黃芩總黃酮溶解度和表觀油水分配系數的測定

喬建衛，裴廣慶，劉向東，蘇瑞強，孫宗喜，趙志全 （1.魯南制藥集團股份有限公司，山東 臨沂276006；2.中藥制藥共性技術國家重點實驗室，山東 臨沂276006）

黃芩為唇形科植物黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干燥根，味苦，性寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效［1］。作為一味傳統中藥材，資源分布非常廣泛，主產于山東、山西、陜西、甘肅等省份。黃芩化學成分復雜，其中黃酮類化合物是其主要有效組份，具有解熱、抗炎、保肝、抑菌、抗氧化等作用［2］。藥物的溶解度與表觀油水分配系數是制劑研究重要的技術參數，前者可影響到藥物的吸收和生物利用度，尤其是在固體制劑中，其大小可直接改變藥物的溶出情況；后者則與藥物的溶解、吸收、分布、轉運密切相關［3］?；诖?，本試驗測定了黃芩總黃酮的溶解度和表觀油水分配系數等理化性質，為指導其新劑型設計和開發提供必要的參考。

1 材料

1.1 儀器 UV－2401紫外分光光度計（日本島津公司）；AG285型電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多上海有限公司）；KQ－5200DB 數控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；SHA－C 水浴恒溫振蕩器（江蘇金壇市華峰儀器有限公司）；H1650－W型離心機（長沙湘儀離心儀器有限公司）；pHS－25B 數顯酸度計（上海大普儀器有限公司）；QL－901渦旋混合器（海門其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.2 藥品與試劑 黃芩苷對照品（批號110715－200514）由中國食品藥品檢定研究院提供；黃芩總黃酮（實驗室自制，批號12032801，質量分數為83.64%）；水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芩總黃酮測定方法的建立

2.1.1 對照品溶液的配制 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，以70%乙醇溶解制成質量濃度為67.4 μg·mL－1的溶液，即得。

2.1.2 測定波長的確定 取適當質量濃度的對照品溶液和黃芩總黃酮溶液，在190～400 nm 波長范圍內掃描，結果兩者均在278 nm 處有最大吸收。

2.1.3 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，2.0mL置10 mL量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，分別在278 nm 處測定吸光度。以質量濃度（Y）為縱坐標，吸光度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為：Y＝15.58 X－0.547 1，r＝0.999 0，線性范圍為1.348～13.48μg·mL－1。

2.1.4 精密度試驗 精密稱取黃芩總黃酮（過5號篩）6.0mg，置于50 mL量瓶中，用70%乙醇溶解至刻度，再移取1 mL 置于10 mL 量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。連續測定其6次吸光度，結果RSD 為0.44%。

2.1.5 穩定性試驗 取“2.1.4”項下的同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h測定其吸光度，結果RSD 為1.57%。

2.1.6 重復性試驗 精密稱取黃芩總黃酮6份，用70%乙醇溶解并適當稀釋后測定吸光度，結果總黃酮的平均含量為836.4 mg·g－1，RSD 為2.09%。

2.1.7 加樣回收率試驗 取已知含量的黃芩總黃酮6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品適量（與樣品中總黃酮的量相當），用70%乙醇溶解并適當稀釋后測定吸光度，計算回收率，結果平均回收率為98.28%，RSD 為1.47%。

2.2 黃芩總黃酮溶解度的測定［4－5］取黃芩總黃酮約0.1 g，精密稱定，置具塞試管中，分別加入溶劑10 mL，超聲至不再溶解，將試管置于水浴恒溫振蕩器中，溫度保持（25±1）℃振蕩48 h，靜置后離心（14 000 r·min－1，10 min），各吸取上清飽和溶液，濾過，經適當稀釋后，分別測定吸光度，計算其溶解度。試驗中選擇7種溶劑（水、甲醇、乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚）和7 種不同pH 的緩沖液（按《中國藥典》方法配制pH6.8的磷酸鹽緩沖液，再分別以0.1 mol·L－1磷酸或1 mol·L－1氫氧化鈉調節為pH2.0，4.0，5.8，6.8，7.4，8.8，11.2的緩沖液）。

結果表明，黃芩總黃酮在水中的溶解度最高（6.361 g·L－1），且隨著溶劑極性的減弱而依次降低（表1）。在不同的pH 條件下，黃芩總黃酮的溶解性有一定的差異，而在堿性條件下，其溶解度相對較高，見圖1。

