細胞色素P450 CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮治療效應的關系

郭曉云成俊祥江開達楊 瑞楊獻軍

細胞色素P450 CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮治療效應的關系

郭曉云1成俊祥2江開達1楊 瑞3楊獻軍3

目的 探討CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮治療效應的關系。方法 采用等位基因的特異性擴增法，根據是否含有突變型CYP2D6*10B缺陷等位基因將70例精神分裂癥患者分為野生型等位基因的純合型（w/w）組（16例），突變型等位基因的純合型（m/m）組（16例）以及野生型和突變型等位基因的雜合型（m/w）組（38例），觀察3組患者利培酮4～6 mg/d治療6周后療效與不良反應。采用陽性和陰性癥狀量表（PANSS）評價療效，副反應量表（TESS）和錐體外系不良反應量表（RSESE）評定藥物不良反應。PANSS減分率≥30%為有效。結果 治療6周后，有效者58例。有效組w等位基因頻率（0.43）明顯低于無效組（0.83），有效組的m等位頻率（0.57）明顯高于無效組（0.17）。自第4周起，m/w，m/m型PANSS減分值明顯多于w/w型。3種基因型患者組間不良反應差異無統計學意義。結論 利培酮治療攜帶CYP2D6*10B缺陷等位基因患者的療效優于治療野生型等位基因患者的療效。CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮不良反應無關聯。

精神分裂癥 細胞色素P450 CYP2D6 基因型 抗精神病藥 治療結果

利培酮是第二代抗精神病藥物，主要由肝臟細胞色素P4502D6酶（CYP2D6）通過羥化反應進行代謝［1］。CYP2D6的基因多態性是導致酶活性差異的重要原因，也是不同人群中利培酮的療效及耐受性不同的重要因素［2，3］。CYP2D6*10B缺陷等位基因在中國人群中常見，本研究探討CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮療效和耐受性之間的關系。

1 對象與方法

1.1 對象

研究對象為2003年7月至2004年1月新鄉醫學院第二附屬醫院的漢族首發或復發精神分裂癥患者，符合中國精神障礙分類與診斷標準第3版中精神分裂癥的診斷標準。排除酒精依賴或其他精神活性物質所致精神障礙，排除妊娠或哺乳期婦女，排除共病其他精神障礙患者。年齡15～50歲，總病程≤5年，入組前至少2周內未用過抗精神病藥，入組時血尿常規、肝功能及心電圖均正常。共入組70例，男性32例，女性38例。所有研究對象均為河南籍。入組對象的篩選及評定工作均由第一作者完成。

1.2 方法

1.2.1 利培酮療效的評定 在利培酮治療前及治療第2、4、6周末采用陽性與陰性綜合征量表（positive and negative syndrome scale，PANSS）評估病情?；€時收集其他臨床資料。單一使用利培酮（商品名：維思通，楊森制藥公司生產）治療。在治療1周內加量至治療劑量4～6 mg/d，隨訪6周。研究期間不合用其他抗精神病藥或電休克治療，必要時可合用苯二氮卓艸類及抗震顫麻痹藥。研究期間不吸煙，不飲酒。以PANSS減分率［（治療前評分-治療后評分）/（治療前評分-30）×100%］確定療效，≥30%為有效，＜30%無效［4］。每周用副反應量表（TESS）和錐體外系不良反應量表（RSESE）評定藥物不良反應。

1.2.2 基因組DNA提取 在利培酮治療前收集患者外周血5ml（依地酸抗凝）。根據抗凝靜脈血標準，用碘化鈉法提取基因組DNA，-20℃備用［5］。

1.2.3 等位基因特異擴增法（allele specific-PCR）引物 公用引物：5ˊ-acc agg ccc ctc cac cgg-3ˊ，野生型引物a：5ˊ-agg ggg cct ggt gg-3ˊ，突變型引物b：5ˊ-agg ggg cct ggt ga-3ˊ，內對照引物β上：5ˊ-gaa gag cca agg aca ggt ac-3ˊ和引物β下：5ˊ-caa ctt cat cca cgt tca cc-3ˊ。PCR反應體系：雙蒸水7.8 μl，10×PCR反應緩沖液2.0 μl，氯化鎂（MgCl2）（25 mmol/l）1.7μl，β上（10 mmol/l）0.35 μl，β下（10 mmol/l）0.35 μl，公用引物1 μl，引物a或b 1μl，磷酸脫氧核苷酸（d NTP）3.0 μl，Taq DNA聚合酶0. 8 μl，DNA樣本2.0 μl，反應體系總共20 μl。PCR循環條件：①95℃12 min；②95℃1 min；③66℃1 min；④72℃1 min；將②③④重復5個循環；⑤95℃1 min；⑥60℃1 min；⑦72℃1 min；將⑤⑥⑦重復20個循環；⑧95℃1 min；⑨55℃1 min；⑩72℃1 min；將⑧⑨⑩重復5個循環；72℃10 min；4℃冷卻。

