奧沙利鉑靜脈輸液的刺激性、過敏性和溶血性研究

蘇晨霞，李健和，易利丹，彭六保

(1.湖南省新化縣孟公鎮中心衛生院，湖南新化 417605；2.中南大學湘雅二醫院藥學部，湖南長沙 410011)

奧沙利鉑(oxaliplatin)為第三代鉑絡合物類抗腫瘤藥物，適用于經過氟尿嘧啶治療失效之后結直腸癌轉移的病人，可單獨或聯合氟尿嘧啶使用[1]。為避免醫護人員在對注射用奧沙利鉑或奧沙利鉑注射液配制過程中交叉污染和發生差錯事故(注射用奧沙利鉑或奧沙利鉑注射液臨用時須重新配制，可能錯選溶劑，如選用常用的0.9%氯化鈉注射液，而奧沙利鉑與各種濃度的氯化鈉有配伍禁忌)，作者在參考相關專利[2，3]的基礎上研制開發了奧沙利鉑靜脈輸液，并獲得了新藥證書，技術轉讓藥廠?，F將在研制、開發過程中進行的過敏性、溶血性、血管刺激性和熱原實驗研究報道如下, 以期為安全用藥提供依據。

1 藥物、儀器和動物

1.1 藥物和儀器 奧沙利鉑靜脈輸液(規格 100 ml∶100 mg奧沙利鉑和5.1 g甘露醇，批號 20111220，中南大學湘雅二醫院藥學部研制提供)。0.9%氯化鈉注射液(批號 20111022，湖南中南科倫藥業有限公司)。L-600臺式低速自動平衡離心機(湘儀離心機儀器有限公司)； HH-420型三用恒溫水箱(上海喬躍電子有限公司)。

1.2 動物 豚鼠, 雌雄兼用, 體重(294.7±21.9) g；新西蘭兔, 雌雄兼用,體重1.8～2.5 kg。上述實驗動物均購自長沙市天勤生物技術有限公司，實驗動物生產許可證號: SCXK(湘)2009-0012。

2 方法和結果

根據化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則(2005年)附錄方法進行以下實驗。

2.1 過敏性實驗 采用自動全身性過敏反應(active systemic anaphylaxis，ASA)，豚鼠18只，根據體重按隨機數字表法分為3組，每組6只，分別腹腔注射奧沙利鉑靜脈輸液、1%雞蛋清或0.9%氯化鈉注射液各0.5 ml，隔日注射一次，共3次，使豚鼠致敏。于首次注射后14 d及21 d，每組各取3只動物，分別從后肢靜脈注射奧沙利鉑靜脈輸液、1%雞蛋清或0.9%氯化鈉注射液各1.0 ml激發，觀察注射后30 min 內豚鼠有無用爪搔鼻、噴嚏、咳嗽、豎毛、干嘔、抽搐、呼吸困難、休克和死亡等過敏反應癥狀。并按照指導原則全身致敏性評價標準分為過敏反應陰性、弱陽性、陽性、強陽性和極強陽性。結果顯示，腹腔注射1%雞蛋清的豚鼠，在首次注射后第14天(d 14)和d 21，靜脈注射1%雞蛋清后2 min內，全部出現豎毛、呼吸困難、痙攣、抽搐、休克等反應, 并在注射后10 min 內全部死亡，為過敏反應極強陽性。腹腔注射0.9%氯化鈉注射液或奧沙利鉑靜脈輸液的所有豚鼠，在靜脈注射0.9%氯化鈉注射液或奧沙利鉑靜脈輸液后30 min內均未見明顯異常表現, 為過敏反應陰性。該實驗表明，奧沙利鉑靜脈輸液的過敏反應呈陰性。

2.2 溶血性實驗 用常規的體外試管法(肉眼觀察法)進行溶血性實驗。家兔心臟穿刺采血15 ml，用竹簽攪拌以除去纖維蛋白，然后轉入刻度離心管內，再用0.9%氯化鈉注射液洗滌5次，每次加0.9%氯化鈉注射液10 ml，混勻后560×g離心15 min，棄去上清液，直到上清液不顯紅色為止。然后按所得紅細胞的容積，用0.9%氯化鈉注射液配制2%的紅細胞混懸液，供實驗用。

取7個試管并編號，加入2%的紅細胞混懸液2.5 ml， 然后于第1～5管中依次加入奧沙利鉑靜脈輸液0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 ml和0.9%氯化鈉注射液2.0、2.1、2.2、2.3、2.4 ml, 第6管加0.9%氯化鈉注射液2.5 ml作陰性對照, 第7 管加2.5 ml無菌水作為陽性對照。將各管輕輕混勻, 置37 ℃恒溫水浴箱中觀察4 h。1 h內每隔15 min觀察一次，1 h后每隔1 h觀察一次，共7次，觀察各管有無溶血及凝聚現象。結果顯示，在混勻后0.25、0.5、0.75、1、2、3和4 h，7號管均為澄明紅色溶液，管底無細胞殘留，為全溶血。6號管上層液體為無色澄明, 未發生溶血現象；紅細胞逐漸沉于管底, 經振搖后可均勻散開, 說明亦無紅細胞凝聚現象。試管1～5與6號管一樣，上層液體為無色澄明,沉于管底的紅細胞經振搖后可均勻散開，既未發生溶血，亦未發生紅細胞凝聚現象。

