桿狀病毒
- 昆蟲桿狀病毒及其應用研究進展
物殺蟲劑(如桿狀病毒殺蟲劑)因其具有特異性高、易于生物降解、對哺乳動物和環境都安全等諸多優點,在現代農業綠色防控中也逐漸受到重視[4-5]。但是野生型桿狀病毒殺蟲劑具殺蟲譜窄、殺蟲速度較慢等缺陷,這在很大程度上妨礙了其推廣應用。針對野生型桿狀病毒在應用中的不足之處,人們通過基因工程技術對其進行分子改良,有望改進這些缺點,從而增加這類殺蟲劑的市場競爭力。本文綜述了桿狀病毒和其作為殺蟲劑方面的應用、桿狀病毒殺蟲劑的生產工藝及在遺傳改良方面取得的進展,同時對昆蟲
河南農業大學學報 2023年6期2024-01-01
- H5亞型禽流感病毒HA蛋白在桿狀病毒-昆蟲細胞系統中的表達與純化
系統[8]、桿狀病毒昆蟲細胞表達系統[9]、病毒活載體系統[10]等,其中桿狀病毒-昆蟲細胞系統表達的蛋白因具有一定糖基化修飾、蛋白產量高、表達成本低、便于放大懸浮生產等優點而研究較多。本試驗以H5亞型AIV國內流行分支clade 2.3.4.4d的HA基因為靶基因,通過桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統進行表達,并利用Strep-tag親和層析純化重組蛋白,以提高HA蛋白純度和回收率,保持HA蛋白的生物活性。本試驗可為H5亞型AIV新型疫苗研發、HA單克隆抗體制
動物醫學進展 2023年10期2023-10-24
- 桿狀病毒誘導寄主行為研究進展
進展1.1 桿狀病毒誘導鱗翅目行為研究桿狀病毒感染鱗翅目幼蟲后會出現活動能力增強的現象，感染后的幼蟲在死亡前遷移至植物的頂部并液化，以此增加病毒顆粒的釋放，增大病毒的傳播范圍[5]。1943 年舞毒蛾的上爬行為被證明是桿狀病毒所致；1981 年舞毒蛾幼蟲的上爬行為首次被發現，感染的舞毒蛾幼蟲在死亡前遷移至樹梢，最后倒掛死亡。感染的舞毒蛾幼蟲在死亡前遷移至樹梢，最后倒掛死亡，稱為樹頂病或樹梢病，后期比較統一的叫樹頂病[6-8]。在首次量化桿狀病毒在鱗翅目系統
南方農業 2023年13期2023-10-16
- 桿狀病毒誘導寄主行為研究進展
機制，總結了桿狀病毒誘導鱗翅目行為和其他寄生物誘導寄主行為的研究進展，分析了egt基因、ptp基因和光照在桿狀病毒誘導鱗翅目上爬行為中的作用及桿狀病毒誘導舞毒蛾上爬行為機制，探討桿狀病毒誘導鱗翅目幼蟲上爬行為致病機制。關鍵詞 桿狀病毒；行為調控；樹頂??；egt基因；ptp基因中圖分類號：S476+.13 文獻標志碼：C DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.13.002寄生物通過操控寄主一系列行為變化來促進自己的傳播和擴散。
南方農業·上旬 2023年7期2023-10-09
- 桿狀病毒miRNA研究進展
調控[3]。桿狀病毒(Baculovirus)是一類具有桿狀核衣殼的雙鏈DNA病毒，具有嚢膜包裹，其整個生命周期會產生出芽型病毒(budded virion，BV)和包涵體衍生型病毒(occlusion-derived virion，ODV)2種形態的病毒粒子，分別具有不同的生物學意義[5]。桿狀病毒的宿主范圍包括鱗翅目、膜翅目和雙翅目等昆蟲，是自然環境中昆蟲種群和數量的重要調節因子[6-10]。因此，其對農業害蟲防治具有重要的研究應用價值，已被開發為生物
農業與技術 2023年1期2023-01-31
- MicroRNA 在桿狀病毒侵染過程中的功能研究進展
RNA，包括桿狀病毒[14]。昆蟲桿狀病毒隸屬于桿狀病毒科，因其具宿主專一性，可被研制成對環境安全的病毒殺蟲劑[15]。桿狀病毒感染昆蟲宿主后改變宿主體內miRNA 的表達譜，一方面，病毒利用miRNA 操縱宿主和自身基因的表達；另一方面，宿主利用miRNA 以抗病毒的作用方式改變病毒對宿主細胞的感染[16]。桿狀病毒-昆蟲的相互作用在農林業、基因治療和基因工程疫苗等方面具有重要的應用價值，而miRNA 是桿狀病毒中研究較少的調節性RNA，在害蟲防治、益蟲
河南農業科學 2022年10期2022-12-20
- 桿狀病毒載體滅活方法的研究進展
33000）桿狀病毒基因組為大型環狀閉合雙鏈DNA結構，桿狀病毒科包含顆粒體病毒屬（Granulovirus, GV）和核型多角體病毒屬（Nucleopolyhedrovirus, NPV），形態表現為桿狀，寬約30～60 nm，長約250～300 nm，主要以包涵體來源病毒（Occlusionderivedvirus, ODV）和出芽型來源病毒（Buddingvirus, BV）[1]。昆蟲細胞桿狀病毒表達系統（Insect cellbaculoviru
山東畜牧獸醫 2022年10期2022-12-06
- N9亞型禽流感病毒NA蛋白在昆蟲細胞中的表達與鑒定
