神經肽Ghrelin與Nesfatin—1在海人酸致癇大鼠血清中的表達變化及意義

褚旭 孔慶霞

【摘 要】目的：分析神經肽Ghrelin與Nesfatin-1在海人酸致癇大鼠血清中的表達變化及意義。方法：隨機將海人酸致癇后的生理鹽水灌注動物胃內（觀察1組），海人酸致癇后的丙戊灌注動物胃內（觀察2組），規定兩組分貝以3h、6h、12h、 24h及3d、7d、14d為時點亞組；同時建立空白組（對照1組）、假手術組（對照2組），然后用放射免疫法、ELISA以及免疫組化法來檢測其血清變化情況。結果：Ghrelin、Nesfatin-1的陽性表達是細胞質里面有橢圓形/圓形棕黃色顆粒，和對照1組、對照2組相比，觀察1組、觀察2組各個時間點的Ghrelin表達都明顯降低（P<0.05）；同時觀察1組與觀察2組相比，觀察2組的Ghrelin表達水平高，特別在灌胃1天、7天后差異很明顯（P<0.05），但<對照1組。觀察1組、觀察2組各個時間點的Nesfatin-1表達水平均提高（P<0.05），但兩組各個時間點的Nesfatin-1表達水平相比，觀察2組有一定程度的降低（P<0.05），但>對照1組。結論：通過檢測血清?；疓hrelin、Nesfatin-1的水平，能夠了解下丘腦中對應神經肽的變化方向，進而為臨床診治癲癇疾病、評價療效提供有效參考指標。

【關鍵詞】神經肽類；Ghrelin；Nesfatin-1；大鼠；血清

【文章編號】1004-7484（2014）06-3434-01

Ghrelin、Nesfatin-1是人們攝食過程中，能夠調節平衡能量的兩條重要神經肽?，F階段醫學界的專家們通過研究發現這兩條神經肽和癲癇疾病發作程度、治療效果有緊密聯系[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

用清潔級別為（6～8）周齡的雄性Sprague—Dawley大鼠作為本地實驗動物，其體重為（250～280）g，用單籠飼養。隨機將海人酸致癇后的生理鹽水灌注動物胃內（觀察1組），海人酸致癇后的丙戊灌注動物胃內（觀察2組），規定兩組分貝以3h、6h、12h、 1d及3d、7d、14d為時點亞組，每個時點6只。同時建立空白組（對照1組）、假手術組（對照2組），每組都是6只。

將海人酸融入無菌生理鹽水中，達到1mg/ml的濃度，用65mg/kg濃度為0.5%的戊巴比妥鈉麻醉大鼠，根據標準的顱骨水平位固定好大鼠頭部，并參照大鼠腦立體定位圖譜，再用微量注射器與杏仁核保持垂直水平，在硬膜下8.5mm位置，在15分鐘之內注射1.0ul的海人酸，大約過了5分鐘后拔針。林對對照2組注入1ul的生理鹽水，按照Racine分級來評定癲癇發作程度，當大鼠出現>Ⅴ級且連續5次發作說明模型成功。

1.2 實驗方法

①采集標本，首先采集2ml大鼠尾靜脈血，端頭取鬧，當血液在室溫條件下凝固約（10～20

）分、以300r/mim的速度離心20min之后收集起來，放置在零下20度的環境中保存。用常規石蠟包埋腦組織，實施連續冠狀切片，厚度為6um，并將其放置在經防脫片劑處理后的載玻片上面。在溫度為60℃的烤箱中過夜。

②用放射免疫法（RIA）檢測Ghrelin、用酶聯免疫吸附法（ELISA法）檢測Nesfatin-1，同時用免疫組華發檢測下丘腦Ghrelin、Nesfatin-1。

1.3 統計學方法

2 結果

Ghrelin、Nesfatin-1的陽性表達是細胞質里面有橢圓形/圓形棕黃色顆粒，和對照1組、對照2組相比，觀察1組、觀察2組各個時間點的Ghrelin表達都明顯降低（P<0.05）；同時觀察1組與觀察2組相比，觀察2組的Ghrelin表達水平高，特別在灌胃1天、7天后差異很明顯（P<0.05），但<對照1組。觀察1組、觀察2組各個時間點的Nesfatin-1表達水平均提高（P<0.05），但兩組各個時間點的Nesfatin-1表達水平相比，觀察2組有一定程度的降低（P<0.05），但高于對照1組。

3 討論

癲癇作為臨床常見的神經系統疾病之一，嚴重威脅著人類健康，當前診斷癲癇、評價治療該疾病的效果主要借助神經影像學技術、患者臨床特征等。隨著對癲癇疾病和神經肽類物質之間聯系研究的深入，大多數醫學專家們認為，當患者癲癇發作時，其機體內神經肽水平會發生短暫、明顯的變化，這可以當做評價影響腦功能代謝、神經興奮性變化的重要方法[2]。

全部海人酸致癇大鼠都誘發了癲癇，致癇組大鼠給藥以后處于麻醉未清醒期，待（82～86）分之后出現節律性咀嚼，但在其前肢抬起，發生抽搐之后又迅速跌倒，以抖動狀態結束，疾病發作時間為（2.01～2.73）分。給藥后（6～8）小時間斷性發生點頭、前肢陣攣以及面部肌肉抽搐情況，給藥后（8～10）h大多數大鼠恢復正?；顒?，無顯著性癲癇行為，（1～10）天后發生反復自發性發作，每隔7天約（1～3）次。本研究表明，海人酸致癇大鼠模型能夠較好地模擬出人類顳葉癲癇疾病的發生、傳播、形成過程。定量、定性檢測下丘腦旁核范圍內分泌的Ghrelin、Nesfatin-1，然后和對照1組、對照2組進行比較可知，致癇組的Ghrelin表達降低，Nesfatin-1表達升高，這說明了癲癇發作時神經肽表達會產生明顯的變化。

總之，通過檢測血清?；疓hrelin、Nesfatin-1的水平，能夠了解下丘腦中對應神經肽的變化方向，進而為臨床診治癲癇疾病、評價療效提供有效參考指標。

參考文獻：

[1] 劉諍，王峰.海人酸致癇大鼠神經肽Ghrelin和Nesfatin-1的表達[J].中華醫學雜志，2011，5（7）：102-103.