遠志對糖尿病周圍神經病變大鼠尾部感覺神經傳導速度和坐骨神經醛糖還原酶活性的影響

趙曉麗 馬洪偉 陳志宏 (承德醫學院附屬醫院神經內科，河北 承德 067000)

糖尿病周圍神經病變(DPN)是糖尿病最常見的慢性并發癥之一，發病率高達47% ～91%〔1〕。DPN可累及感覺神經、運動神經和自主神經，但以感覺神經最為常見〔2〕。雖然治療DPN的藥物種類繁多，但目前尚無確切有效的治療藥物，通常在控制飲食、應用降糖藥的基礎上對癥治療。部分患者嚴格控制血糖并不能使神經功能完全改善，且短期內控制血糖與改善DPN臨床癥狀并不平行;同時，降糖藥物在降低血糖的同時會產生較多的毒副作用〔3，4〕。為此，本研究觀察了中藥遠志對DPN大鼠尾部感覺神經傳導速度(SNCV)和坐骨神經醛糖還原酶(AR)活性的影響，為臨床探尋有效、且毒副作用小的治療DPN的藥物提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 試劑與藥品 遠志水煎液，中藥遠志(Polygala)浸泡、水煎、濃縮獲得，生藥1 g/ml。鏈脲佐菌素(STZ)，美國Sigma公司;血糖檢測試劑盒，保定長城臨床試劑有限公司(批號:20090511);BCA蛋白定量試劑盒，北京索萊寶生物科技有限公司。

1.2 實驗動物分組 成年雄性Wistar大鼠36只，體重180～220 g，購自河北醫科大學實驗動物中心(合格證號:905075)。大鼠隨機分為3組(n=12):正常對照組、DPN模型組和遠志治療組。正常對照組大鼠常規飼養，不做任何處理。DPN模型組和遠志治療組大鼠連續腹腔注射2%STZ(25 mg/kg，3 d)，1 w后以血糖≥16.7 mmol/L作為糖尿病成模標準。成功建立糖尿病模型后，DPN模型組和遠志治療組大鼠繼續飼養6 w，以大鼠尾部SNCV＜30 m/s作為DPN成模標準;成功建立DPN大鼠模型后，DPN模型組大鼠不再做任何處理，遠志治療組大鼠給予遠志(2.7 g生藥·kg－1·d－1)灌胃6 w。

1.3 檢測血糖 各組大鼠用藥結束后禁食12 h以上，4%水合氯醛腹腔注射麻醉，經內眥于眶后靜脈叢采血，離心后收集血清，采用葡萄糖氧化酶法檢測血糖。

1.4 檢測大鼠尾部SNCV 大鼠俯臥位固定，分別用溫水、75%乙醇清潔大鼠尾部皮膚，電極放置方式為一對刺激電極(負極位于正極近心側)插入大鼠尾部皮下，然后依次插入記錄電極Ⅰ和記錄電極Ⅱ，記錄電極Ⅰ在刺激電極負極近心側3 cm處，記錄電極Ⅱ在記錄電極Ⅰ近心側4 cm處，再將參考電極Ⅰ、Ⅱ分別插入距記錄電極Ⅰ、Ⅱ近心側0.5 cm處皮下，最后將接地電極插入刺激電極負極與記錄電極Ⅰ之間。采用RM6240C型多道生理信號處理系統測定各組大鼠尾部SNCV，重復刺激3次，間隔30 s，取平均值。尾部SNCV(m/s)=兩記錄電極之間的距離/動作電位潛伏期時間差。

1.5 測定坐骨神經AR活性 大鼠斷頭處死，迅速分離雙側坐骨神經(膝關節上方坐骨神經干，約4 cm)，入液氮保存。參照文獻的方法檢測坐骨神經AR活性。

2 結果

2.1 各組大鼠血糖水平 各組大鼠血糖DPN模型組大鼠的血糖明顯高于正常對照組(P＜0.01);遠志治療組大鼠的血糖明顯低于模型組(P＜0.01)。見表1。

2.2 各組大鼠尾部SNCV 與正常對照組大鼠比較，DPN模型組大鼠尾部SNCV明顯降低(P＜0.01);與模型組大鼠比較，遠志治療組大鼠尾部SNCV明顯升高(P＜0.01)。見表1。