。本研究利用桿狀病毒—昆蟲細胞表達系統表達具有反應原性的AIV N9 蛋白，為其N9 抗體檢測試劑盒的研發奠定物質基礎。1 材料與方法1.1 主要實驗材料重組質粒pCAGGS-N9（N9 基因來自DK/HuN/S11670/2015（H11N9））、sf21 細胞、pFastBacHT A 和鼠源N9 蛋白單克隆抗體（MAb）由本實驗室保存；DH5α 和DH10Bac 感受態細胞均購自生工生物工程（上海）有限公司；昆蟲細胞轉染試劑Cellfectin、Gr
中國預防獸醫學報 2022年7期2022-10-06
- 桿狀病毒新的分類地位和書寫方式
38000）桿狀病毒是一類專一性寄生昆蟲的病毒，其病毒粒子呈桿狀，具有囊膜結構，基因組為閉合環狀雙鏈DNA，大小為80～180 kb，編碼100～200個基因，核衣殼直徑約30～60 nm、長度約250～300 nm[1]。桿狀病毒由于對宿主的高度特異性，已經被作為高效、安全的生物殺蟲劑廣泛應用[2]。桿狀病毒還被開發成為用于外源基因的高效真核表達載體以及新型基因治療載體[3]。在2020年以前，桿狀病毒只分類到科。2020年國際病毒分類委員會（Inter
中國生物防治學報 2021年4期2021-10-22
- 重組H5N1 流感血凝素桿狀病毒滴度熒光定量PCR檢測方法的建立、驗證及應用
100176桿狀病毒表達載體系統（baculovirus expressionvector system，BEVS）是以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為受體的一種真核表達系統，具有效率高、容量大、表達產物能進行折疊和修飾等特點［1-3］。自20 世紀80 年代建立以來，BEVS 已經發展為成熟的生物制品生產平臺，有多種產品獲批，包括獸用疫苗、人用疫苗及治療產品［4-8］。桿狀病毒不會刺激哺乳動物產生強烈的免疫應答，也不會對其造成功能性損傷，這些特性使其
中國生物制品學雜志 2021年10期2021-10-20
- 高密度懸浮轉染方式高效獲得重組桿狀病毒
71003)桿狀病毒表達載體系統(Baculovirus expression vector system, BEVS)是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，為重組蛋白單體、多聚體蛋白復合物、病毒樣顆粒、膜蛋白以及對哺乳動物細胞有毒的蛋白提供了通用的表達平臺，廣泛應用于醫學、農學和獸醫學等各個領域[1]。相對于原核、酵母和CHO等表達系統，BEVS具有一定優勢：桿狀病毒專一寄生于無脊椎動物，安全性高；可對重組蛋白進行正確折疊和翻譯后修飾，獲得具有生
畜牧與獸醫 2021年8期2021-08-06
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白在昆蟲細胞中的可溶性表達
獲得4株重組桿狀病毒，獲得了可溶性表達的GP5蛋白，證明其具有的較好抗原性。1 材料與方法1.1 主要材料pFastBacTMDual表達系統和Lipofectamine 3000為Invitrogen公司產品。PRRSV陽性血清為本實驗室制備保存。His單克隆抗體購自翼飛雪生物科技有限公司。SPA-HRP、羊抗小鼠IgG-HRP購自武漢博士德生物工程公司。Sf-900Ⅲ SFM無血清培養基為Gibco公司產品。Mini plasmid、DNA凝膠回收試劑
畜牧與獸醫 2021年6期2021-05-28
- p53 基因重組桿狀病毒載體的構建與表達的研究
45001)桿狀病毒是一種基因組為80 ～160 kb 的環狀DNA 雙鏈病毒。根據包涵體的形態和病毒誘導的細胞病理學特征，桿狀病毒分為核多角體病毒屬（nucleopolyhedrovirus,NPV）和顆粒病毒屬（granulovirus, GV）。桿狀病毒表達系統（baculovirus expression vector systerm, BEVS）是一種利用桿狀病毒作為載體，轉染昆蟲培養細胞或蟲體中表達外源蛋白的真核表達系統。桿狀病毒具有宿主專一性
醫藥前沿 2021年6期2021-05-24
- 利用桿狀病毒實現外源基因在哺乳動物細胞內表達
34025）桿狀病毒是一類專職感染無脊椎動物的病毒，病毒呈桿狀，具有囊膜。在其生活周期中共產生兩種形態不一的病毒粒子，出芽型病毒粒子和包埋型病毒粒子，分別負責病毒的口服感染和系統感染兩個環節［1］。桿狀病毒的基因組為雙鏈環狀DNA，大小為80～180 kb，編碼150 多個病毒蛋白。桿狀病毒分為4 個病毒屬：甲型、乙型、丙型和丁型［2］。桿狀病毒是目前應用最廣泛的病毒之一。作為安全、高效的生物殺蟲劑被廣泛應用于農林業病蟲害的防治［3，4］；作為表達載體實現
湖北農業科學 2020年23期2020-12-30
