IDO和FoxP3表達與宮頸癌發生和病理進程關聯的分析

徐紅園 路喜安

（山西醫科大學，山西 太原 030001）

IDO和FoxP3表達與宮頸癌發生和病理進程關聯的分析

徐紅園 路喜安

（山西醫科大學，山西 太原 030001）

目的 研究討論FoxP3表達和吲哚胺2，3-雙加氧酶與宮頸癌發生和病理進程關聯。方法 選取2005年～2013年患者標本，50例實驗組和20例對照組。其中實驗組包含10例(CINⅠ～Ⅱ級組)，10例CINⅢ級組，宮頸癌30例(宮頸癌組)。應用SPSS 16.0統計分析軟件，且P＜0.05時，數據具有統計學意義。結果 實驗結果表明，不論是CIN組還是對照組DIO和FoxP3都明顯的低于宮頸癌組。且IDO的陽性表達式與宮頸癌FIGO分期、宮頸癌FIGO組織學分級相關；FoxP3的陽性表達只與FIGO分期相關。結論 IDO和FoxP3對于宮頸癌的表達結果普遍大于實驗組和對照組，可見IDO、FoxP3與宮頸癌的發展和發生有著密切的關聯

宮頸癌；FoxP3；吲哚胺2,3-雙加氧酶

宮頸癌是女性的三大惡性腫瘤之一，它對女性造成的威脅近來以患者年輕化和不斷上升的病死率尤為顯著。而本課題針對宮頸癌進行IDO和FoxP3表達與宮頸癌發生和病理進程關聯分析，希望得出的結果能對宮頸癌的治療起到一定的借鑒作用。本次研究主要是在通過分析宮頸癌病變組織和宮頸上皮內瘤變中IDO和FoxP3的表達，希望能夠展現IDO與FoxP3的表達與宮頸癌的預后及病理分級是否存在關聯。

1 資料與方法

1.1 研究對象

本次的研究對象主要為50例實驗組（其中，30例的宮頸癌石蠟標本以及另外不同級別的宮頸上皮內瘤變的參照組20例）以及20例對照組（子宮肌瘤確認診病例石蠟標本）。本次研究選的對象均為在2005年～2013年確診病例的石蠟標本。

1.2 方法

1.2.1 組織學診斷實驗標本

把實驗標本做連續的組織切片，保持切片厚度在4～6 μm，并對其進行各個指標的免疫組織化學染色。注意確認診斷和組織學分類。

1.2.2 利用免疫組織化學法檢測IDO和FoxP3的表達

利用Envision二步法對IDO和FoxP3進行蛋白的檢測實驗。本次實驗提到的吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）是一種可能在介導腫瘤逃逸過程中發揮其重要作用的一種分子，并且是除肝臟以外唯一能夠催化色氨酸分子并把它氧化裂解，從而沿犬尿酸途徑分解代謝的限速酶，與多種的免疫機制、母胎耐受機制有關。由于在多種的對于腫瘤的研究成果中的數據顯示，其在癌組織的表達會高于其他正常組織，而且對于惡性腫瘤患者遠處的發生率和預后等均被證明有明顯的關聯性，所以甚至有學者提出可以把該因子作為惡性腫瘤患者的獨立預后因素。

本次實驗操作步驟必須嚴格按照試劑盒說明書進行，每組實驗必須設陽性和陰性對照。以一抗同種來源的動物血清代替一抗為陰性對照，然后將具有IDO陽性表達的胎盤組織和具有FoxP3陽性表達的人扁桃體組織作為陽性對照。

1.2.3 免疫組織的化學結果判定

把切片放入顯微鏡下利用盲法進行觀察。FoxP3主要在細胞核內表達，個別的在細胞質中也會有少量表達，實驗染色后會呈現出棕黃色的染色顆粒；IDO陽性結果主要在細胞質內進行表達，個別在細胞胞膜上及核內也能少量表達，實驗染色后會呈現出棕黃色的染色顆粒。對切片進行半定量分析，陽性劃分標準根據每個切片中陽性細胞占全片細胞的比例進行劃分：當出現無陽性染色細胞時表明實驗結果陰性（-）；當實驗結果為陽性染色細胞占全部細胞的0～25%為弱陽性（+/-）；當實驗結果為陽性染色細胞占全部細胞的25%～50%時為陽性（+）；當實驗結果為陽性染色細胞占全部細胞的50%～75%時為中等陽性（++）；當實驗結果為陽性染色細胞占全部細胞的75%時為強陽性（+++）。