2.3 各組大鼠坐骨神經AR活性 與正常對照組大鼠比較，DPN模型組大鼠坐骨神經AR活性明顯升高(P＜0.01);與模型組大鼠比較，遠志治療組大鼠坐骨神經AR活性明顯降低(P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠血糖、尾部SNCV和坐骨神經AR活性(±s，n=12)

表1 各組大鼠血糖、尾部SNCV和坐骨神經AR活性(±s，n=12)

與DPN模型組比較:1)P＜0.01

組別 血糖(mmol/L) SNCV(m/s) AR(U/mg)正常對照組 7.53±1.311) 36.57±2.081)0.264 5±0.191 31)DPN模型組 25.40±4.22 27.45±1.16 1.069 5±0.181 1遠志治療組 17.20±4.561) 33.20±1.091)0.626 6±0.163 31)

3 討論

隨著糖尿病發病率的逐年上升，建立理想的動物模型對于深入研究DPN具有十分重要的意義。目前尚無理想的DPN動物模型，研究DPN主要采用糖尿病動物模型。已有實驗證實，糖尿病大鼠成模后1～2個月就可觀察到與人類DPN相似的改變〔5，6〕。神經傳導速度減慢是糖尿病出現神經病變的一個敏感指標，也是研究實驗性DPN最常用的指標。DPN時，一般感覺神經較運動神經先受累，因此SNCV減慢可作為DPN早期診斷的指標〔7〕。有臨床資料顯示〔8〕，部分糖尿病患者雖然未出現DPN的臨床表現，但電生理檢查就可發現神經傳導速度減慢。

DPN與胰島素分泌不足及糖代謝紊亂密切相關，一般認為高血糖是DPN發病的首發因素，而葡萄糖多元醇代謝通路紊亂是DPN發生的重要發病機制之一。多元醇代謝通路有兩個關鍵酶，即AR和山梨醇脫氫酶，AR催化葡萄糖轉化成山梨醇，山梨醇脫氫酶催化山梨醇轉化為果糖。糖尿病時，長期高血糖狀態可使葡萄糖多元醇代謝通路紊亂，導致AR活性增強，致使神經細胞內山梨醇和果糖大量蓄積，繼而引起神經細胞滲透壓增高，Na+－K+－ATP酶活性下降，導致細胞腫脹、變性，生理功能受損，軸索萎縮，神經纖維節段性脫髓鞘〔9〕。另外，AR過度活化導致其輔助因子NADPH大量消耗，從而抑制谷胱甘肽的產生，使細胞對自由基的易感性增加，導致周圍神經氧化應激〔10〕;進而，導致神經纖維神經營養因子表達減少，影響軸漿運輸，導致神經病變〔11〕。有研究證實，不論是在體動物實驗還是體外細胞培養，AR抑制劑不僅可以延緩SNCV的減慢，而且有助損傷神經纖維的修復甚至再生〔12〕。

植物遠志為遠志科遠志屬多年生草本植物，以干燥根入藥，為我國常用的中草藥?，F代研究發現，遠志富含皂苷類、口山酮類、寡糖酯類等化合物，具有益智、抗抑郁、抗氧化衰老、抑菌抗炎、抗誘變等多方面的生物活性〔13～15〕。有文獻報道，從遠志中提取分離出的?；烟沁h志糖苷B可增強中樞膽堿能系統活性，增強認知功能，具有腦保護作用〔16〕。但關于遠志對糖尿病周圍神經病變保護作用的研究，國內外報道甚少。本研究發現，DPN模型大鼠尾部SNCV明顯降低、坐骨神經AR活性明顯升高，證實DPN時存在多元醇代謝通路的紊亂，進而引發模型大鼠周圍神經發生病變;遠志治療組大鼠尾部SNCV明顯高于DPN大鼠、坐骨神經AR活性明顯低于DPN大鼠，表明遠志治療對DPN時多元醇代謝通路紊亂具有良性調節作用，可明顯降低大鼠坐骨神經AR活性、逆轉DPN大鼠尾部SNCV減慢，對DPN時周圍神經損傷具有明顯的改善作用。遠志為我國傳統中草藥，并且我國有豐富的遠志資源，繼續深入研究遠志對糖尿病周圍神經病變的保護作用具有重要的意義和良好的應用前景。

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