- 藍舌病病毒血清8型NS3蛋白在昆蟲桿狀病毒系統中的表達與鑒定
試驗利用昆蟲桿狀病毒系統表達藍舌病病毒8型NS3蛋白，并通過間接免疫熒光、Western Blot和間接ELISA等手段對其反應原性進行鑒定。1 材料與方法1.1 菌株、血清和細胞 pFastBac-HTA質粒為Invitrogen公司產品；BTV綿羊陽性血清、兔抗藍舌病病毒NS3蛋白(原核表達)多抗和昆蟲細胞Sf9均由本實驗室保存。1.2 主要試劑 Cellfectin?II Reagent、SF-900Ⅲ培養基、PureLinkTMHiPure質粒純化
中國獸醫雜志 2020年4期2020-09-29
- 內皮抑素和血管抑素融合基因在桿狀病毒中的表達及抗肝癌效果評價
病原體相比，桿狀病毒是一種昆蟲病毒，對哺乳動物和人類無致病性，但能有效進入多種哺乳動物細胞這一特點使其成為良好基因傳遞潛能的載體。因此，本研究為了提高抗血管生成基因治療的效果和安全性，擬以桿狀病毒為載體，表達由人內皮抑素和血管抑素組成的融合蛋白（human endostatin and angiostatin，hEA），以此來評價桿狀病毒介導的hEA 的抗血管生成功能和抗肝癌效果。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 質粒、菌株和細胞pFastBac DU
實用醫學雜志 2020年15期2020-08-26
- 重組桿狀病毒載體在基因治療中的應用*
、細菌載體、桿狀病毒等新的載體。但是實現外源基因長期穩定的表達、靶向性的表達還需進行更多的探索和研究[1]。本文對近年來重組桿狀病毒基因治療載體的研究以及其在癌癥基因治療中的應用進行總結。1 重組桿狀病毒及其表達系統桿狀病毒是一種環狀、閉合雙鏈DNA病毒，基因組大小為80～160 kb[2]，編碼90～180個蛋白，在已測序的桿狀病毒中發現31個核心基因[3]。根據包涵體的形態和病毒誘導的細胞病理學特征，桿狀病毒分為核多角體病毒屬(NPV)和顆粒病毒屬(G
國際檢驗醫學雜志 2020年14期2020-03-06
- 人IER5基因在昆蟲桿狀病毒表達系統中的表達與鑒定
Sf9細胞；桿狀病毒表達系統；鑒定早期快速反應基因5(immediate-early response gene 5，IER5)是早期慢反應基因家族的一員，最早是由Williams等人發現并命名[1]。該基因位于1號染色體長臂2區5帶3亞帶(1q25.3)，含2 350個核苷酸，無內含子。IER5基因的開放閱讀框編碼327個氨基酸，和其他早期慢反應基因家族pip92、IER2、ETR101一樣，氨基酸末端含豐富的脯氨酸，但與pip92、IER2、ETR10
癌變·畸變·突變 2020年1期2020-02-12
- 桿狀病毒在癌癥基因治療方面的應用
心技術之一，桿狀病毒一直就是備受關注的一類基因轉導載體。經過研究者們的深入研究發現，桿狀病毒在肝癌、胃癌、黑色素瘤及腦腫瘤等的基因治療中具有較強的可行性。目前還可以進一步解決桿狀病毒引起的體內補體反應，同時也能不斷提高其轉導和表達效率。本文將著重介紹桿狀病毒在癌癥基因治療中的應用?！局袌D分類號】R730.5????? 【文獻標識碼】A????? 【文章編號】1672-3783（2019）03-0073-011 桿狀病毒1.1桿狀病毒桿狀病毒是節肢動物的病源
健康必讀（上旬刊） 2019年3期2019-10-15
- 豬流行性腹瀉病毒S1-NTD蛋白表達及其免疫原性研究
內[16]。桿狀病毒是昆蟲的病原體，其所具有的一些典型特征(如在晚期基因高水平表達)使其非常適合作為外來基因表達的載體[17-18]。為推進PEDV基因工程疫苗的探索和創新，本研究利用昆蟲桿狀病毒表達系統表達PEDV S1-NTD蛋白，并驗證了其免疫原性，旨在為利用昆蟲桿狀病毒表達系統制備PEDV基因工程亞單位疫苗提供依據。1 材料與方法1.1 材 料pFastBac Dual載體、大腸桿菌K-12菌株TG1、大腸桿菌DH5α、大腸桿菌DH10Bac、昆蟲
西北農林科技大學學報（自然科學版） 2019年9期2019-09-25
- 藍舌病病毒血清I型VP2與VP5、VP3與VP7兩組蛋白在桿狀病毒系統中的表達與鑒定
以及通過昆蟲桿狀病毒表達系統制備的類病毒顆粒（virus-like particles，VLP）亞單位疫苗[5]等報道。我國存在多種BTV血清型毒株的流行，不同血清型BTV毒株對綿羊的致病性存在較大差異。BTV1型為我國廣泛流行的血清型之一，對綿羊具有較強的致病性[13]，因此開發安全高效的BTV1型疫苗，對我國BT防控具有重要意義。本實驗室前期成功開發了BTV1型滅活疫苗，并在綿羊上取得了良好的免疫保護效果[14]。但BTV1型基因工程疫苗的研究在我國尚
中國動物檢疫 2019年5期2019-05-21
- 昆蟲桿狀病毒表達載體系統在疫苗研究中的應用進展