1.2.4 基因型的判讀 每個樣本均在2個反應體系中進行試驗。在反應體系1中加入公用引物和引物a，在反應體系2中加入公用引物和引物b，若只有反應體系1中可以擴增出長度為397 bp的產物片段，則為野生型等位基因的純合型（w/w）；若只有反應體系2種可以擴增出397 bp的產物片段，則為

CYP2D6*10B缺陷突變型等位基因純合型，簡稱突變型等位基因的純和型（m/m）；若兩體系都能擴增出397 bp的產物片段，則為野生型和突變型等位基因的雜合型（m/w）。采用內對照引物β上和β下擴增出長度為268 bp的β珠蛋白基因。每個樣本體系重復3次。擴增產物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳并用bio圖像分析系統保存圖像。

1.2.5 統計學檢驗 采用SPSS11.5統計軟件。用χ2檢驗比較3種基因型間患者性別、家族史構成以及有效和無效組基因型和基因頻率構成，其中家族史和基因型構成采用Fisher精確法。采用單因素方差分析比較3種基因型間患者年齡、病程、基線PANSS分，以及隨訪過程中組間藥物不良反應的差異，其中病程為偏態分布，采用秩變換后單因素方差分析比較。采用協方差分析（基線PANSS分、病程作為協變量）比較隨訪過程中組間藥物療效的差異。

2 結果

2.1 3種基因型精神分裂癥患者的一般資料比較

3種基因型（w/w、m/w、m/m）患者分別有16

例、38例和16例。不同基因型患者的性別構成、陽性家族史比例、年齡、病程的差異無統計學意義，見表1。

表1 70例不同基因型的精神分裂癥患者的一般資料

2.2 w/w、m/w、m/m基因型患者利培酮治療療效的比較

利培酮治療6周后，治療有效58例，無效12例。有效組和無效組3種基因型的構成差別有統計學意義（Fisher精確概率計算法，P=0.001）。有效組w/w基因型頻率明顯低于無效組，有效組的m/m基因型頻率明顯高于無效組。有效組w型等位基因頻率明顯低于無效組，m型等位基因頻率明顯高于無效組。見表2。自第4周起，m/w，m/m型PANSS減分值明顯多于w/w型，見表3。

2.3 w/w，m/w，m/m基因型患者間不良反應的比較

將每例患者6次TESS、RSESE量表分取均數后，比較m/m、m/w、w/w基因型患者TESS、RSESE量表分，發現三種基因型間TESS、RSESE量表分差異無統計學意義，見表4。

表2 利培酮治療有效組和無效組的基因型構成

表3 w/w、m/w、m/m基因型患者PANSS減分值比較 ˉx±s，分

表4 w/w、m/w、m/m基因型患者TESS、RSESE評分 ˉx±s，分

3 討論

藥物代謝強度與CYP2D6基因多態性有關：快代謝型（extensive metabolizer，EM）攜帶2個有功能的等位基因，慢代謝型（poor metabolizers，PM）攜帶2個無功能的突變等位基因，中等代謝表現型（intermediate metabolizer，IM）只攜帶一個有功能的突變等位基因或2個使酶活性減弱的突變等位基因。CYP2D6基因位于22號常染色體上，長9 432個bp，為隱性遺傳。CYP2D6基因有70余種等位基因變異型，CYP2D6*10主要分布于亞洲，CYP2D6 *10B（舊名CYP2D6Ch1）缺陷等位基因在中國人群中常見［6］，該缺陷基因的外顯子1第188位堿基C被T置換，造成表達的蛋白第34位的脯氨酸變成絲氨酸，從而導致所生成酶的活性下降。

