妊娠高血壓疾病基因組DNA標本庫建立的意義

王萍萍 黃秀清 林勇 劉黎星

【摘 要】目的：構建莆田市漢族人群妊娠高血壓疾病患者及健康對照孕婦的基因組DNA標本庫及臨床生化資料信息數據庫，為臨床妊娠高血壓疾病的遺傳易感性研究及防治提供良好的基礎及研究平臺。方法：收集妊娠高血壓疾病患者153例及健康孕婦168例外周靜脈血，設計科學而高效的實驗流程，提取基因組DNA，，并對臨床生化資料等信息數據進行采集、整理、保存，構建妊娠高血壓疾病的基因組DNA及臨床綜合信息數據庫。結果：完成福建莆田地區漢族女性妊娠高血壓疾病患者和健康孕婦外周靜脈血基因組DNA的提取，并對其臨床生化資料信息錄入計算機歸檔管理，可隨時調用和查找。結論：福建莆田地區漢族女性妊娠高血壓疾病及健康對照基因組DNA標本資源庫的初步建立為今后相關的妊娠高血壓疾病的研究搭建服務平臺。

【關鍵詞】妊娠高血壓疾??；DNA標本庫；意義

【中圖分類號】R246 【文獻標識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）06-3480-02

妊娠高血壓疾病是妊娠期特有的疾病。發病率我國9.4%～10.4%，國外7%～12%。本病命名強調生育年齡婦女發生高血壓、蛋白癥狀與妊娠之間的因果關系。[1]。而建立153例妊娠高血壓子癇前期組和168例正常妊娠組的基因DNA標本和臨床數據等綜合信息，對妊娠高血壓疾病基礎研究和臨床研究將具有重要價值，DNA標本庫的建立同其他標本一樣涉及標本的采集、處理、保存和使用以及相關信息的儲存、管理[2]。

1 對象與方法

1.1 研究對象：研究對象：本研究患者均為漢族人。遵循知情同意的原則，選取2012年至2013年福建莆田學院附屬醫院收治的妊娠高血壓疾病子癇前期患者153例（病例組），隨機選擇同期門診產檢及住院分娩的正常孕婦168例（對照組）作為健康對照，各組年齡、孕周及孕產次比較，差異無統計學意義（P>0.05）。兩組均排除原發性高血壓、肝腎疾病及其他內外科并發癥。

1.2 主要試劑：血液基因組DNA提取試劑盒（北京天根生物科技有限公司）、瓊脂糖、DNA green、DNA Maker、無水乙醇等。

1.4 血液標本的收集

取患者和正常組孕婦外周靜脈血3mI，1ml酸性枸櫞酸葡萄糖ACD抗凝，保存在-20℃冰箱中備用。

1.5 血液DNA的提取

采用天根全血基因組DNA提取試劑盒提取外周靜脈血基因組DNA.

1.6 DNA濃度及純度檢測

洗脫后的DNA溶液2.0ul，利用紫外分光光度計測得的OD值和觀察紫外吸收峰評價提取DNA的濃度和純度。

1.7 DNA標本的凍存

對于符合要求的DNA，采用小容量的聚丙烯管分裝保存，避免使用時反復凍融使DNA片段變小。做好試管編號和貼標簽分裝后直接放入-80℃冰箱凍存，并登記數據，錄入電腦。

2 結果

2.1血液DNA標本的收集和信息的錄入

已完成妊娠高血壓疾病子癇組和健康孕婦外周靜脈血基因組DNA的提取并凍存。采用Excel 軟件，對所收集標本的流行病學及臨床資料信息錄入計算機歸檔管理。

2.1.1 錄入標本信息，冰箱號、原裝號、分裝號、標本量、采集日期、凍存日期等。

2.1.2 錄入病歷信息， 如患者姓名、性別、年齡、籍貫、民族、病例號、臨床診斷、主要生化指標、治療等。

2.1.3標本的應用記錄：使用日期、使用編號、使用量、使用人。

2.2如圖一，外周血基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳結果

結果顯示外周血基因組DNA條帶清晰，無雜帶及拖尾現象，說明成功提取DNA，可用于后續的實驗。

3 討論

妊娠高血壓疾病是導致胎兒早產、胎死宮內以及胎盤早期剝離、孕產婦和圍產兒病死率及死亡率升高的主要原因，病因至今不明，病因主要有4種學說：免疫學說、胎盤或滋養細胞缺血學說、氧化應激學說、遺傳學說[3]。妊娠高血壓疾病發生的高危因素除受到低齡或高齡初產、營養缺乏、多胎妊娠和曾有原發性高血壓、腎炎、糖尿病病史等環境因素影響外，還具有明顯的遺傳傾向[4]。

妊娠高血壓疾病目前沒有有效的早期診斷方法，不能做到早期的防治，只能根據患者的臨床癥狀和結合臨床生化指標來判斷。近年來，隨著生物醫學研究的深入， 臨床醫學、生物化學、免疫學、酶學、基因組學和分子生物學等學科技術的高速發展。每一份DNA標本都可視作一個小型的遺傳信息平臺，經過標準規范的保存并且擁有完整病例信息的標本不僅是現在研究計劃的資源保障，而且在未來基礎和臨床研究中可繼續扮演信息資源庫的角色[5]。為此，通過收集妊娠高血壓疾病患者的外周靜脈血，提取血液基因組DNA進行深入研究，有利于臨床上早日對妊娠高血壓疾病早期做出安全準確的診斷。妊娠高血壓疾病基因組DNA標本庫，是研究妊娠高血壓疾病的基礎，可適用于酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等重大科研實驗，為科學研究提供研究素材和臨床研究提供標本來源。標本信息的記錄，可以方便在系統上查詢標本的臨床詳細信息，高效的利用標本資源，使研究人員使用時發現新的診斷標記和新靶點的可能[6]。建立妊娠高血壓疾病基因組DNA標本資源庫， 為今后相關的妊娠高血壓疾病的研究搭建服務平臺。因此，充分合理利用標本庫的巨大資源優勢， 協助深入開展妊娠高血壓疾病的基礎研究， 對保障母嬰健康、降低患病率及孕產婦死亡率具有重要意義。

參考文獻

[1] 樂 杰主編. 妊娠期高血壓疾病. 婦產科學[M]. 第7版. 北京： 人民衛生出版社， 2012： 92-99.

[2] 楊春，葛蓮英，賀海平等.腫瘤血清標本庫的建立及意義[J].中國癌癥防治雜志，2009，1（4）：307-309.

[3] 林其德.妊娠高血壓綜合征病因學研究進展與展望[J].中華婦產科雜志，2003，38（8）：471-473.

[4] 鄭四維.妊娠高血壓疾病的相關因素臨床分析[J]. 中國醫藥指南，2010，8（11）：79-80.

[5] 從憲玲，孫然，王涵，孔祥波，張學文.國內外組織標本庫發展的現狀及啟示[J]. 中國實驗診斷學，2010，14（1）：148-150.

[6] 楊宗澤，吳正谷，譚維維等. 腫瘤組織標本庫的創建與管理 [ J].華西醫學， 2012， 27（5）767-770.