少偉,?昆蟲桿狀病毒表達載體系統在疫苗研究中的應用進展榮芮1，李婷婷1，張玉云2，顧穎1,2，夏寧邵1,2，李少偉1,21 廈門大學 生命科學學院 國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心，福建 廈門 361102 2 廈門大學 公共衛生學院 分子疫苗學與分子診斷學國家重點實驗室，福建 廈門 361102榮芮, 李婷婷, 張玉云, 等. 昆蟲桿狀病毒表達載體系統在疫苗研究中的應用進展. 生物工程學報, 2019, 35(4): 577–588.Rong R
生物工程學報 2019年4期2019-04-23
- 血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆蟲細胞中的表達及其免疫原性分析
本研究擬利用桿狀病毒表達系統和懸浮培養工藝克隆和表達FAdV-4 fiber-2蛋白，并對其進行初步的免疫效力評價，為研制FAdV-4亞單位疫苗研究提供實驗依據。1 材料與方法1.1 主要實驗材料 FAdV-4由本實驗室分離并保存；Bac-to-Bac表達系統購自Invitrogen公司；Sf9細胞、High Five細胞均為本實驗室保存；pMD19-T質粒、TaqDNA聚合酶、DNA Marker、T4連接酶均購自TaKaRa公司；質粒小提質粒試劑盒、A
中國預防獸醫學報 2019年12期2019-04-17
- 雞GM-CSF和IL-2增強表達新城疫病毒F蛋白的重組桿狀病毒疫苗的免疫效果
F蛋白的重組桿狀病毒疫苗的免疫效果于航，高冬妮，申燕，劉穎，平文祥，葛菁萍黑龍江大學 生命科學學院 微生物省高校重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150080于航, 高冬妮, 申燕, 等. 雞GM-CSF和IL-2增強表達新城疫病毒F蛋白的重組桿狀病毒疫苗的免疫效果. 生物工程學報, 2018, 34(9): 1442–1452.Yu H, Gao DN, Shen Y, et al. Efficacy enhancement of a Baculovirus-
生物工程學報 2018年9期2018-10-08
- 昆蟲桿狀病毒基因組學研究進展
50002)桿狀病毒屬于桿狀病毒科(Baculoviridae)，是一類寄生于節肢動物(Arthropoda)的專一性病原微生物，其宿主主要是鱗翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)和雙翅目(Diptera)的昆蟲。已經完成測序的基因組大小為80～180 kb不等，編碼89～181個開放閱讀框(ORF)[1]，被包裹在長度為230～385 nm、直徑為40～60 nm的桿狀核衣殼中[2-3]。目前已從800多種昆蟲中分離鑒定出60
河南農業科學 2018年9期2018-09-28
- 驅動蛋白Kif4A桿狀病毒表達系統的構建與優化
隆，抽提得到桿狀病毒基因組。由于桿狀病毒基因組較大，標準的轉染方法轉染效率較低，對該方法進行了優化。將桿狀病毒基因組通過標準的和優化的轉染方法轉染到草地夜蛾卵巢細胞SF9中，經培養得到表達驅動蛋白Kif4A的初代桿狀病毒。結果 通過檢測初代桿狀病毒的滴度， 我們發現，與標準的轉染方法相比，優化的轉染方法所得到的初代桿狀病毒的滴度更高，相同稀釋度感染條件下表達的Kif4A蛋白水平更高。結論 本研究成功構建了Kif4A桿狀病毒表達系統，并優化了SF9細胞轉染的
科技資訊 2018年27期2018-03-26
- 昆蟲桿狀病毒表達系統在動物疫苗研究的應用
5)0 引言桿狀病毒表達系統自建立以來廣泛應用于生物檢測、疫苗生產、基因治療等方面。昆蟲細胞-重組桿狀病毒系統提供了一種蛋白質生產系統，生產可溶形式的重組蛋白，并能高效表達。表達的蛋白質具有大多數的翻譯后修飾的功能，因此產生的膜蛋白具有正確的折疊構象，這是該方法優于原核表達系統的主要特點[1]。昆蟲桿狀病毒表達系統主要是針對桿狀病毒構建載體，與哺乳動物細胞表達系統相比大大縮短了從基因克隆到蛋白表達的時間。桿狀病毒基因組較大，能夠克隆大的DNA片段，從而能夠
畜禽業 2018年6期2018-02-12
- 兔病毒性出血癥重組桿狀病毒HP-VP60的構建及鑒定
0蛋白的重組桿狀病毒HP-VP60，并對其表達產物的血凝效價及免疫原性等進行鑒定，結果顯示該重組桿狀病毒的表達產物具有良好的免疫原性，可用于制備RHDV亞單位疫苗。1 材料與方法1.1 質粒、菌種和細胞 pT-VP60質粒（含有RHDV LQ株VP60基因）由華派生物質檢研發中心構建；pFastBacDual桿狀病毒轉移載體、DH10Bac感受態細胞和Sf9細胞由華派生物質檢研發中心保存。1.2 主要試劑 DNA凝膠回收試劑盒、質粒提取試劑盒、醋酸纖維素膜