利培酮在人體內主要由CYP2D6通過羥化作用代謝，代謝物9-羥利培酮與母藥利培酮都具有藥理活性。本結果發現，CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮的治療療效相關，PANSS減分隨T等位基因的增加而升高，對該結果的解釋可能在于隨利培酮代謝變慢，血藥濃度維持在高水平。國內黃頤等［4］研究發現，CYP2D6*10各基因型之間的利培酮療效存在顯著性差異。Hendset等［7］發現，CYP2D6活性下降可導致血漿利培酮與9-羥利培酮濃度之和升高80%（使用利培酮長效針劑）和32%（使用利培酮口服制劑）。Llerena等［8］和Leon等［9］研究發現，CYP2D6基因型可影響口服利培酮的藥代動力學特征，必要時需要根據基因型進行劑量調整。CYP2D6 *10B缺陷等位基因導致所生成酶的活性下降，而酶活性的下降導致利培酮在體內的代謝減慢，在體內滯留時間加長，因而導致含CYP2D6酶基因CYP2D6*10B缺陷等位基因的患者使用利培酮治療療效更好。

本研究沒有發現CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮不良反應之間存在關聯。黃頤等［4］也沒有發現CYP2D6基因多態性與利培酮不良反應之間存在關聯。這些結果提示CYP2D6*10B缺陷等位基因與利培酮的不良反應之間可能沒有相關性。對這一結果的另一種解釋是可能利培酮不良反應發生少，確定等位基因與不良反應之間的關系，需要更大樣本量、隨訪更長時間。

本研究采用等位基因的特異擴增法檢測CYP2D6*10B缺陷等位基因，該方法是20世紀90年代發展起來的一項技術［10］，它利用PCR擴增中引物3’末端堿基互配時要求最為嚴格的原理，設計了等位基因特異的引物、擴增后的結果有兩種可能性：只有野生型等位基因特異的引物有擴增，說明檢樣只含野生型等位基因，為野生型純合子；只有突變型等位基因特異的引物有擴增，說明檢樣只含突變型等位基因，為突變型純合子；野生型和突變型等位基因均有擴增，說明檢樣是雜合子。該方法已經被多次試驗驗證［11］，具有非常好的重復性，由于操作流程的簡化，污染程度減少，從而減少假陽性結果。

本研究存在不足之處，樣本量偏小，入組病例并非隨機化。盡管如此，本研究結果還是支持以下結論，即攜帶CYP2D6*10B缺陷等位基因的中國精神分裂癥患者使用利培酮治療療效可能優于攜帶野生型等位基因患者的。中國人群多攜帶CYP2D6* 10B缺陷等位基因，本研究結果對于優化用藥模式，進一步尋找利培酮治療療效的指標，具有重要意義。

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Objective：To investigate relationship between CYP2D6*10B mutation genotype and therapeutic effect of risperidone.Methods：Using allele-specific PCR to separate 70 schizophrenia patients into 3 genotypes：wild type homozygosis（w/w）（16 cases），wild and mutation type heterozygosis（w/m）（38 cases），and mutation type homozygosis（m/m）（16 cases）.Difference of therapeutic and side effect in patients treated with risperidone 4-6 mg/d for 4 weeks were evaluated among three genotypes.Using positive and negative symdrome scale（PANSS）to evaluate therapeutic effect every 2 weeks.Using treatment emergent symptom scale（TESS）and rating scale for extrapyramidal side effects（RSESE）to evaluate side effect every week.Response is defined as reduction of PANSS total score≥30%.Results：After 6-week therapy，58 patients were rated as responders and 12 patients non-responders.Frequency of w allele was lower in response group（0.43）than in non-response group（0.83），while frequency of m allele was higher in response group（0.57）than in non-response group（0.17）.Reduction of PANSS score was superior in m/w，m/m group than in w/w group from week 4 of treatment.There was no difference in side effect among 3 genotype groups. Conclusion：Response to risperidone is superior in patients carrying defective CYP2D6*10B allele to wildtype genotype.Defective CYP2D6*10B allele does not relate to adverse reactions of risperidone.

Schizophrenia Cytochrome P450 CYP2D6 Genotype Antipsychotic agents Treatment outcome

2009-09-10）

（本文編輯：張紅霞）

Relationship between cytochrome P450 CYP2D6*10B gene and therapeutic effect of risperidone Guo Xiaoyun1，Cheng Junxiang2，Jiang Kaida1，Yang Rui3，Yang Xianjun3.1.Shanghai Menyal Healyh Cenyer，Shanghai Jiaoyong Universiyy School of Medicine，Shanghai 200030；2.Second Affiliayed Hospiyal，Xin Xiang Medical College，Henan Provence，Xinxiang 453003；3.Xinxiang Medical College，Henan Provence，Xinxiang 453003

1.上海交通大學醫學院附屬精神衛生中心 200032；2.新鄉醫學院第二附屬醫院 453003；3.新鄉醫學院 453003。通信作者：成俊祥，電子信箱cheng-junxiang@163.com；江開達，電子信箱jiangkaida@yahoo.com.cn