H P L C法測定苯磺酸氨氯地平片溶出度的研究

王正鳳 劉洪軍 賀麗英 鄭小鋒

（西南藥業股份有限公司藥物研究所，中國 重慶400038）

苯磺酸氨氯地平片屬于二氫吡啶類鈣離子通道拮抗藥，用于原發性高血壓的治療，由美國輝瑞制藥公司于1992年研發上市，商品名絡活喜?，上市藥品規格主要為5mg,療效顯著[1]?，F在國內進行申報以及批準生產的有2.5mg、5mg、10mg三種規格，以滿足不同情況下的用藥需求。由于該品種的規格較小，已有研究[2-4]一般采用《中國藥典》附錄“溶出度測定法”的第二法（介質體積為500ml）或第三法進行溶出度的測定[5]。根據國內外藥品相關指導原則的要求，隨著分析技術特別是高效液相色譜應用的普及，供試樣品的濃度可以低至ng/ml，已經大大突破了以往小規格藥品為滿足紫外分光光度法測定而采用的小體積溶出條件，第三法（小杯法）將逐步不再采用。本研究考察了三種規格樣品用同樣的條件溶出后，直接以高效液相色譜進行分析的方法，并對方法進行了驗證。結果表明，方法準確、簡便、快速，適用于多種規格苯磺酸氨氯地平片溶出度的測定。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

Agilent 1260(VWD)高效液相色譜儀（安捷倫科技）；ZRS-8G智能溶出儀 （天津天大天發）；TG332A微量分析天平 （湘儀儀器廠）；METTLERAB-204E分析天平（梅特勒公司）。

1.2 試藥

苯磺酸氨氯地平對照品（中國藥品生物制品檢定所）、苯磺酸氨氯地平片（西南藥業股份有限公司）；甲醇（色譜純，上海國藥試劑集團）、磷酸二氫鉀（分析純，重慶川東化工廠）。

2 方法

2.1 溶出方法

取本品，照溶出度測定法[中國藥典2010年版二部附錄X C第二法]，以鹽酸溶液（0.9→1000）500ml為溶劑，轉速為每分鐘 75轉，依法操作，經30分鐘時，取溶液適量，濾過，續濾液作為供試品溶液；另取苯磺酸氨氯地平對照品約14mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇適量溶解后加鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，依法測定并計算出每片的溶出量，限度為標示量的80%，應符合規定。

2.2 分析方法（色譜條件與系統適用性試驗）

色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18 柱（150×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.03mol/L 磷酸二氫鉀溶液（70：30）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：237nm；柱溫25℃；進樣體積10μl；理論塔板數按氨氯地平峰計算應不低于1000。

2.3 溶液的配制

2.3.1 標準儲備液

精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品，置100ml容量瓶中，加甲醇適量溶解后加入鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，使成含氨氯地平0.2 mg/ml的溶液。

2.3.2 對照溶液

精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品，置100ml容量瓶中，加甲醇適量溶解后加入鹽酸溶液（0.9→1000）稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量該液再稀釋，使成含氨氯地平0.01 mg/ml的溶液。

2.3.3 樣品供試液

分別取2.5mg 20141101批、5mg 20141101批、10mg 20141101批三種規格各1個代表批樣品，依法進行溶出試驗，取樣濾過即得。

2.3.4 陰性樣品及溶液

精密稱取空白輔料約70 mg，置500ml容量瓶中，先加入250ml溶劑，超聲30分鐘，用溶劑定容至刻度，濾過，即為陰性對照溶液。

3 結果

3.1 專屬性及系統適用性驗證

取空白溶劑、陰性對照溶液、對照溶液和樣品供試液，采用擬定的色譜條件分別進行液相色譜分析。結果表明，陰性對照和空白溶劑對氨氯地平峰無干擾，樣品供試液中也未發現干擾峰，說明方法專屬性強，見圖1；系統適用性溶液理論塔板數大于1000。

3.2 線性及線性范圍

取標準儲備液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml， 分別置于50ml容量瓶中，用溶劑稀釋定容，即得線性試驗樣品溶液。該六份樣品代表的濃度分別為 2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20.1μg/ml、24.1μg/ml，代表的范圍為2.5 mg規格標準濃度的60%至10 mg規格標準濃度的120%。精密量取上述溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積Y對氨氯地平濃度X進行線性回歸，得回歸方程為：y=53.688x+3.1784，r=0.9999(n=6)。表明在濃度為 2μg/ml～24.1μg/ml的范圍內，氨氯地平峰具有良好的線性關系。