表1 黃芩總黃酮在不同溶劑中的溶解度Tab 1 Solubility of total flavonoids fromS.baicalensis in different solvent

圖1 黃芩總黃酮在不同pH 緩沖液中的溶解度Fig 1 Solubility of total flavonoids fromS.baicalensis in different pH buffer solution

2.3 黃芩總黃酮表觀油水分配系數（P）的測定［6］取水和不同pH 的磷酸鹽緩沖液于錐形瓶中，各加入一定量的正辛醇，置磁力攪拌器上攪拌后靜置，配制成水／緩沖液和正辛醇相互飽和的兩相體系。取黃芩總黃酮8份，分別加入到被正辛醇飽和的水／緩沖溶液中，使成飽和狀態，靜置后離心（14 000 r·min，10 min），精密吸取上清液5 mL 置具塞試管中，再分別加入被水／緩沖溶液飽和的正辛醇5 mL，經渦旋混合器混合10 min，靜置1 h，反復操作3次，使黃芩總黃酮在兩相中充分分配平衡，靜置后取下層水相溶液，及取混合前的下層水相溶液，濾過，經適當稀釋后，分別測定吸光度，計算黃芩總黃酮的質量濃度。表觀油水分配系數（P）的計算公式如下：

式中，C0、C1分別為混合前后下層水相中的黃芩總黃酮的質量濃度。

結果表明，在不同pH 條件下，黃芩總黃酮的表觀油水分配系數有很大差別。在pH2.0的緩沖液中，其表觀油水分配系數為15.874，遠高于其他pH條件。結果見表2。

表2 黃芩總黃酮在不同pH 緩沖液中的表觀油水分配系數Tab 2 Apparent oil／water partition coefficients of total flavonoids from S.baicalensis in different pH buffer solution

3 討論

人體胃腸道不同部位的pH 不同［6］。在本試驗中，所選擇的不同pH 條件盡可能反映人體胃腸道不同部位的pH，可較為準確地體現黃芩總黃酮在人體胃腸道不同部位的溶解和滲透情況。

黃芩總黃酮的溶解度隨著溶劑極性的減弱而迅速降低，其親水性要強于親脂性，而且在堿性條件下的溶解度較高，這可能與其所含化學成分的酸性基團堿化成鹽有關。鑒于黃芩總黃酮的溶解性比較差，提示其普通固體制劑的溶出速率較慢，將影響到在人體內的吸收過程。因此，在設計其新劑型時，可考慮采用固體分散技術等方法改善其藥物性能，提高溶出速率，進而提高生物利用度。

表觀油水分配系數（P 值）是藥物傳遞系統中重要的參數。當P 值低時（lgP＜－2），過量的熱力學屏障將阻止藥物透過脂質膜；當P 值高時（lgP＞3），較強的親脂性會導致藥物難以從膜兩側的不動水層進行擴散。因此，在進行藥物設計時，應考慮其是否在最佳的P 值內（－1＜lgP＜2）［7］。從表2可知，黃芩總黃酮的P 值為0.107～15.874（－0.971＜lgP＜1.201），表明其在人體胃腸道內的吸收情況良好。表觀油水分配系數雖不能完全真實反映藥物在體內的滲透性，但對預測其在體內的分配情況有一定的指導性。

［1］ 中國藥典.一部［S］.2010：282－283.

［2］ 宋旦哥，孟慶剛.黃芩藥理作用研究述評［J］.中華中醫藥學刊，2009，27（8）：1619－1622.

［3］ 潘衛三.新藥制劑技術［M］.北京：化學工業出版社，2004：6－40.

［4］ 刑建國，謝敏，王新春，等.天山雪蓮提取物平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定［J］.中國醫院藥學雜志，2013，33（1）：26－28.

［5］ 王玉，李祥，陳建偉.番荔枝總內酯平衡溶解度和油水分配系數的測定［J］.中國醫院藥學雜志，2013，33（5）：342－345.

［6］ 何琳，龍曉英，丁沐淦，等.水飛薊素平衡溶解度及表觀油水分配系數的測定［J］.廣東藥學院學報，2011，27（5）：445－449.

［7］ Abraham DJ.Burger’s medicinal chemistry and drug discovery［M］.New Zealand：John Wiley ＆Sons Inc，2003：259－293.