2.3 血管刺激性實驗 取新西蘭兔16只，體重(2.1±0.3) kg，雌雄兼用，按體重隨機分為對照組和用藥組，每組8只，分別自耳緣靜脈注射0.9%氯化鈉注射液10 ml/kg和奧沙利鉑靜脈輸液10 ml/kg。注射后24 h，對注射部位進行肉眼觀察，然后每組取4只家兔以注射部位為中心，剪下兔耳(含血管)3～5 cm，面積9～15 cm2，放入0.4%甲醛的溶液中固定，石蠟包埋，橫斷面切片(5～7 μm厚)，蘇木素-伊紅染色，進行組織病理學檢查。另4只家兔于靜脈注射給藥后7 d，進行肉眼觀察和組織病理學檢查。肉眼觀察：注射部位有無紅、腫、增厚、硬結及潰瘍等現象，紅、腫程度分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度。病理學檢查：觀察靜脈注射部位血管內有無血栓形成；血管壁內、中、外膜是否完整，血管壁有無變性、壞死；血管周圍組織有無水腫及炎癥細胞浸潤等改變。每項指標按病變程度分輕、中、重三級，計1、2、3分，每組兔的每項指標分值相加得該組兔該項指標的總積分，除以家兔數，即得該組家兔該項指標的平均分值，然后根據血管刺激性評價標準進行評價。

結果顯示，兔耳緣靜脈注射奧沙利鉑后24 h，注射部位未見明顯的紅、腫，亦未見明顯的增厚、硬結、潰瘍，與0.9%氯化鈉注射液對照組比較，無明顯差異。7 d后觀察也未見明顯的變化。病理組織學檢查：給藥后24 h，對照組家兔的各項指標均為0分；奧沙利鉑組1只家兔血管周圍組織輕度水腫(1分)，2只家兔血管周圍有極少量炎癥細胞浸潤(各1分)，其余各項指標均為0分，奧沙利鉑組的平均積分為0.75分。給藥后7 d，對照組和奧沙利鉑組兔的各項指標均為0分。表明奧沙利鉑對血管有輕度刺激性，是可以恢復的。

2.4 熱原實驗 按《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ D熱原檢查法[4]進行實驗。 新西蘭兔，實驗前測體溫2次(測量時肛溫計插入肛門的深度約6 cm，時間不得<1.5 min)，間隔30 min。選擇體溫在38.0～39.6 ℃，兩次體溫之差<0.2 ℃的健康家兔3只，兩次體溫的平均值為該兔的正常體溫。于第二次測正常體溫后15 min內，自耳緣靜脈緩慢注入預熱至38 ℃的奧沙利鉑靜脈輸液10 ml/kg。然后每隔30 min測定其體溫1次，共6次。以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔的體溫升高度數。每只家兔體溫升高<0.6 ℃，3只家兔體溫升高總度數<1.3 ℃，不必復試。

結果顯示，3只家兔注射前的體溫分別為39.0、39.2、38.9 ℃，注射奧沙利鉑靜脈輸液后的最高體溫分別為39.4、39.5、39.1 ℃，體溫分別升高0.4、0.3、0.2 ℃，奧沙利鉑靜脈輸液熱原檢查符合規定。

3 討論和結論

實驗結果表明，奧沙利鉑靜脈輸液過敏實驗呈陰性，未產生溶血作用，對血管有輕度的刺激作用，熱原實驗合格。另外，本品恒溫加速實驗6個月和長期留樣實驗12個月，除在光照、高溫60 ℃條件下pH值略有升高、有關物質有所增加(但仍在<1.0%的合格范圍內)，以及高溫60 ℃條件下顏色略有加深外，其他指標均無明顯變化，其穩定性良好[5]。這些均表明作者研制開發的奧沙利鉑靜脈輸液符合臨床安全性方面的要求。

【參考文獻】

[1]Ibrahim A，Hirschfeld S，Cohen M H,etal. FDA drug approval summaries: oxaliplatin[J]. Oncologist，2004，9(1)：8-12.

[2]Ibrahim H,Mauvernay R Y.Pharmaceutically stable preparation of oxaliplatinum：US，5716988[P].1998-02-10.

[3]Kaplan M A,Phusanti L,Perrone R K,etal.Stablized solutions of platinum(Ⅱ)antitumor agents：US，2128641[P]. 1995-02-12.

[4]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典. 2010年版 二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄 Ⅺ D.

State Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed. Volume 2[S]. Beijing：Chinese Medical and Science Press,2010：Appendix Ⅺ D. In Chinese.

[5]蘇晨霞，李健和，易利丹，等. 奧沙利鉑靜脈輸液處方工藝優化及其穩定性考察[J].中國藥房，2013，24(13)：1201-1204.

Su ChenXia，Li JianHe，Yi LiDan，etal. Optimization of formulation and technology of oxaliplatin intravenous infusion and its stability study[J].China Pharmacy，2013，24(13)：1201-1204. In Chinese with English abstract.