2型糖尿病腎病患者血清sTWEAK蛋白含量的測定及其臨床意義

巢蓓，史偉峰，張麗榮，張志堅

（1.江蘇大學醫學院，江蘇鎮江212013；2.常州市第一人民醫院檢驗科，江蘇常州213003）

2型糖尿病腎病患者血清sTWEAK蛋白含量的測定及其臨床意義

巢蓓1，史偉峰2，張麗榮2，張志堅1

（1.江蘇大學醫學院，江蘇鎮江212013；2.常州市第一人民醫院檢驗科，江蘇常州213003）

目的：探討測定血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑（serum TNF like weak inducer of apoptosis，sTWEAK）的含量在診斷糖尿病腎病以及評價治療效果方面的臨床意義。方法：將研究對象按診斷標準分為健康對照組40例（健康組，來自體檢人群），單純2型糖尿病組60例（T2DM組），2型糖尿病合并腎病患者組103例（T2DN組）。另根據腎臟損害程度的Mogensen分級標準，將T2DN組分為3個亞組：正常白蛋白尿組（NAU）、微量白蛋白尿組（MAU）和大量白蛋白尿組（MaAU）。用ELISA法測定上述各組患者血清中sTWEAK的含量。觀察T2DN組不同等級2型糖尿病腎病患者sTWEAK含量的動態變化，以及治療后患者血清sTWEAK含量的恢復情況。結果：在上述各組人群的血清中均可測出不同水平的sTWEAK。T2DN組和T2DM組sTWEAK含量明顯低于健康組（P＜0.01）；T2DN組血清sTWEAK含量明顯低于T2DM組（P＜0.01）。隨著腎臟損害程度的增加，T2DN組患者血清sTWEAK濃度相應降低（P＜0.01），治療后血清sTWEAK濃度較治療前明顯提高（P＜0.05）。結論：動態檢測血清內sTWEAK含量對于觀察2型糖尿病腎病的病情以及評價臨床治療效果具有實際應用價值。

2型糖尿病腎??；血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑；Mogensen分級標準

目前糖尿病患者中腎病的發病率為30%～40%，在終末期腎病需要透析的患者中，糖尿病腎病占50%以上［1］。但是目前糖尿病腎病的發病機制尚不明確，臨床上仍缺乏早期檢測方法及有效防治手段。尋找新的實驗室診斷和臨床療效評價指標，對于提高糖尿病腎病的診斷和治療水平具有重要的實用價值。腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑（TNF like weak inducer of apoptosis，TWEAK）作為TNF家族的新成員，具有介導多種細胞的生長、增殖、凋亡，調節機體炎性反應和血管生成等多重生物學作用［2］，在動脈硬化［3］、炎癥［4］、腫瘤［5］等疾病的發生和發展過程中，發揮重要的調節作用。動態檢測患者血清中TWEAK（sTWEAK）水平的變化，對于上述疾病的早期診斷和病情監測具有重要的臨床意義。但是在2型糖尿病腎病的發生和發展過程中，患者（特別是中國人群）sTWEAK水平呈現怎樣的變化規律，目前尚不明確。我們通過測定sTWEAK在健康人群、單純2型糖尿病患者和2型糖尿病腎病患者血清中的含量，比較3組間的差異，探討其在診斷糖尿病腎病以及評價該疾病的治療效果方面的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象

收集2012年1月至2013年10月住院患者中，經過臨床確診的單純2型糖尿病合并腎病患者103例（T2DN組），其病程均為2～4期，排除心血管系統并發癥；單純2型糖尿病組60例（T2DM組），排除對腎臟排泄有影響的疾病及心血管系統并發癥；正常人40例作為健康對照組（健康組），選自門診體檢的健康人群，均排除糖尿病，腎臟疾病，自身免疫性疾病，冠心病，高血壓等對試驗結果有影響的疾病。3組年齡30～65歲，性別不限。根據腎臟損害程度的Mogensen分級標準，再將T2DN組分為3個亞組：正常白蛋白尿組（NAU，n＝48）、微量白蛋白尿組（MAU，n＝35）和大量白蛋白尿組（MaAU，n＝20）。對T2DN組患者采用降糖、降壓、調脂等綜合治療3個月后跟蹤隨訪，選取尿蛋白指標好轉者36例，測定sTWEAK濃度，并與治療前比較。

