，馬鞍菌多糖含量為7.1%。

4 結論與分析

4.1 結論

采用熱水浸提法提取不同菌種多糖，該方法簡單且效率高，不會輕易破壞多糖內部結構，使得試驗結論更具有真實性，以3 種不同菌種做比較，測其多糖含量，以蒸餾水作對比，采用苯酚硫酸法測3 種不同菌種的吸光度。由以上結果分析可得，在同種條件下3 種菌種吸光度不同，即提取的糖含量不同，故多糖總含量不同，羊肚菌多糖含量明顯高于大球蓋菇和馬鞍菌糖含量，其次是馬鞍菌，大球蓋菇糖含量最少，可看出多糖提取液顏色越深，糖含量越高。

多糖提取液見圖5。

圖5 多糖提取液

4.2 分析

造成此結果可能與不同菌種生長環境不同或者生長時間不同，獲得太陽照射時間或者降雨量有差別，從而使糖含量不同，具體原因還需進一步研究。目前，對多糖的研究不斷深入，發現多糖能提高免疫力、抗癌，其中礦物質元素與人體內自由基發生反應，延緩人體衰老，同時還可調節人體內分泌、增強人體胰腺功能，可降低糖尿病的發生率，可將菌種多糖應用到日常生活中。通過3 種菌種多糖做對比，可知哪種菌種含糖量最高，營養價值更高，為日后人們進一步研究多糖含量奠定基礎。例如，做成提高免疫力功能性飲料或者提高免疫力口服液或者用于食品等，使大自然的產物發揮最大的作用。菌種多糖無疑會成為開發健康產品的最佳原料選擇，市場前景非常廣闊。