四川畜牧獸醫 2018年1期2018-01-17
- 昆蟲桿狀病毒表達載體系統的應用與展望
摘 要：昆蟲桿狀病毒表達載體系統具有生物安全性高、能容納較大外源基因片段并實現多基因共表達、有完備的翻譯后加工修飾系統等特點，因而得到廣泛的應用。近年來，隨著重組桿狀病毒構建技術、昆蟲細胞培養技術的不斷發展和改進，加大了昆蟲桿狀病毒表達載體系統在疫苗制備、治療性抗體、藥物研發和基因治療中的應用力度。本文綜述了桿狀病毒表達載體的研究現狀和應用范圍，討論了目前桿狀病毒表達載體重組蛋白易降解的問題。隨著科技的進步，對桿狀病毒載體的研究與優化會更加深入，昆蟲桿狀病
中國科技縱橫 2017年22期2018-01-04
- 昆蟲桿狀病毒組學研究進展
002)昆蟲桿狀病毒組學研究進展梁振普，李路軍，張俊慶，劉雅靜，吳 慧，李鵬娟，馮文霞，張小霞*(河南農業大學 生命科學學院，河南 鄭州 450002)桿狀病毒(baculoviruses)是一類專性感染無脊椎動物的共價閉合雙鏈環狀DNA昆蟲病毒。由于桿狀病毒對環境和人畜無害，其作為生物農藥在生物防治方面發揮著重大作用。此外，桿狀病毒還可作為一種真核表達載體，廣泛用于藥物研發、疫苗生產,以及作為基因轉移載體用于基因治療等方面。綜述了桿狀病毒的基因組學及蛋白
河南農業科學 2017年8期2017-09-01
- 昆蟲桿狀病毒egt基因研究進展
058）昆蟲桿狀病毒egt基因研究進展王海萍，吳小鋒＊（浙江大學 動物科學學院，浙江 杭州 310058）桿狀病毒是一類大分子的雙鏈環狀DNA病毒，其編碼的蛻皮甾體尿苷二磷酸葡萄糖基轉移酶基因（egt）在感染昆蟲后表達產生EGT酶。EGT酶的催化使宿主體內的蛻皮激素失活，阻止幼蟲蛻皮，從而利于病毒自身的繁殖。已有研究發現，敲除egt基因的桿狀病毒感染的昆蟲，死亡時間縮短，向上攀爬行為減弱。最近的研究還表明轉egt基因的家蠶蠶蛹發育遲緩。從分子水平對EGT酶
蠶桑通報 2017年1期2017-08-16
- 桿狀病毒ctl基因的進化分析
值。為了揭示桿狀病毒ctl基因的進化特點，對桿狀病毒CTLs進行多序列比對分析和分類研究。結果表明，桿狀病毒CTLs可分為Ⅰ型、Ⅱ型，2種類型的CTLs都具有相同的二硫鍵骨架，但涉及昆蟲酚氧化酶抑制劑活性的酪氨酸殘基在2種類型CTLs中的數目、位置明顯不同；另外，Ⅰ型CTLs、Ⅱ型CTLs的理化性質也存在明顯差異，疏水性氨基酸平均含量分別為29.7%、21.3%，凈電荷平均值分別為-3.56、+0.507，等電點平均值分別為3.86、7.32。由此推測，Ⅰ
江蘇農業科學 2017年9期2017-07-15
- 狂犬病病毒磷蛋白在桿狀病毒中的表達及鑒定
病毒磷蛋白在桿狀病毒中的表達及鑒定鄭光來1，盧曉冉2，張永武2，張靜遠2，陳 騰2，王東方2，嚴 妍2,3，張守鋒2，扈榮良1*(軍事醫學科學院軍事獸醫研究所，吉林省人獸共患病預防與控制重點實驗室，吉林長春 130122)采用RT-PCR方法擴增出狂犬病病毒BD06株的磷蛋白(P)基因片段，將其插入桿狀病毒穿梭載體pFastBac 1獲得的pFastBac 1-P重組質粒，轉化E.coliDH10Bac成功構建出桿狀病毒表達質粒Bacmid-P，用脂質體介
動物醫學進展 2016年5期2017-01-06
- 重組桿狀病毒表達Sf-caspase-1雙鏈RNA對昆蟲細胞凋亡的影響
00)?重組桿狀病毒表達Sf-caspase-1雙鏈RNA對昆蟲細胞凋亡的影響歐艷梅，許曉東(西北農林科技大學 生命科學學院，陜西 楊凌 712100)【目的】 構建包含Sf-caspase-1反向重復序列的重組桿狀病毒vAcMNPV-dsCasp，并在草地貪夜蛾(Sf9)細胞中表達Sf-caspase-1雙鏈RNA，用以抑制Sf9細胞的凋亡，為未來優化桿狀病毒表達系統提供試驗依據?！痉椒ā?將Sf-caspase-1反向重復序列構建到pBac5上，與Ac
西北農林科技大學學報（自然科學版） 2016年11期2016-12-16
- 含FMDV中和表位的重組病毒顆粒的構建及鑒定
構建對應重組桿狀病毒，分別命名為reBAC-CAP-B，reBAC-CAP-BTB.將上述病毒顆粒轉入Sf9細胞表達，收獲重組桿狀病毒并再次感染Sf9細胞擴大病毒滴度，獲得目的蛋白CAP-B，CAP-BTB，經過SDS-PAGE，Western blot鑒定正確，透射電鏡觀察到20～30 nm大小的目的顆粒.關鍵詞:口蹄疫病毒； 豬圓環病毒； 病毒樣顆粒； 抗原表位； 桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease， FMD
復旦學報（自然科學版） 2016年3期2016-07-28
- 施馬倫貝格病毒核蛋白在昆蟲細胞中的表達