1.2 方法

用血清管抽取各組患者早晨空腹靜脈血，離心分離出血清待用。采用ELISA法檢測sTWEAK；高壓液相離子交換層析法檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）；酶試劑法檢測三酰甘油和膽固醇；快速法檢測高密度脂蛋白（HDL-C）；普通法檢測低密度脂蛋白（LDL-C）；尿素酶-谷氨酸脫氫酶法檢測血尿素氮濃度；苦味酸法檢測血肌酐濃度；葡萄糖氧化酶法檢測空腹血糖；免疫比濁法檢測尿微量蛋白。主要檢測儀器為酶聯免疫分光光度儀（Multiskan MK3型，芬蘭Thermo Labsystems公司產品）；血生化檢測儀（日立7600）；HbAlc測定儀（日本東芝公司HLC-723型）和IMMAGE 800尿微量蛋白檢測儀（美國貝克曼庫爾特公司）等。

1.3 統計學處理

采用SPSS 13.0軟件對數據進行統計學處理，符合正態分布或近似正態分布的計量數據用±s表示，對非正態分布數據用M（P25～P75）表示。兩組定量資料的比較采用t檢驗，多組間定量資料比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床資料與生化指標比較

各組平均年齡、性別之間的差異無統計學意義（P＞0.05）；3組間膽固醇、三酰甘油、HDL-C、LDLC的差異無統計學意義（P＞0.05）。與健康組比較，T2DM組和T2DN組的HbA1c和空腹血糖明顯增高（P＜0.05）；T2DM組和T2DN組HbA1c和空腹血糖間的差異無統計學意義（P＞0.05）。結果見表1。

2.2 T2DN組、健康組和T2DM組sTWEAK含量的比較

在健康人群、單純2型糖尿病患者及2型糖尿病合并腎病患者中均可測出sTWEAK。T2DN組sTWEAK含量［（246.8±142.1）pg／mL］及T2DM組sTWEAK含量［（598.0±209.3）pg／mL］均低于健康組［（756.9±246.7）pg／mL］；T2DN組與健康組間差異有統計學意義（t＝2.712，P＜0.01）；T2DM組與健康組間的差異無統計學意義（P＞0.05）；T2DN組與T2DM組間差異有統計學意義（t＝2.693，P＜0.01）。

表1 各組臨床資料與生化指標測定結果比較

2.3 2型糖尿病合并腎病組內各亞組患者sTWEAK含量以及腎功能指標的比較

比較3個亞組患者sTWEAK含量以及腎功能指標，結果表明，隨著腎臟損害程度的加重，血尿素氮和肌酐含量呈明顯上升趨勢；與此相反，sTWEAK的含量呈明顯下降趨勢。組間差異均有統計學意義。見表2。

表2 不同亞組的2型糖尿病腎病患者sTWEAK含量和腎功能指標的比較

2.4 T2DN治療前后sTWEAK含量的變化

對選取的36例研究對象治療前后的sTWEAK含量進行比較。結果表明，治療后sTWEAK含量［（379.1±135.4）pg／mL］較治療前［（237.2± 143.2）pg／mL］明顯升高（t＝2.243，P＜0.05）。

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病常見的并發癥，是糖尿病全身性微血管病變表現之一。由于該疾病患者體內存在復雜的代謝紊亂，腎臟損傷一旦發展到終末期，往往比其他腎臟疾病的治療更加棘手。目前臨床上對糖尿病腎病仍缺乏早期檢測手段及有效防治方法。腎功能的常規實驗室檢查指標，如尿微量蛋白，血尿素氮，血肌酐等都不能及早發現糖尿病腎病。本研究數據顯示在糖尿病腎病早期（NAU組）血尿素氮，血肌酐，尿微量白蛋白基本還在正常范圍，而sTWEAK水平已經明顯低于健康人群，提示sTWEAK可成為一種早期診斷糖尿病腎病的敏感指標。TWEAK定位于17號染色體P13.1，內皮細胞、巨噬細胞和血管平滑肌細胞都可表達TWEAK蛋白，TWEAK全長蛋白可被蛋白酶水解為可溶性的sTWEAK。sTWEAK與TWEAK具有類似的生物學活性，通過與細胞表面的特異性受體Fn14結合，激活細胞內信號通路，致血管平滑肌細胞和內皮細胞增殖和遷移，誘導巨噬細胞分泌趨化因子和炎性因子［6］。sTWEAK蛋白與血管內皮細胞功能密切相關，是其損傷的標志物［7］。而內皮細胞受損及低度炎癥反應均是糖尿病腎病的可能發病機制。因此，sTWEAK極有可能以腎病的血管內皮細胞作為靶細胞，參與糖尿病腎病的發生與發展。