1.3 統計學方法

實驗采用SPSS13.0軟件對數據進行統計學處理，用Spearman進行相關性分析檢驗，采用百分比表示計數資料，組與組間的比較采用χ2表示。注意當P＜0.05時表示差異具有統計學意義。

2 結 果

免疫組織的化學結果顯示，在宮頸皮上內瘤組和20例的對照組中，IDO實驗結果為幾乎不表達，而FoxP3表達也并不明顯；而在宮頸癌組中，FoxP3表達的陽性率為69.5%，IDO表達的陽性率為74.2%，與其他的兩個組相比，IDO與FoxP3具有更明顯的統計學意義。

3 討 論

宮頸癌是一種病死率非常高的癌癥，全世界每年都會有20萬女性死于宮頸癌[1]。因為其對于女性的殺傷力，許多科學家都致力于找出發病機制，然而且始終不得其解。但近幾年的研究卻有這樣的跡象，認為宮頸癌的發生可能與腫瘤的免疫逃逸有著一定的關系。腫瘤微環境的研究及其免疫逃逸機制可能最終解開這個謎底，因而IDO很可能是其中最關鍵的環節之一。由于IDO在人類子宮內膜腺體和表面上皮細胞、螺旋動脈以及毛細血管內皮、宮頸腺上皮和輸卵管上皮上均存在表達[2,3]。但是在以往研究中，IDO主要是在母胎免疫方面進行的相關研究，研究范圍十分片面。所以在對IDO誘導的腫瘤免疫耐受機制的深入研究后，有關IDO與婦科腫瘤的研究逐漸成為關注的熱點。目前，IDO在腫瘤局部免疫耐受中的作用主要依靠三大機制完成，包括色氨酸缺乏機制、毒性代謝產物機制和誘導Tregs免疫負調節機制。根據本次研究成果顯示，IDO表達的陽性率按照宮頸組織病變程度遞增順序依次遞增，其中宮頸癌的陽性率明顯高于其他組別，說明當腫瘤抗原刺激巨噬細胞和DC后，就會通過產生IDO來改變微環境內色氨酸和代謝產物的局部濃度來抑制T細胞的腫瘤抗原特異性克隆增殖，使其免受機體的免疫系統攻擊。所以，宮頸癌患者中IDO的表達與FIGO分期及組織學分級存在相關性，意味著腫瘤分期、分級越高，IDO表達的可能性就越高。

FoxP3又可稱做叉頭狀或翅狀螺旋轉錄因子3，為叉頭蛋白的一種。FoxP3是Tregs細胞的特征性標志物之一，在調控Tregs的發育中起到重要作用。在本次研究中，FoxP3不僅與FIGO分期存在相關性，且FoxP3表達的陽性率同IDO表達的陽性表達率一般，按照正常宮頸組織到宮頸癌的病變順序依次遞增，這就意味著腫瘤的分期指數越高，FoxP3表達的可能性就越大。綜上所述，可見IDO和FoxP3表達與宮頸癌發生和病理進程是存在明顯的相關性的。

隨著實驗結果的得出，我們不妨這么看，由于IDO在實驗中的表達率，是不是對IDO的抑制藥物的產生可以作為新的免疫調節劑呢？這算是在為解決腫瘤治療方案提供的新的思路。不得不提到一種被列為美國國立癌癥研究所緊急研發規劃中的新型抑制劑——1-MT。這是一種與底物色氨酸結構最接近的抑制劑，最新實驗表明，1-MT與細胞毒性抗腫瘤藥紫杉醇、順鉑、環磷酰胺和阿霉素等合用，可以引起腫瘤的消退，但是它們單獨使用卻沒有明顯的作用。隨著實驗的結束，我們能夠看到IDO在誘導婦科腫瘤免疫耐受機制的作用十分明顯，在今后的發展中，IDO有望取代其他繁瑣的步驟而成為宮頸癌評估及預后的獨立指標。而它的抑制劑則有望在臨床治療方面成為主要手段。

[1] Muller AJ,Hardaway JB,Jailer D,et a1.Lmmunotherapeutic suppression of indoleamine 2,3-di oxygenase and tumor growth with ethyl pyruvate[J].Cancer Res,2010,70(5):1845-1853.

[2] Munn DH,Mellor AL.Indocible 2.3-di oxygenase and tumor induced tolerance[J].Cline Invest,2007,117(5):1147-1154.

[3] Munn DH,Zhou M,Att Wood yr,et a1.Prevention of allogeneic fetal reerection by tryptophan catabolism[J].Science,1998,281 (5380):1191-1193.

R737.33

：B

：1671-8194（2014）07-0103-02