其克隆于昆蟲桿狀病毒表達載體pFastBacHTB，然后以該重組質粒轉化DH10Bac感受態細胞，得到重組穿梭質粒Bacmid-SBV-N，將該重組穿梭質粒在脂質體介導下轉染Sf 9昆蟲細胞，得到表達SBV重組N蛋白的桿狀病毒。通過SDS-PAGE和Western blot對重組N蛋白進行鑒定，表明該蛋白得到表達。本研究為以SBV核蛋白為基礎的相關檢測方法的建立提供了物質基礎。關鍵詞：施馬倫貝格病毒；核蛋白；桿狀病毒；昆蟲細胞；表達施馬倫貝格?。⊿B）是一
中國動物檢疫 2016年1期2016-07-25
- 基于宿主細胞中磷脂“自然嵌合”的桿狀病毒葉酸修飾
自然嵌合”的桿狀病毒葉酸修飾王麗英，文莉，呂誠，林毅，龐代文(武漢大學生物醫學分析化學教育部重點實驗室，化學與分子科學學院，病毒學國家重點實驗室，高等研究院，武漢430072)關鍵詞桿狀病毒;葉酸;修飾;磷脂;宿主細胞中圖分類號O652文獻標志碼A聯系人簡介:林毅，女，博士，副教授，主要從事表面分析化學及納米生物技術研究.E-mail: ylin@ whu.edu.cn桿狀病毒是節肢動物特異性的DNA病毒，具有載體容量大、增殖滴度高、易于大量擴增且對脊椎動
高等學?；瘜W學報 2016年2期2016-03-21
- 多角體包埋異源蛋白桿狀病毒表達系統的構建
包埋異源蛋白桿狀病毒表達系統的構建郭建軍， 袁 林， 曾 靜， 魏國汶， 楊一兵(江西省科學院微生物研究所，江西南昌 330096)摘要[目的]探索多角體病毒的包裝特性，構建能形成多角體包裹外源蛋白的polyh+Bac-to-Bac表達系統。[方法] 通過酶切連接的方式，將4個元件片段：作為標記的綠色熒光基因EGFP，BmCPV自身的多角體蛋白基因，用于基因表達的H1信號肽柔性連接肽， 插入到質粒FastBacDual 中，利用AcMNPV Bac-to-
安徽農業科學 2016年2期2016-03-04
- 人乳頭瘤病毒18型L1蛋白在昆蟲桿狀病毒系統中的表達
靶抗原。昆蟲桿狀病毒表達系統具有磷酸化、糖基化和蛋白切割加工修飾等功能，表達產物的生物學特性與天然產物相似，安全性較高，制備過程簡單，適用于蛋白質工程研發[3]。我們利用桿狀病毒表達系統表達L1蛋白，為進一步研究新型HPV疫苗奠定基礎。1 材料與方法1.1 材料昆蟲細胞Sf9和載體pFastBac1購自美國Invitrogen 公司；大腸桿菌DH5α和DH10Bac 由本科室保存；L1基因根據NCBI 提供的HPV18 野生型L1基因序列（NC_00135
生物技術通訊 2015年6期2015-11-29
- 桿狀病毒的DNA聚合酶
006)1 桿狀病毒桿狀病毒 (Baculovirus)是一類感染無脊椎動物的病原微生物，其基因組為閉合雙鏈環狀DNA，病毒粒子呈桿狀，其基因組大小一般為80－180 kb，編碼90－180個基因。桿狀病毒分為4個屬:α桿狀病毒屬、β桿狀病毒屬、γ桿狀病毒屬與δ桿狀病毒屬 (King et al.，2012)。桿狀病毒在一個病毒復制周期內產生兩種不同形態、不同功能的病毒，即芽生型病毒 (budded virus，BVs)和包埋型病毒 (occlusion
環境昆蟲學報 2015年2期2015-11-22
- 豬圓環病毒 2 型Cap蛋白在桿狀系統中的表達與純化
中，獲得重組桿狀病毒。經過噬斑克隆實驗，獲得穩定、高效表達Cap蛋白的重組桿狀病毒，病毒滴度可達到1×109pfu/mL。免疫印跡實驗表明重組Cap蛋白可與PCV2 陽性血清發生特異性反應， 證明該重組蛋白具有良好的免疫活性反應。本研究為提高PCV2滅活疫苗病毒滴度及免疫原性奠定了基礎。豬圓環病毒2型；桿狀病毒；噬斑；純化豬圓環病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）感染可引起斷奶仔豬多系統綜合征（postweaning m
中國動物傳染病學報 2015年4期2015-11-19
- 重組鴨干擾素的研發及其在鴨病防治中的應用
1.3 重組桿狀病毒的獲得 提取高質量的重組Bacmid質粒，在脂質體介導下轉染sf9細胞，盲傳3代后，提取病毒2.2 重組Bacmid質粒EcoRⅠ、SalⅠ雙酶切PMDDIFN-γ，將DIFN-γ克隆至供體質粒pFastBacTM1EcoRⅠ、SalⅠ位點。將重組供體質粒轉化DH5α感受態細胞，通過Amp+抗性篩選陽性克隆，堿裂解法提取質粒。重組質粒pFBac-DIFN-γ經EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切，消化得到約4760bp和550bp兩個片段(圖2)
山東畜牧獸醫 2015年8期2015-06-11
- 桿狀病毒囊膜蛋白介導病毒侵染宿主細胞中的作用