3.3 精密度

3.3.1 重復性

取同濃度的樣品供試液6份及對照溶液，分別精密量取注入色譜儀，記錄色譜圖，統計6份溶出度結果的相對標準偏差，結果得到RSD(%)=0.12。

3.3.2 中間精密度

取同一批次的樣品，配制相同濃度的6份樣品供試液及對照溶液，在不同的時間，更換人員、色譜柱和液相儀進行中間精密度試驗，最后對12個溶出度數據進行相對標準偏差的統計，得到RSD(%)=0.27。

3.4 加樣回收率

分 別 精 密 量 取 儲 備 液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml，置已加入了對應量輔料的50 ml容量瓶中，用溶劑溶解（超聲30分鐘）并稀釋至刻度，濾過，即得到從2.5 mg規格溶出60%至10 mg規格溶出120%之間6個濃度水平的加樣回收率供試液；精密量取上述溶液及對照溶液，依法測定，每個水平平行測定3次，計算每次回收率結果，并統計共18個結果的相對標準偏差。得到回收率在99.6%-101.4%范圍內，且18個數據的RSD(%)=0.36。

3.5 濾膜的影響

取樣品供試液，先用國產醋酸纖維素膜（上海迪清過濾技術有限公司，0.45μm規格）過濾，取續濾液即得第一次濾過供試液，取部分該液，用新的相同濾膜再過濾，續濾液即得第二次濾過供試液。分別對兩種供試液進行色譜分析，每樣2次，記錄色譜圖，統計4次峰面積的相對標準偏差。測定結果基本一致，RSD（%）=0.78，濾膜基本無影響。

3.6 溶液的穩定性

考慮到苯磺酸氨氯地平在強酸下極不穩定易發生降解的實際情況，必須考察配制好的樣品供試液在常溫下的穩定性，以進一步確定試驗條件和注意事項。 筆者分別在放置 0 h、2h、4 h、6 h、8h、16h 時取樣進行分析，結果表明，在該酸性介質中，主藥的穩定性較差，但在取樣后盡快（2小時內）測定，結果與0小時基本一致，穩定性符合要求。

3.7 耐用性

取對照溶液和樣品供試液，在分別流速變化0.2ml/min、柱溫變化5℃、采用不同廠牌及規格的色譜柱以及標準條件下，每個條件測定兩次，統計每個變動下得到的4個測定結果與標準條件下得到的2個測定測定結果共6個數據的相對標準偏差，結果流速變化下溶出的RSD(%)=0.15、采用不同廠牌和規格的色譜柱下含量的RSD(%)=0.12、柱溫變化下含量的RSD(%)=0.21，且各條件下得到的結果均在98.0%-102.0%范圍內。

3.8 樣品的測定

取每個規格各1個代表批樣品，照HPLC法進行溶出度的測定，結果測得三批樣品的溶出度分別為2.5mg(20141101批)：99.7%、98.6% 、98.9% 、99.5% 、99.8% 、99.4% ； 5mg(20141101 批 )：100.7% 、99.6% 、98.7% 、99.1% 、99.4% 、99.1% ；10mg(20141101 批 )：101.2% 、100.8%、100.9%、101.5%、99.8%、100.4%，全部符合規定。

4 討論

苯磺酸氨氯地平片法定標準或已報道的文獻中，一般采用紫外-可見分光光度法進行溶出供試液的分析測定，方法專屬性較HPLC法低，在使用酸性介質溶出后，即使有明顯降解情況，由于降解產物本身也有較強的紫外吸收，亦不能通過測定體現出來；而HPLC法則清楚的體現了這種變化，由于主藥在酸性環境中更容易發生氧化降解，故取樣后需盡快上機測定，才能保證結果的準確、可靠。

在三種規格中，即使是最小規格（2.5mg）供試液主峰的S/N也遠遠大于定量限，故在進行溶出試驗時，如果采用標準的900ml或1000ml的介質體積，仍能滿足取樣濾過后直接進行HPLC法測定的靈敏度要求。

［1］王全洪,吳丹,等.HPLC法同時測定苯磺酸氨氯地平原料藥及片劑中8種已知有關物質的含量[J].中國藥房,2013,24(25)：2369-2372.

［2］程敏毓,劉放.不同廠家苯磺酸氨氯地平口服制劑溶出度比較[J].海峽藥學,2010,1(3)：18-21.

［3］蘇芳,孔愛英,等.不同廠家苯磺酸氨氯地平片溶出度的考察[J].解放軍醫學雜志,2012,24(3)：44-46.

［4］王方,劉祖雄.苯磺酸氨氯地平分散片的制備及溶出度測定[J].臨床軍醫雜志,2011,9(2)：355-358.

［5］國家藥典委員會.《中國藥典》2010 年版(二部)[M].2010：附錄 85-87.