本研究結果表明，T2DN組sTWEAK含量明顯低于健康組和T2DM組（P＜0.01）；隨著腎臟損害程度的增加，sTWEAK濃度相應降低（P＜0.01）；治療后sTWEAK濃度較治療前有所升高（P＜0.05）。由此推測，腎臟損傷后，機體通過某些代謝途徑使sTWEAK水平降低，但具體機制目前尚不明確。Winkles［8］提出，正常生理情況下，腎臟中Fn14受體表達相對較低，但病理情況下，Fn14表達增強，sTWEAK與Fn14結合增多可能導致sTWEAK濃度降低。內皮細胞損傷時sTWEAK分泌減少，也可能影響其血清含量。也有研究提出，因為sTWEAK與巨噬細胞表面的受體CD163結合，使TWEAK的清除增加，導致sTWEAK濃度下降［9］。本研究發現sTWEAK的含量隨著T2DN組的Mogensen等級增高而降低，提示TWEAK在糖尿病腎病的發展進程中發揮重要作用。比較同一患者治療前后sTWEAK含量，發現治療后尿蛋白指標好轉的患者，其含量有所回升。上述結果提示，當糖尿病腎病患者的病情進展時，因炎性反應加重，巨噬細胞活性增強，細胞表面的受體CD163表達增加，結合和清除TWEAK能力增強；與此同時，內皮細胞損傷加重，sTWEAK分泌減少。上述因素共同導致sTWEAK含量降低；反之，當通過治療使腎功能好轉時，機體炎性反應減輕，巨噬細胞活性下降，TWEAK的清除減少，同時內皮細胞得以部分修復，sTWEAK分泌相應增加，sTWEAK含量即隨之增高。已有研究證實sTWEAK與腎臟疾病患者微炎癥狀態相關［10］，我們的研究結果進一步提示TWEAK參與腎臟微血管病變的形成過程。

綜上所述，我們認為可以將sTWEAK作為監測糖尿病腎病的病理進程和評價臨床治療效果的一項敏感的實驗室檢測指標。關于糖尿病腎病患者sTWEAK含量發生變化的內在分子機制有待于進一步的研究。

［1］李敏州，高彥彬，馬鳴飛，等.糖尿病腎病發病機制研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（22）：165－169.

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［5］高智亭，潘海洋，劉殿昌，等.腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑在原發性肝癌患者血清中的表達及其意義［J］.中國現代普通外科進展，2013，16（2）：112－116.

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Exam ination of sTWEAK in type 2 diabetic patients w ith nephropathy and its clinical significances

CHAO Bei1，SHIWei-Feng2，ZHANG Li-rong2，ZHANG Zhi-jian1
（1.School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.Department of Clinical Laboratory，the First People′s Hospital of Changzhou，Changzhou Jiangsu 213003，China）

Objective：To explore the clinical significances of the serum TNF likeweak inducer of apoptosis（sTWEAK）in the diagnosis of diabetic nephropathy and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.M ethods：The objectswere divided into 40 cases of healthy control group（group NC）；60 cases of simple type 2 diabetesmellitus group（group T2DM）；and 103 cases of type 2 diabetic patients with nephropathy group（group T2DN）.According to the Mogensen classification of kidney damage degree，the T2DN group was further divided into three subgroups：normal albuminuria group（NAU），microalbuminuria group（MAU）and macroalbuminuria group（MaAU）.The concentrations of sTWEAK in the serum of three groupswere examined by ELISA method.In addition，the concentrations of sTWEAK in T2DN patients，before and after treatment，were compared.Results：Different levels of the sTWEAK in the three groups could be detected.In T2DN group and T2DM group，the contents of sTWEAK were significantly lower than that in NC group（P＜0.01）；in T2DN group，the content of sTWEAK was significantly lower than that in T2DM group（P＜0.01）.Along with the increase of the degree of renal damage，the concentration of sTWEAK decreased（P＜0.01）；after treatment，the concentration of sTWEAK increased obviously（P＜0.05）.Conclusion：Examination of sTWEAK in type 2 diabetic patientswith nephropathy had the clinicalsignificances in the diagnosis and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.

type 2 diabetic nephropathy；serum TNF like weak inducer of apoptosis；Mogensen grade standard

R587.1

A

1671－7783（2014）04－0320－04

10.13312／j.issn.1671-7783.y140120

巢蓓（1981—），女，江蘇常州人，主管技師，主要從事臨床醫學檢驗工作；張志堅（通訊作者），副研究員，碩士生導師，E-mail：zzj＠ujs.edu.cn

2014－05－08 ［編輯］陳海林