02460）桿狀病毒（Baculovirus）是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，在分類學上屬于桿狀病毒科（Baculoviridae），其宿主主要包括鱗翅目（Lepidoptera）、膜翅目（Hymenoptera）和雙翅目（Diptera）昆蟲?；?span class="hl">桿狀病毒全基因組序列構建的系統進化樹，將桿狀病毒科劃分為4 個屬：Alpha 桿狀病毒屬（以鱗翅目昆蟲為特異宿主的NPV），Beta桿狀病毒屬（以鱗翅目昆蟲為特異宿主的GV），Gamma桿狀病毒
中國獸醫雜志 2015年1期2015-01-25
- 揚州優邦生物公司豬圓環疫苗獲批
圓環病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗（CP08 株）獲批。豬圓環病是全球公認的危害養豬業的重大經濟影響性疾病，優邦公司聯合研制的豬圓環病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗（CP08株），采用領先的重組桿狀病毒-昆蟲細胞（Sf9）基因工程表達技術和懸浮培養工藝，是基因工程真核表達亞單位疫苗。據悉，優邦公司為該產品累計投入研發和技改資金約4900萬元。
中國飼料 2015年22期2015-01-25
- 家蠶桿狀病毒侵染機制研究獲得新進展
模式昆蟲，與桿狀病毒相互作用的研究具有多方面的應用價值。家蠶和桿狀病毒相互作用機制的闡明對害蟲的生物控制，外源蛋白的真核表達和宿主免疫抗性等方面都有十分重要的意義。西南大學家蠶基因組生物學國家重點實驗室以桿狀病毒和家蠶為模型，揭示病毒在侵染過程中與宿主的相互作用。該項研究是實驗室繼抗病毒育種研究之后，在病毒感染機制研究取得的又一重要成果。實驗室通過分析桿狀病毒易感品系和正常大造品系發現家蠶spry基因在易感品系中低表達。我們進一步通過細胞水平的干涉和過表達
蠶學通訊 2014年3期2014-03-26
- 鯉春病毒血癥病毒糖蛋白在桿狀病毒表達系統中的表達與鑒定
病毒糖蛋白在桿狀病毒表達系統中的表達與鑒定劉紅1，鄭曉聰2，于力2，王津津2，賈鵬2，何俊強2，史秀杰2，蘭文升2，葉奕優2，劉葒2，吳志新1（1.華中農業大學水產學院，湖北武漢 430070；2.深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心，廣東深圳 518001）本實驗利用桿狀病毒表達系統表達鯉春病毒血癥病毒（SVCV）糖蛋白。將SVCV糖蛋白基因（G）插入到供體質粒pFastBacHTA中，再用構建的質粒pFastBac-G轉化E. coli DH10
中國動物檢疫 2014年6期2014-02-24
- 共表達PRRSV GP5和N蛋白重組桿狀病毒的構建與鑒定
。本研究利用桿狀病毒雙表達載體(pFastBacTMDual)同時表達HP-PRRSV GP5蛋白和N蛋白，以期更好的發揮PRRSV GP5、N抗原活性及協同作用，為PRRSV基因工程疫苗的研究奠定基礎。1 材料與方法1.1 載體、細胞、菌株與病毒 桿狀病毒載體pFastBacTMDual、昆蟲 Sf9 細胞、E．coli DH10Bac購于美國Invitrogen公司。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒廣東分離株(PRRSV GD)由中國獸醫藥品監察所提供。
中國獸藥雜志 2013年12期2013-11-23
- 桿狀病毒與宿主細胞的相互作用
21000）桿狀病毒是一類節肢動物病毒，具有高度的宿主特異性，主要寄生于鱗翅目，膜翅目和雙翅目昆蟲，其基因組為一個環狀的雙鏈DNA分子，大小約80～180 kb.桿狀病毒包括兩個屬：核型多角體病毒屬（NPV）和顆粒體病毒屬 （GV）.桿狀病毒在復制時產生兩種形態和功能都有差異的病毒粒子，即有兩種表現型：芽殖型病毒體 （budded vir us，BV）和包含體來源型病毒體 （occl usion，ODV）.病毒感染宿主細胞早期，主要產生病毒粒子BV，到了感
河北北方學院學報（自然科學版） 2012年2期2012-08-15
- 家蠶桿狀病毒表達系統研究進展
018)家蠶桿狀病毒表達系統研究進展壽 鑫1，應慧慧1，李 擎1，于 威1,2，張耀洲1,2(1.浙江理工大學 生命科學學院，杭州 310018；2.浙江省家蠶生物反應器和生物醫藥重點實驗室，杭州 310018)近年來家蠶桿狀病毒表達系統在應用和優化等方面研究有了新進展。家蠶桿狀病毒表達系統利用攜帶外源目的蛋白基因的重組桿狀病毒對家蠶及其細胞系的高效感染能力，在感染后的家蠶體內或培養細胞中大量表達目的蛋白。家蠶作為一種外源蛋白表達載體，具有與哺乳動物細胞類
絲綢 2012年9期2012-08-15
- 桿狀病毒表達載體在醫學領域中的應用進展
