金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法的研究進展

鐘毓

【中圖分類號】R378.11 【文獻標識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）06-3532-01

金黃色葡萄球菌是造成人類食物中毒的常見致病菌。近年來，我國由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件在全國已占據第四位。金葡腸毒素是金黃色葡萄球菌食物中毒的主要因子，它是一類結構相關、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白質，共有腸毒素A-E、G-R共17個血清型。據報道，攝入1ug/kg的金葡腸毒素即能引起嘔吐和腹瀉等癥狀，嚴重者可致昏迷有生命危險[1]?！镀咸亚蚓澄镏卸镜脑\斷標準、判定原則和處理原則（WS/T 80-1996）》中規定“從中毒食品、患者吐瀉物中經培養檢出金黃色葡萄球菌，菌株經腸毒素檢測證實在不同樣品中檢出同一型別腸毒素?！辈拍芘袛嗍怯纱耸澄镆鸬氖澄镏卸?。因此，準確、快速的檢測金葡腸毒素能為因金黃色葡萄球菌引起的食品安全事故處理提供重要依據?，F就金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測方法研究進展作一綜述。

1動物實驗

生物學試驗是較早采用的一種金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法。通常采用染毒食品或分離的產腸毒素的菌株培養液喂飼敏感動物，或用腹腔注射及皮膚試驗，然后觀察動物可能出現的各種異常的生理或形態變化，這是測定食物中腸毒素較早采用的一種方法。由于試驗動物對腸毒素不敏感或感應性差，無特異性，且易產生假陽性，實用價值低，目前基本不采用。

2放射免疫法（RIA）

經典放射免疫分析是采用標記抗原（Ag*）和非標記抗原（Ag）競爭性結合定量抗體（Ab）的方法。Ag*和Ag結合抗體的能力相同，可形成Ag*Ab復合物和Ag Ab復合物。當Ag*定量同時限制抗體濃度。且Ag*和Ag的量大于抗體的結合數目時，Ag*和Ag通過競爭方式與抗體結合。隨著非標記抗原的增加標記抗原與抗體的結合機會減少，形成Ag* Ab復合物減少，從而放射量也降低。RIA法將同位素測定的高靈敏性和抗原抗體反應的高度特異性有效結合起來，特異性強，敏感性高，檢測樣品中各型SE可達1ng/mL。[2]。但該方法存在放射性污染和需要專門的防護設備、檢測儀器等問題，也不易推廣。

3酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA方法基本原理是將抗原或抗體結合到某種固相載體表面，檢測時將樣品和酶標抗原或抗體與結合在固相載體上的抗原或抗體結合形成復合物，反應終止，結合在固相載體上的酶標抗原或抗體量與標本中待測抗原或抗體量相關，經洗滌除去未結合物，然后加入底物顯色，結合物中的酶水解底物，生成有色的反應物，根據顏色的深淺，進行檢測，即可確定被測物含量。目前較常用的有微孔板法（ELISA）和酶聯熒光免疫法（EIFA）。

3.1酶聯熒光免疫法（EIFA），其原理是將鼠抗葡萄球菌腸毒素單克隆抗體SEA-E同時包被在固相容器（SPR）上，通過樣品在SPR內定時循環，樣品中的腸毒素與多個抗體結合，未結合的樣品則被洗去?？贵w-堿性磷酸酶復合物通過SPR循環并與SPR壁上的相應腸毒素抗原結合，最后洗去未結合復合物。熒光底物在SPR內外反復循環，SPR上存留的酶催化底物分解為熒光底物。本法可采用自動化VIDAS設備的光掃描儀在450nm處自動測定熒光強度。[3]

3.1微孔板法（ELISA）與酶聯熒光免疫法（EIFA）的檢測原理相似，均為雙抗體夾心法。不同之處在于，微孔法所用的酶底物是顯色酶底物而非熒光酶底物，實驗結果是通過顏色變化來判斷。

4聚合酶鏈反應（PCR）技術

聚合酶鏈反應（PCR）技術是通過DNA聚合酶擴增基因為檢測特異基因片斷提供了可能性。PCR模擬DNA的自然復制過程，引物與DNA模板互補結合以后，在DNA聚合酶的作用下，按照堿基配對的原則，從引物開始合成與模板DNA互補的DNA鏈。經變性、退火，延伸等一次循環，DNA鏈數量增加一倍。目前較為常用的有定性PCR和熒光定量PCR法兩種。熒光PCR技術在普通PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累檢測整個PCR反應的進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量。[4]

總之，動物實驗方法由于靈敏度低，結果不準確，已經逐漸不為采用。目前，金葡腸毒素的檢測方法主要有微孔析法（ELISA）、酶聯熒光免疫法（ELFA）、PCR法和熒光PCR法。前兩種方法的檢測對象是金葡菌產生的腸毒素蛋白質，后兩種方法則是檢測菌株的腸毒素基因。ELFA法具有靈敏度高，對樣品中金葡菌被熱處理破壞時，對熱穩定的腸毒素仍能檢出。熒光PCR法的優勢在于可以分型、試劑便宜、操作簡單、無需專用儀器。在檢測工作中，可以根據各自的儀器設備條件以及相應技術選擇適當的檢測方法。

參考文獻

[1][3][4]王冰，黎桂蓮，陳妙玲，等.3種金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法的評估[J].中國衛生檢驗雜志，2013，23（2）：359-362.

[2]梁毅珊.金黃色葡萄球菌腸毒素及其檢測方法的研究進展[J].中國熱帶醫學，2008，8（9）：1658-1659.