表達系統，即桿狀病毒表達系統(BEVS)，因其獨特的生物學特性，在過去的20年里，已作為一種真核表達載體被廣泛應用。本研究就該系統的主要特性、種類以及在醫學領域中的應用等方面進行闡述。1 桿狀病毒及其表達系統桿狀病毒是一類專門寄生于節肢動物的病原微生物。目前全世界已發現600多種桿狀病毒，其中研究最深入的是苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcNPV)。AcNPV病毒粒子成桿狀，病毒囊膜直接包被著約130 kb的雙鏈、環狀DNA分子，其全基因組序列已經測定清楚。
山東醫藥 2012年23期2012-04-13
- 表面展示雞傳染性支氣管炎病毒M 41株S1蛋白的重組假型桿狀病毒的構建
1-4］.在桿狀病毒表面展示系統中用于和外源蛋白發生融合的囊膜糖蛋白gp64，是出芽型病毒(Budded virus，BV)特有的結構蛋白，由N末端信號肽和成熟蛋白(跨膜區TM和胞質區CTD)組成［5］，介導病毒和昆蟲細胞的融合及侵染過程.gp64被開發成桿狀病毒表面展示系統來展示不同的目的蛋白，外源基因片段插入到病毒囊膜蛋白的信號肽與成熟蛋白之間，表達加工時信號肽被切除，形成的N端融合蛋白借助桿狀病毒穩定地表達并展示于感染細胞或病毒粒子的表面，篩選得到表
華南農業大學學報 2012年3期2012-03-05
- 重組桿狀病毒殺蟲劑的研究現狀與展望
3)利用昆蟲桿狀病毒(baculovirus)防治害蟲是生物防治的一項重要內容，但與化學殺蟲劑相比，野生型桿狀病毒的殺蟲譜窄、殺蟲速度慢，局限了其在生物防治中的應用。針對野生型桿狀病毒殺蟲速度慢的不足，可通過現代分子生物技術對其進行改造，以加快其殺蟲速度，從而構建出重組型的桿狀病毒。1986年，英國牛津大學的Bishop等［1］首先開始進行應用昆蟲專一性毒素基因重組桿狀病毒增強病毒殺蟲效果的試驗。20世紀80年代末期以來，重組桿狀病毒殺蟲劑的研制成為生物防
中國蠶業 2011年4期2011-02-10
- 鼠IL-2基因的克隆及其桿狀病毒表達載體的構建
2復旦大學)桿狀病毒是一類雙鏈DNA大型病毒，能夠感染600多種昆蟲，可在感染的昆蟲細胞中形成特征性的病毒包涵體。苜蓿銀紋夜蛾多角體病毒(AcMNPV)是昆蟲桿狀病毒科核多角體病毒屬的模式種，也是研究最多的桿狀病毒。桿狀病毒由于其自身的獨特性使它成為一種新型的哺乳動物細胞基因表達和基因治療的載體［1］。上世紀80年代建立的桿狀病毒—昆蟲細胞表達系統已經成為一種最常用的真核細胞表達系統。但是感染病毒作為哺乳動物細胞基因轉移載體也有一些缺點:在體內會引起補體反
山東醫藥 2011年4期2011-02-02
- Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統在BHK細胞表達鼠IL-2蛋白的研究*
to-Bac桿狀病毒表達系統在BHK細胞表達鼠IL-2蛋白的研究*黃大林 戴支凱 王 鑫 李彬彬 鐘 江△目的：利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統在BHK細胞表達重組鼠白細胞介素（IL）-2蛋白。方法：用Flag標記鼠IL-2并加入真核細胞啟動子CMV，構建重組質粒pFB-CMV-IL-2并予酶切和PCR鑒定；將鼠IL-2克隆入桿狀病毒表達載體pFastBacDual中，將pFB-CMV-IL-2轉化到含桿狀病毒穿梭載體Bacmid的DH10Bac感
天津醫藥 2011年2期2011-01-05
- 豬圓環病毒2型Cap蛋白在桿狀病毒表面的展示
較大的意義。桿狀病毒對昆蟲細胞的吸附和侵入與病毒的囊膜糖蛋白gp64有重要關系。gp64由N-末端信號肽和成熟蛋白(跨膜區TM和胞質區CTD)組成[1]。gp64被開發成桿狀病毒表面展示系統來展示不同的目的蛋白,外源基因片段插入到病毒囊膜蛋白的信號肽與成熟蛋白之間,表達加工時信號肽被切除,形成的N端融合蛋白借助桿狀病毒穩定地表達并展示于感染細胞或病毒粒子的表面,篩選得到表達有目的蛋白的重組桿狀病毒。目前,桿狀病毒表面展示系統已經被開發用于進行基因工程亞單位
中國獸醫雜志 2010年12期2010-11-22
- 內源性禽白血病病毒ev/J gp85基因的表達
因，通過構建桿狀病毒轉移載體pFastBac1-ev/Jgp85和重組桿狀病毒穿梭載體Bacmid-ev/Jgp85，將ev/Jgp85基因轉入Bac-to-Bac高效真核表達系統的Sf9 昆蟲細胞進行真核表達。間接免疫熒光試驗顯示，構建的重組桿狀病毒感染的Sf9細胞出現與野生型桿狀病毒感染的Sf9細胞陰性對照明顯不同的亮綠熒光；Western blot 分析DAB 顯色，重組病毒感染的Sf9細胞蛋白顯示出約35 ku的陽性條帶。結果表明，內源性ev/Jg
長江大學學報(自科版) 2009年2期2009-12-02